摘要：目的　利用分子生物学方法对解脲支原体 (Ureaplasmaurealyticum ,Uu)第一群进行分型 ,建立简便、可靠的分型方法。方法　设计分型引物 ,用PCR和限制性内切酶消化的方法进行分型。结果　设计了解脲支原体的分型引物UMS5 1|UMAU 1和UMS5 1|UMAU 3 ,前者扩增出Uu1型和Uu6型 ,后者扩增出Uu3型和Uu14型。对于Uu1型和Uu6型 ,用限制性内切酶消化的方法区分。结论　根据MB抗原基因的N端 ,利用PCR结合限制性内切酶消化的方法可以对解脲支原体第一群进行分型 。

摘要：对解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)的培养、基因分型、不同人群基因型与致病性的关系及UU药敏作了综述.根据UU特定片段的基因序列可设计引物对脲原体进行基因分型.解脲支原体主要分为2个种,14个基因型.UU在健康人群中主要以细小脲支原体(***,Up)为主,且以1、3、6型为主;在泌尿生殖道感染患者及性工作者中Up的分离率明显降低,解脲脲支原体(***,Uu)分离率升高,该现象表明Uu的出现可能与疾病相关,故UU分型对发病机制的研究有重要作用.

摘要：目的分析解脲支原体(UU)对喹诺酮类耐药基因突变位点及突变类型,为临床筛选新的耐药基因,寻找作用于UU新靶点的抗生素提供理论依据。方法收集临床耐喹诺酮UU标本,提取DNA,用设计的喹诺酮耐药决定区中GyrA、GyrB、ParC,ParE基因特异性引物PCR扩增目的序列并进行测序分析,寻找与耐药相关的突变位点。结果PCR扩增目的基因序列后测序分析,ParC基因是UU喹诺酮耐药的主要突变位点,出现了6个点突变,造成3个位点的氨基酸序列改变;GryA、GryB和Par E基因出现的都是无义突变,氨基酸序列并未改变。结论ParC基因是UU喹诺酮耐药的主要突变位点。临床上应重点针对Par C基因的突变进行相关研究,以降低UU耐药基因突变引起的耐药率上升。

摘要：目的　以肉汤稀释法对解脲支原体 (Uu)进行 7种抗菌药物的敏感性测定 ,并与聚合酶链反应 (PCR)方法检测四环素耐药决定子的结果进行比较 ,探讨其临床及实验意义。方法　 42个Uu分离株经三次传代成纯培养物后接种于 96孔板小孔中 ,药液倍比稀释成 6 4μg/ml～ 0 0 6 μg/ml ,37℃培养 ,加药组以 72小时后仍不出现培养基由黄→红色变化的最小药物浓度为该药的最小抑菌浓度 (MIC)。根据tetM基因序列设计引物 ,采用PCR方法进行扩增 ,并对PCR产物进行酶切消化反应。结果　四环素抗菌活性较差 ,MIC≥ 8μg/ml以上的中度敏感有 1 2株 ,且美满霉素、强力霉素的MIC也多达 8μg/ml与 4μg/ml。尚未发现对三类抗菌药同时耐药的Uu分离株。 42个Uu株的tetM阳性检测率为71 4%,除 1例外均出现预期酶解片段。结论　①Uu分离株对四环素族药敏性较差 ,临床上经四环素类反复治疗难以阴转 ,并有症状的Uu感染病例可换用另外两类抗支原体药物 ;②载有tetM的Uu株可能成为耐药株 。

摘要：目的预测解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,Uu3和14血清型多带抗原(multiple banded antigen,MBA)的优势B细胞表位和Th表位。方法利用GOR4和HNN方法预测Uu3和Uu14血清型MBA的二级结构,结合其跨膜区域、亲水性、极性、柔韧性、表面可能性和抗原性等方面特征,预测其优势B细胞表位;同时筛选MHC-Ⅱ类限制性Th表位。合成4个富含B/Th细胞多表位肽,免疫小鼠评价其免疫原性。结果 Uu3血清型和14血清型MBA的B、Th表位具有高度同源性,其共同的富含B/Th细胞抗原表位位于N端31-51、55-75、97-115和154-168肽段。MBA aa31~51(F1)、MBA aa 55~75(F2)、MBA aa 97~115(F3)及MBA aa 154~168(F4)4个多表位肽具有良好的免疫原性,其诱导产生的特异性抗体明显高于PBS对照组(P<0.01)。结论多参数预测Uu MBA B细胞优势表位可为MBA单克隆抗体的制备和Uu表位疫苗设计等研究提供理论依据。

摘要：目的构建解脲支原体Ferritin蛋白的原核表达载体,纯化重组Ferritin蛋白并测定其抗氧化功能,为解析解脲支原体的抗氧化机制奠定基础。方法利用荧光定量PCR检测氧化胁迫下Ferritin基因的相对表达量。根据Ferritin基因序列,设计引物,PCR扩增Ferritin全长片段。将解脲支原体Ferritin基因中编码色氨酸的密码子TGA突变为TGG,将突变后的Ferritin基因连接到原核表达载pET28a得到重组质粒pET28a-Ferritin,转化大肠埃希菌BL21(DE3)得到重组菌BL/pET28a-Ferritin,IPTG诱导Ferritin蛋白表达并用镍柱亲和层析进行纯化。体外试验测定Ferritin蛋白的Fe2+结合特性,亚铁氧化酶活性和抗氧化能力。结果 Ferritin基因在H2O2或者CHP胁迫表达上调。成功构建能够表达全长Ferritin蛋白的重组质粒pET28a-Ferritin。诱导并纯化得到理论分子质量单位为22ku的重组Ferritin蛋白。结合Fe2+后,Ferritin蛋白的内源荧光值降低。Ferritin具有Fe2+氧化酶活性,能催化Fe2+生成Fe3+,并能够减少氧自由基的产生。结论解脲支原体Ferritin基因在氧化胁迫条件下表达上调,其表达产物具有亚铁氧化酶活性和抗氧化功能。

摘要：目的根据parC基因序列差异建立一种解脲支原体基因分型方法，以实现其两个生物型Uu（Ureaplasma urealyticum）和up（Ureaplasma parvum）的快速鉴定，便于临床常规应用。方法依据解脲支原体14个血清型标准株parC基因序列，设计可区分观和印的特异性引物与和探针；通过检测serovarl和serovat4标准株、50份解脲支原体临床分离株（Uu12株，Up38株），7种阴道常见分离菌以鉴定该方法的特异性；留取70例性病门诊非淋球菌性泌尿生殖道炎症患者和71例妇科正常体检者的标本，分别进行解脲支原体培养和基因分型鉴定，以比较两种方法的敏感性，并应用统计学分析Uu、Up在性病和正常人群中分布的差异。结果应用parC基因分型法成功将serovarl标准株、serovat4标准株、Uu和Up临床分离株鉴别，Uu、Up两生物群之间以及7种阴道常见菌均未出现非特异性扩增；基因分型方法的敏感性显著高于培养法（P〈O．05）；在70例性病门诊患者中，Uu和Up的检出率分别为8．57％和61．40％，两者混合感染为24．30％；在7l例妇科体检人群中魄和唧检出率分别为7．04％和67．60％，两者混合感染为8．45％，性病门诊病人中解脲支原体感染率显著高于体检人群（P〈O．05），Uu和Up单纯感染在两群体中的分布差异无统计学意义（P〉O．05），而混合感染在性病门诊病人中显著增加（P〈O．05）。结论解脲支原体在性病患者中的感染率显著高于健康体检者，且混合感染在性病患者中明显增加，而Uu和Up单纯感染在两人群中分布差异无统计学意义，因此解脲支原体的致病可能与其不同基因型的混合感染有关。

摘要：聚合酶链反应技术在解脲支原体尿道炎中的应用戴勇，曾真深圳市人民医院（邮政编码５１８０２０）根据解脲支原体（Ｕｕ）尿素酶基因序列，设计出的聚合酶链反应（ＰＣＲ）引物，检测尿道中解脲支原体，以期了解它在尿道炎中发病情况。对象与方法一、对象检查１０７４例患...

摘要：我们根据已知的解脲支原体尿素酶基因序列，设计了一对聚合酶链反应引物。该组引物对解脲支原体１４个血清型均能扩增出２８３ｂｐ片段，但对实验所用的其它支原体或细菌不能扩增出任何片段。该２８３ｂｐ片段能被限制性内切酶Ｈｉｎｃ　Ⅱ降解为１５１，１３２ｂｐ两条片段。使用３５个ＰＣＲ循环，可检测出１０－１４ｇ的模板ＤＮＡ，约相当于２０个解脲支原体。通过梯度稀释试验证明４０个ＰＣＲ循环时，ＰＣＲ的敏感性与培养法的敏感性相当。用ＰＣＲ检测解脲支原体操作简便，可作为一种有价值的诊断方法。

摘要：目的制备解脲支原体（UU）DNA荧光定量PCR室内质控物,建立室内质量控制体系,对其临床应用进行初步评价。方法分别留取Ct值为24~25（阳性）和32~33（弱阳性）标本和检测结果为阴性的标本,待留取到15mL时充分混匀,按每管150μL分装作为室内质控物。前20次检测采用＂即刻法＂判断检测结果是否在质控范围内,20次以后绘制Levey-Jennings图,确定靶值、标准差（s）和变异系数（CV）,采用Westdard多规则质控方法对自制室内质控物检测结果进行判断。在Unity Real Time（URT）系统中使用质控规则配置操作导出UU-DNA的功效函数图（OPSPecs图）,根据OPSPecs图设置质控规则。结果131次实验中,前20次采用＂即刻法＂判断室内质控物;20次以后采用Levey-Jennings图判断,质控品稳定,质控规则合理。结论用临床分泌物混合液制备UU-DNA检测项目的室内质控物品,制备方法简单,测定结果稳定,可作为实验室检测UU-DNA项目的质控品;依据OPSPecs图设置分子生物学检测项目的室内质控规则简便、实用。