摘要：目的研制禽类贝氏隐孢子虫的PCR检测试剂盒。方法根据贝氏隐孢子虫18SrRNA和ITS-1序列,选取遗传标记位点最多的一段核苷酸序列作为特异PCR引物的靶序列,设计、合成了一对针对贝氏隐孢子虫的特异性引物(YJWF:5’-ACTGATATACAATACCACGG-3’和YR:5’-GCGGATAAAGTTCAGGTTC-3’),对PCR反应条件进行了一系列优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、稳定性、重复性和保存期等进行了系列研究。结果该试剂盒能特异性地扩增出贝氏隐孢子虫基因组中相应片段,与安氏隐孢子虫,微小隐孢子虫,柔嫩艾美尔球虫等相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到3.48个卵囊;反复冻融50次对试剂盒没有影响;室温条件下至少可保存4个月。结论该试剂盒的各项指标达到了贝氏隐孢子虫的检测要求。

摘要：沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌O157:H7是肉品中的重要食源性致病菌,建立其快速检测方法对肉品的质量控制具有重要作用。本研究根据沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因以及大肠杆菌O157:H7的rfbE基因,分别设计出三对特异性引物,通过对多重PCR反应体系和条件的优化,建立多重PCR检测体系,并集成快速检测试剂盒。结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在肉品中的检测灵敏度可达1CFU/g,整个检测时间在24h以内。集成的试剂盒检测性能良好,具有较强应用价值,可推广应用于食品卫生检测以及临床检验等领域。

摘要：本研究旨在研制一种快速鉴定肉制品中狗源性成份的DNA检测试剂盒,并对此试剂盒做出方法学评价。以改良SDS-PK法提取狗肉及掺假肉品种(狐肉、貂肉)基因组DNA,选择具有种属特异性的线粒体细胞色素B基因作为鉴定靶基因,应用Primer5.0设计特异性引物,建立狗源性DNA检测方法,组装狗源性DNA检测试剂盒,并进行特异性、稳定性及重复性评价。结果表明,本试剂盒可有效检测肉制品中狗、狐、貂源性成分,DNA提取效率高,仅0.05 g肉样即可提取浓度高于100 ng/μL的基因组DNA,OD260/280处于1.80~2.00之间,最低检测限为10-4 ng/μL,所有检测步骤可在4.5 h内完成,操作简便,特异性高。试剂盒所采用试剂安全无毒,反复冻融20次后仍然有效,可于-20℃保存一年。随机抽取12份市售样品进行检测,有3份样本中存在狐、貂肉冒充狗肉现象,掺假率高达25%,该结果与长春食品药品检验中心检测结果一致。狗源性DNA检测试剂盒灵敏性高、特异性强,检测结果准确稳定,具有良好重复性,适用于狗肉快速定性检测。

摘要：以GF305、弗吉尼亚小苹果为带毒(阳性)和非带毒(阴性)试材,利用作者已建立的总RNA提取方法提取试材中的总RNA,根据三种病毒(ACLSV,ASGV和ASPV)外壳蛋白基因序列设计寡核苷酸引物,采用RT-PCR技术研制三种病毒检测试剂盒,达到最优化检测。并应用该试剂盒对果园中存在的病毒进行了检测。该试剂盒检测病毒速度快(6~7 h)、灵敏度高(较ELISA法高8 000倍)、专一性强、检测成本较低,是一种有推广价值的仁果类果树主要病毒检测方法。

摘要：为使检测ACLSV、ASGV、ASPV、PNRSV和PDV5种果树主要病毒达到最优化检测。本研究以GF305、弗吉尼亚小苹果带毒(阳性)和非带毒(阴性)为试材,提取总RNA,根据ACLSV、ASGV、ASPV、PNRSV和PDV这5种病毒的外壳蛋白基因序列设计引物,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术进行检测,最终研制出上述5种果树主要病毒PCR检测试剂盒。利用本试剂盒(该试剂盒已获得国家发明专利授权(ZL200710010565.8)检测果园中存在的病毒,明确了果园中这5种病毒的感染率,实现了快速、灵敏、成本低、特异性强的检测目的。

摘要：在对虾白斑综合征病毒（WSSV）和传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）二温式PCR检测技术前期研究的基础上，将这2种病原的特异性引物与PCR基础反应液一起组装成快速检测试剂盒。通过对试剂盒敏感性、稳定性和保存期等技术指标的测定以及对临床样品的检测试验，该试剂盒对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板均能特异性地扩增出2条与实验设计相符的593bp（WSSV）和356bp（IHHNV）的DNA片段，而对其它对虾病原的扩增结果均为阴性；该试剂盒最低能检测到102pg的WSSV DNA和10pg的IHHNV DNA。对WSSV和IHHNV DNA的检出量分别为102～103pg和10—102pg。

摘要：根据烟草环斑病毒基因组序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术研制成一步法检测该病毒的试剂盒,并建立了操作程序。对试剂盒扩增到的预期产物进行测序验证,产物序列与目的序列间的同源性为97.8%,表明该试剂盒的准确性较高。试验结果还表明,该试剂盒在常温、4℃和-20℃下可分别保存2d、7d和60d;灵敏度是DAS-ELISA的100倍;质量控制试验结果一致,具有较高的重复性。

摘要：目的建立法医物证学常染色体和Y染色体综合检测的方法。方法选择常用的常染色体STR基因座和Y染色体STR基因座,设计复合扩增引物,形成五色荧光标记复合扩增试剂盒。结果开发出一个五色荧光标记复合扩增试剂盒,可同时对15个常染色体STR基因座、1个性别基因座和10个Y染色体STR基因座进行分型检测。结论 15个常染色体STR加10个Y染色体STR检测试剂盒结合毛细管电泳凝胶进行STR分型,结果准确可靠,在法医学案件检验及数据库建设等方面有良好的应用前景。

摘要：以带毒(阳性)和非带毒(阴性)的GF305为试材,利用已建立的总RNA提取方法提取试材中的总RNA,根据3种病毒(ACLSV、PNRSV和PDV)外壳蛋白基因序列设计寡核苷酸引物,采用RT-PCR技术研制3种病毒检测试剂盒,以达到最优化检测。并应用该试剂盒对果园中存在的病毒进行检测。结果显示,该试剂盒检测病毒速度快(6～7h)、灵敏度高(较ELISA法高8 000倍)、专一性强、检测成本较低,是一种有推广价值的核果类果树病毒检测方法。该试剂盒已申报了国家发明专利,初步审查合格。

摘要：建立调味粉中罂粟碱LAMP(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)检测方法,并研制出配套试剂盒。根据罂粟碱的特异性基因序列设计引物,对12种罂粟、11种香辛料和1种虞美人核酸样品进行特异性、最佳温度筛选及敏感性实验,根据优化后的反应条件,组装试剂盒,并采用试剂盒对市售的8种调味粉进行检测。结果表明:12种罂粟和虞美人发生了特异性反应,最佳反应温度为65℃,LAMP检测最低浓度达70pg/μL,敏感性是PCR检测的10倍。市售8种调味粉中,有1种含有罂粟碱成分。实验所建立的检测方法及研制的试剂盒对调味粉中掺加罂粟粉检测具有重要意义。