摘要：背景:角膜移植后40%～60%的患者发生了角膜新生血管,移植后的角膜新生血管加速了角膜免疫排斥反应的发生。抑制角膜移植后的角膜新生血管有利于延长植片的存活时间,提高角膜移植手术的成功率。目的:探讨强力霉素对角膜移植后角膜新生血管的抑制作用。设计、时间及单位:随机对照,动物实验观察,于2007-03/08在中山大学中山眼科中心(眼科学国家重点实验室,2006DA105054)完成。材料:健康清洁级SD大鼠48只作为角膜移植受体,Wistar大鼠24只作为供体,受体眼为右眼,供体眼为双眼。CD31-PE荧光抗体由美国Sigma公司提供,VEGFELISA试剂盒由美国RapidBio公司提供。方法:建立大鼠同种异体角膜移植模型,48只受体鼠随机分为2组:盐水对照组和强力霉素用药组,24只/组。术前20min以1%阿托品滴眼液散瞳,植片直径为2.75mm,植床直径为2.5mm。术后盐水对照组右眼结膜囊内滴用生理眼水,3次/d;强力霉素用药组右眼结膜囊内滴用1%强力霉素眼药水,3次/d;直至术后30d。主要观察指标:全角膜免疫荧光法检测角膜移植后角膜新生血管的发展,ELISA动态检测角膜组织中VEGF蛋白的表达。结果:①强力霉素用药组植片存活(20.67±3.01)d,比盐水对照组(9.67±2.73)d明显延长(P<0.01)。②角膜移植后3,7,14d盐水对照组新生血管面积相对百分比分别为(4.00±1.00)%,(14.33±4.04)%,(31.33±3.51)%;强力霉素用药组新生血管面积相对百分比分别为(1.67±1.15)%,(4.67±1.53)%,(18.33±1.53)%。其中7,14d时两组比较差异显著(P<0.05)。③角膜移植后强力霉素用药组血管内皮生长因子蛋白水平均低于盐水对照组(P<0.01)。角膜移植后3,7,14d,盐水对照组血管内皮生长因子蛋白水平为(541.00±75.44),(960.00±90.14),(976.00±130.41)ng/g;强力霉素用药组为(115.33±9.29),(239.00±41.62),(361.00±65.20)ng/g,各时间段比较差异显著(P<0.05)。结论:强力霉素能抑制角膜移植后角膜新生血管的生长,延长植片的生存时间。

摘要：背景:单纯药物治疗高危真菌性角膜溃疡效果不佳,目前穿透性角膜移植已是挽救眼球和视力的主要手段。目的:观察穿透性角膜移植治疗高危真菌性角膜溃疡的随访结果。设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2000-01/2007-01在青岛大学医学院附属医院眼科完成。对象:选择在青岛大学医学院附属医院行穿透性角膜移植的高危真菌性角膜溃疡患者51例(51眼),其中12例穿孔,前房积脓35例,移植前合并白内障8例,合并青光眼5例。方法:移植前给予抗真菌联合抗细菌治疗,51例患者均在入院4d内完成了穿透性角膜移植,移植后局部和全身给予抗炎和抗真菌药物治疗,随访6～24个月。主要观察指标:观察移植后视力变化和真菌复发、植片排斥、继发性青光眼、并发性白内障等并发症的发生情况。结果:①51例患者中18例随访6～12个月,25例随访13～18个月,8例随访19～24个月。②49例患者(占96.1%)成功地保存了眼球,48例(占94.1%)患者视力有不同程度提高。③移植后6例患者(占11.8%)真菌复发,其中4例药物治疗后治愈,2例摘除眼球;18例患者(占35.3%)植片发生排斥,其中13例经抗排斥治疗植片转为透明,5例因药物治疗无效而行二次穿透性角膜移植;4例患者(占7.84%)植片发生溃疡,其中3例治愈,1例因合并角膜内皮功能失代偿而行再次穿透性角膜移植;7例患者(占13.7%)继发青光眼,眼压均得到成功控制;6例患者(占11.8%)发生并发性白内障,其中3例行白内障摘除。其余患者移植后随访期间眼部情况稳定,植片保持透明。最终随访时,45例患者(占88.2%)角膜植片透明。结论:对于保守治疗无效的高危真菌性角膜溃疡患者,穿透性角膜移植是挽救眼球和视力的有效方法。

摘要：目的:探讨穿透性角膜移植术后植片排斥的危险因素。方法:回顾性分析我院2001-01/2008-01实施穿透性角膜移植发生排斥反应的病例,分析各因素在植片排斥反应病例中所占的比率及各种病例中植片排斥的发生率。结果:总排斥反应率为31.0%,其中普通组为25.5%,高危组为59.4%(P<0.05)。眼部化学伤排斥反应发生率最高48.1%(P<0.05)。高危组发生排斥反应早且病情严重。结论:引起角膜植片排斥的多种因素中,不同疾病的穿透性角膜移植的发生率不同,排斥反应的发生与术前原发病,植床情况,手术设计操作术后预防有密切关系,其中植床新生血管是植片排斥的高危因素。

摘要：背景:单纯药物治疗高危真菌性角膜溃疡效果不佳,目前穿透性角膜移植已是挽救眼球和视力的主要手段。目的:观察穿透性角膜移植治疗高危真菌性角膜溃疡的随访结果。设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2000-01/2005-01在青岛大学医学院附属医院眼科完成。对象:选择在青岛大学医学院附属医院行穿透性角膜移植的高危真菌性角膜溃疡患者36例(36眼),其中9例穿孔,前房积脓25例,术前合并白内障6例,合并青光眼3例。方法:移植前给予抗真菌联合抗细菌治疗,36例患者均在入院4d内完成了穿透性角膜移植,术后局部和全身给予抗炎和抗真菌药物治疗,随访6～24个月。主要观察指标:观察移植后视力变化和真菌复发、植片排斥、继发性青光眼、并发性白内障等并发症的发生情况。结果:①36例患者中13例随访6～12个月,17例随访13～18个月,6例随访19～24个月。②35例患者(97%)成功地保存了眼球,34例(94%)患者视力有不同程度提高。③移植后4例患者(11%)真菌复发,其中3例药物治疗后治愈,1例摘除眼球;13例患者(36%)植片发生排斥,其中10例经抗排斥治疗植片转为透明,3例因药物治疗无效而行二次穿透性角膜移植术;3例患者(8%)植片发生溃疡,其中2例治愈,1例因合并角膜内皮功能失代偿而行再次穿透性角膜移植;5例患者(14%)继发青光眼,眼压均得到成功控制;4例患者(11%)发生并发性白内障,其中2例行白内障摘除。其余患者移植后随访期间眼部情况稳定,植片保持透明。最终随访时,32例患者(89%)角膜植片透明。结论:对于保守治疗无效的高危真菌性角膜溃疡患者,穿透性角膜移植是挽救眼球和视力的有效方法。

摘要：目的探讨自然杀伤T细胞（NKT）对大鼠角膜移植免疫排斥反应的防治作用。设计实验性研究。研究对象8只Fisher 344大鼠为供体，16只Lewis大鼠为受体。方法无菌取Lewis大鼠脾脏中淋巴细胞，RPMI1640培养基体外培养三周后，流式细胞仪分选出NKT细胞（浓度5×10^4／ml）。取8只Fisher 344大鼠为供体，16只Lewis大鼠为受体行穿透性角膜移植术。将受体大鼠随机分为治疗组和对照组，每组各8只。治疗组在手术结束时结膜下注射0．1ml上述浓度的NKT细胞，对照组注射相同体积生理盐水。术后观察记录植片的存活情况，术后第10天，每组2只大鼠取材，行组织病理学、免疫组织化学和流式细胞仪检测。主要指标角膜植片平均存活时间，组织病理学及免疫组织化学染色检查淋巴细胞浸润情况。结果对照组角膜植片平均存活时间为（8．00±1．58）天，NKT细胞治疗组为（26．00±1．34）天。组织病理学检查可见对照组大鼠角膜植片重度水肿，角膜基质纤维板层排列紊乱，大量炎性细胞浸润，新生血管长入植片。而治疗组植片仅表现为轻度水肿，少量炎性细胞浸润。免疫组织化学染色可见对照组植片中大量CD4＋和CD8＋淋巴细胞浸润，治疗组中仅见少量CD4＋和CD8＋淋巴细胞浸润。流式细胞仪检查结果表明在治疗组脾脏中NKT细胞为（3．90±0．32）％，明显高于对照组（1．85±0．21）％；外周血中治疗组NKT细胞为（1．34±0．12）％，对照组为（3．59±0．23）％。结论NKT细胞结膜下注射可延长角膜移植片存活时间，为防治角膜移植免疫排斥反应提供新的思路。

摘要：目的通过观察不同种族问穿透性角膜移植手术的效果，总结不同种族之间穿透性角膜移植的可行性。设计回顾性病例系列。研究对象北京同仁眼科中心2002年10月至2003年3月因角膜白斑、角膜内皮失代偿、角膜移植术后植片失败等接受穿透性角膜移植术患者10例（10眼）。方法采用国际组织库提供的中期保存角膜植片进行穿透性角膜移植术，其中高加索人种角膜8片，西班牙人种1片，非洲人种1片。术前收集患者资料，术后进行随访和临床观察，评价角膜植片的存活情况以及疗效。主要指标视力，角膜植片透明度，角膜新生血管分级。结果10例患者平均随访（12．6±3．86）个月，4例患者角膜植片基本保持透明，视力平均提高1-2行。6例（60％）患者出现植片混浊、植片水肿、新生血管长人等排斥反应，视力不提高。结论本文小样本观察显示不同种族角膜供体可以用于穿透性角膜移植治疗。

摘要：目的检测超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)体外活化的小鼠淋巴细胞的免疫耐受功能,探讨该细胞对小鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治作用。设计实验研究。研究对象14只BALB/C小鼠作为供体,28只C57BL/J小鼠作为受体。方法无菌取C_(57)BL/J小鼠脾脏淋巴细胞,制备成5×106/ml的混悬液,分别与SEB和刀豆蛋白A(ConA)体外共培养,MTT法测定细胞增殖。用流式细胞仪测定SEB和ConA体外活化的淋巴细胞在第0、6天时的CD4^+CD25^+调节性T细胞和CD3^+NK1.1^+NKT细胞百分比。以BALB/c小鼠为供体,C_(57)BL/J小鼠为受体,建立小鼠高危角膜移植动物模型,术后分为实验组、对照组,并分别结膜下注射0.05 ml培养6天的SEB活化的淋巴细胞悬液(浓度1×10~6个细胞/ml)及相同体积的生理盐水,术后观察记录植片的存活状况,并进行组织病理学检查和免疫组织化学检测。主要指标角膜植片平均存活时间,组织病理学及免疫组织化学染色检查淋巴细胞浸润情况。结果SEB、ConA与淋巴细胞共培养前OD_(570nm)值均为0.15±0.01(n=6),共培养后第3天为0.25±0.07和0.59±0.06,第6天为0.43±0.07和0.35±0.05。SEB组培养后的淋巴细胞中CD3^+NK1.1^+NKT细胞由0天时的(1.21±0.19)%升高到(5.67±0.25)%,CD4^+CD25^+调节性T细胞由(0.37±0.06)%升高到(0.98±0.12)%。活化淋巴细胞结膜下注射后小鼠角膜植片平均存活(28.60±3.75)天,而生理盐水组为(22.13±4.91)天,两者比较差异有统计学意义(P=0.006)。HE染色显示对照组植片中度水肿,角膜基质纤维板层结构排列紊乱,有炎性细胞浸润,植片中可见新生血管。而实验组植片仅轻度增厚,基质板层纤维排列规则,未见炎性细胞浸润及新生血管长入。免疫组织化学染色显示治疗组小鼠角膜植片中CD4^+和CD8^+淋巴细胞数量较对照组明显减少。结论SEB和ConA均能活化小鼠淋巴细胞并使其增殖。SEB组培养后的淋巴细胞中CD3^+NK1.1^+NKT细胞和CD4^+CD25^+调节性T细胞含量比培养前升高。SEB活化的小鼠淋巴细胞具有免疫耐受功能,能够延长小鼠高危角膜移植植片的存活时间。

摘要：目的探讨环孢素A纳米粒滴眼液对大鼠高危角膜移植术后排斥反应的抑制作用。设计实验研究。研究对象Lewis大鼠50只为受体,F344大鼠25只为供体。方法 50只Lewis大鼠右眼采用缝线法诱导角膜新生血管形成,第7天新生血管到达角膜中周部时,全部行穿透性角膜移植术。因术后滴眼液不同将大鼠随机分为5组(A到E组,每组10只大鼠),A组为对照组,给予环孢素A纳米粒滴眼液的基质点药,B组为普通环孢素A滴眼液组,C组、D组、E组分别为0.5%、1%、2%环孢素A纳米粒滴眼液组。术后各组滴用相应的滴眼液,每日3次。拍摄大鼠角膜照片每日1次至14天,以后每2日拍摄角膜照片1次至28天。以角膜植片水肿、混浊、新生血管评分之和为角膜排斥反应指数(RI),记录角膜存活时间(从角膜移植开始到RI=6的时间),术后第14天每组取2只大鼠眼球,以光镜进行角膜病理学观察。主要指标角膜植片存活时间、角膜排斥反应指数(RI),角膜的病理学改变。结果 A到E组角膜存活时间分别为(7.20±2.93)天、(10.89±3.62)天、(10.50±3.40)天、(11.13±3.94)天和(12.80±4.07)天,各组间比较差异有统计学意义(F=3.20,P=0.022)。B、C、D、E组与A组相比,角膜存活时间明显延长,差异均有统计学意义(P=0.031、0.047、0.027、0.001)。B组与C、D、E组之间比较差异均无统计学意义(P=0.815、0.853、0.255),C组与D、E组之间差异均无统计学意义(P=0.716、0.161),D组与E组之间差异无统计学意义(P=0.333)。A到E组RI分别为7.80±1.48、5.67±1.80、6.10±1.66、5.25±1.75和4.80±1.23,组间比较差异具有统计学意义(F=5.202,P=0.002)。B、C、D、E组与A组相比,RI明显减小,差异有统计学意义(P=0.005、0.021、0.002、0.000)。B组与C、D、E组比较差异均无统计学意义(P=0.555、0.592、0.241)。C组与D、E组比较差异无统计学意义(P=0.265、0.074)。D组与E组之间差异无统计学意义(P=0.553)。A组角膜植片明显水肿、增厚,基质层可见大量细胞浸润,细胞排列紊乱。B^E组角膜基质层浸润程度较A组明显减轻。结论普通环孢素滴眼液组及高、中、低浓度的环孢素A纳米粒滴眼液均能有效地抑制高危角膜移植术后的排斥反应。

摘要：目的观察携带报告基因GFP且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒(Ad-siICOS-EGFP)阻断可诱导共刺激分子(in-ducible costimulator,ICOS)共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥的抑制作用。设计实验性研究。研究对象Wistar大鼠(供体)及SD(受体)大鼠。方法取Wistar大鼠(供体)及SD(受体)大鼠,建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将其随机分为A、B、C、D4组,每组20只鼠:A组为单纯角膜移植对照组;B组为Ad-siICOS-EGFP注射组;C组为Ad-EGFP注射组;D组为生理盐水注射组。术后每日在裂隙灯显微镜下观察角膜植片以及眼前段组织的变化。对角膜混浊、水肿、新生血管3项指标进行评分,观察排斥反应指数(RI)的变化并记录植片的存活时间。各移植组分别于术后5天随机取10只大鼠,麻醉处死后,取植片行免疫组织化学及RT-PCR检测。各组其余大鼠进行角膜植片存活时间统计。主要指标角膜植片平均存活时间I;COS蛋白表达情况I;COSmRNA表达情况。结果各组角膜植片平均存活时间:A组(9.800±0.632)天;B组(14.700±1.418)天;C组(10.000±1.054)天;D组(10.100±0.876)天(F=52.383,P=0.000)。ICOS蛋白表达情况:各组植片均可见ICOS蛋白阳性表达,各组植片组织ICOS蛋白免疫组化染色阳性细胞评分:A组(1.900±0.568);B组(1.100±0.316);C组(1.800±0.632);D组(1.900±0.568)(F=5.214,P=0.004)I。COSmRNA表达情况:各组大鼠植片组织ICOS的PCR产物凝胶电泳条带辉度值比值:A组(1.004±0.164);B组(0.621±0.096);C组(0.929±0.134);D组(0.918±0.120)(F=16.717,P=0.000)。结论 Ad-siICOS-EGFP可有效抑制大鼠植片组织ICOSmRNA及ICOS蛋白的表达,从而阻断ICOS共刺激通路;移植术后即刻受体鼠球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP,可抑制大鼠角膜移植急性免疫排斥反应,延长角膜植片存活时间。

摘要：目的观察计算机辅助药物设计的新型免疫抑制剂J2纳米混悬液（nano-suspension,NS）结膜下注射对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用。方法成年雌性Wistar大鼠为供体,Sprague-Dawley（SD）大鼠为受体,建立同种异体穿透性角膜移植模型。手术大鼠随机分成3组,每组各16只（32眼氉）,A组：SD大鼠自体角膜移植,结膜下注射空白溶剂0.05 mL;B、C组为同种异体角膜移植组,术后分别给予结膜下注射空白溶剂0.05 mL及10 g·L-1J2 NS。术后记录角膜植片排斥指数（rejection index,RI）,当RI≥6,确定为排斥。各组于角膜移植后7 d、14 d随机选取2只行术眼及同侧颌下淋巴结病理学检查。结果 A组：术后2~3 d角膜植片由透明逐渐变为混浊、水肿,随后保持透明。B组：术后3~5 d角膜植片开始水肿、混浊,7~10 d时水肿、混浊发展迅速。C组：术后1周反应与A组相似,之后出现角膜水肿、混浊,术后9~14 d角膜完全混浊。A、B、C组的角膜植片生存时间分别为（30.00±0.00）d、（10.75±1.60）d、（14.33±2.93）d,三组间差异有统计学意义（均为P〈0.05）。组织学观察发现：A组术后炎症反应轻微,基质厚度基本正常或增厚,内皮层完整。B组术后14 d时可见典型的免疫排斥反应,植片角膜上皮空泡样改变、部分崩解坏死。C组较B组角膜植片中细胞成分和新生血管均少,同侧颌下淋巴结增生明显减弱。结论 J2 NS结膜下注射有抑制大鼠角膜移植排斥的作用,可减轻角膜移植术后角膜植片和同侧颌下淋巴结的细胞增生,抑制免疫应答。