摘要：目的:研制1种快速检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7和金黄色葡萄球菌的三重PCR检测试剂盒,并加以应用。方法:设计3种待检目的菌特异性引物,优化PCR反应条件,建立多重PCR检测试剂盒,并对其特异性、灵敏度、抗干扰性、准确性等方面进行评估。结果:该试剂盒特异性好,灵敏度高,3种待检目的菌在不同食品介质中的检出限均达到101CFU/mL,抗干扰性强。在6个月保存期内,其稳定性和准确性均未发生改变。结论:本研究建立的试剂盒可同时检测上述3种病原菌,且具有稳定性好、准确性高等特点,可用于禽肉及其制品的日常微生物安全监测。

摘要：代谢物浓度测定酶法试剂盒设计中必需考虑的五个问题:工具酶的特异性,酶对底物的亲合力,酶的用量,反应平衡和反应时间。并列表比较了动力学方法与终点法的优缺点。

摘要：目的本研究旨在研制一种快速检测试剂盒,鉴定桃仁及苦杏仁DNA成分,并对其进行性能评价。方法建立DNA提取方法,确保有效提取桃仁及苦杏仁基因组DNA,紫外分光光度法测其浓度及纯度。美国国立生物技术信息中心(NCBI)查询并比对桃仁及苦杏仁的ITS序列,针对特异性位点,NCBI Primer-Blast设计种属特异性引物。建立并优化聚合酶链式反应(PCR)检测体系,DH5α感受态细胞克隆特异性片段,测序验证体系准确性,制备阳性对照。组装DNA检测试剂盒,对其特异性、稳定性及重复性进行评价,并对市售桃仁和苦杏仁样品进行检测。结果所建立DNA提取方法,提取效率高,DNA质量浓度高于100 ng·μL^(-1),A_(260/280)处于1.80~2.10之间。该试剂盒可准确鉴定桃仁及苦杏仁DNA成分,检测灵敏度高,特异性强,最低检测限为1 ng·μL^(-1)。反复冻融20次后仍可有效检测,可于-20℃保存1年。20个市售样品中检出1个桃仁伪品及2个苦杏仁伪品,其余均为正品。结论桃仁及苦杏仁DNA检测试剂盒特异性强、灵敏性高、稳定性好,具有良好重复性,可快速鉴定桃仁及苦杏仁,为桃仁中药材市场质量安全管理提供有力支持。

摘要：目的本实验对名贵中药材鹿茸的DNA指纹特征进行研究,从分子水平鉴定及分析鹿茸,研发鹿茸DNA检测试剂盒,并对其进行性能评价。方法以鹿茸细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)和鹿茸线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cyt b)为靶基因,采用生物信息学技术设计5对特异性引物,经实验筛选后确定细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ1,即mt DNA CoⅠ1(NC_013834.1)为特异性最好的引物,对鹿茸样品通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)进行扩增,优化PCR反应体系及反应条件,研发出鹿茸DNA检测试剂盒。对其性能进行评价,并对市售鹿茸样品进行检测。结果使用鹿茸DNA检测试剂盒提取的DNA纯度均在1.785~1.906内,该试剂盒的特异性体现在检测正品时出现条带,而伪品无条带;灵敏度达3.125 ng·μL-1;反复冻融5、10、15、20次后仍有效用;重复检测正、伪品3次,结果均一致;-20℃保存,有效期可长达1年。对5个地区12个市售样品进行质量分析,合格率为66.67%。结论研发的鹿茸DNA检测试剂盒特异性强、灵敏度高、稳定性及重复性均良好,操作简单,检测样品微量,适用范围广,成本低廉,结果准确,可为中药鹿茸提供一种科学、准确、可靠的鉴定方法。同时也表明市售鹿茸样品质量良莠不齐,混伪品大量充斥。

摘要：依据牛、山羊、兔、猪等哺乳动物SRY基因高度同源性设计一对22 bp的SRY引物,按照3×2×3因子组合,建立了PCR扩增胚胎DNA最适条件。采用此最适条件扩增了15个羊-兔异种克隆胚胎DNA,结果表明PCR法可以用来鉴别哺乳动物胚胎的性别。采用设计的性别鉴定引物,按照最优PCR扩增胚胎DNA条件配制了PCR性别鉴定试剂盒。

摘要：选取非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因VP73中保守性强的区域,人工合成该基因片段;再根据GenBank中公布的ASFV的VP73基因序列,设计特异性引物,利用PCR扩增该VP73基因片段,克隆入pET-32a(+)载体,以构建的重组质粒为模板建立了检测ASFV的PCR检测方法。优化扩增条件,并组装成PCR试剂盒。结果显示,PCR扩增出429bp的ASFV VP73基因片段;该试剂盒与猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒(疫苗株)、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪乙型脑炎病毒、猪细小病毒、健康猪和蜱的基因组无交叉反应。试剂盒敏感性可达0.1fg。试剂盒批内和批间检测结果无明显差异,稳定性良好。置于4℃和-20℃条件下保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。结果表明,研制的ASFV PCR试剂盒为ASFV的快速检测及流行病学调查提供了技术手段。

摘要：以流行性造血器官坏死病毒(EHNV)中的主衣壳蛋白基因保守区序列作为扩增靶序列,设计合成了一对特异性引物,应用快速的模板制备方法和优化PCR扩增条件,建立了EHNV病毒PCR快速检测技术,并开发成简便、快速、实用的检测试剂盒.该试剂盒的检测灵敏度相当于31个病毒粒子,模板制备时间约30 min,约4 h即可得到准确的结果;且无非特异性扩增带,适用于由EHNV病毒感染的鱼类苗种和水产品的检疫及水质环境的监测.

摘要：【目的】用荧光PCR(fluorescencePCR ,F PCR)方法研制沙眼衣原体 (chlamydiaTrachomatis,CT)DNA检测试剂盒 ,通过临床验证考核其性能 ,并与其它方法比较。【方法】设计合成了CTF PCR诊断试剂盒。检测了 5 16份临床分泌物标本 ,以McCoy细胞培养法和Abbott公司的LCx试剂盒为对照。【结果】阳性率 2 1 1% ,灵敏性 98 2 % ,特异性 99 8%。【结论】F PCR显著优于培养法 ,与LCx相当。F PCR试剂盒可以检测CT的真实感染情况 ,对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。

摘要：根据猪链球菌2型荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J基因序列设计1对可扩增560 bp片段的特异性引物,成功地建立了一种检测猪链球菌2型的PCR方法,并通过优化研制出PCR检测试剂盒。进一步的研究结果表明,试剂盒具有很好的特异性、敏感性和稳定性。试剂盒能从病料8 h增菌的混合菌群中快速检测出猪链球菌2型菌株。试剂盒对临床样本的检测结果表明,猪链球菌2型在我国猪群发生的链球菌病例中不占主导地位。

摘要：目的研制禽类贝氏隐孢子虫的PCR检测试剂盒。方法根据贝氏隐孢子虫18SrRNA和ITS-1序列,选取遗传标记位点最多的一段核苷酸序列作为特异PCR引物的靶序列,设计、合成了一对针对贝氏隐孢子虫的特异性引物(YJWF:5’-ACTGATATACAATACCACGG-3’和YR:5’-GCGGATAAAGTTCAGGTTC-3’),对PCR反应条件进行了一系列优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、稳定性、重复性和保存期等进行了系列研究。结果该试剂盒能特异性地扩增出贝氏隐孢子虫基因组中相应片段,与安氏隐孢子虫,微小隐孢子虫,柔嫩艾美尔球虫等相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到3.48个卵囊;反复冻融50次对试剂盒没有影响;室温条件下至少可保存4个月。结论该试剂盒的各项指标达到了贝氏隐孢子虫的检测要求。