摘要：兔瘟是由兔出血症病毒(RHDV)引起的传染病,给肉兔养殖产业带来巨大损失。根据RHDV VP60基因序列进行抗原肽分析,选择该基因主要抗原肽段后,设计一对特异性引物进行PCR扩增,并插入pET32a(+)载体中构建重组质粒。经PCR鉴定、酶切鉴定和测序,结果表明p ET32a(+)-VP60截短基因质粒构建成功。对RHDV-VP60截短基因蛋白原核表达系统筛选诱导条件,结果表明:IPTG浓度为0.8 mmoL/L,诱导时间为8 h,诱导温度为37℃,表达量最高。研究为后续兔瘟亚单位疫苗和诊断试剂的研究奠定基础。

摘要：依据逆向调整原则，设计了4套诱导乳酸杆菌进入活的非可培养（VBNC）状态的方案，同时应用LIVE／DEAD细胞染色试剂，对进入该状态的细菌进行了荧光观察，并尝试用Tween-80对VBNC状态细菌进行了复苏。结果显示，MRs液体培养基，pH2．0～3．0，4℃，兼性厌氧培养和不含半胱氨酸的MRS液体培养基，pH2．0～3．0，4℃，兼性厌氧培养均可使3株试验菌体在短期内进入VBNC状态，并且能较长时间维持这一状态；3株细菌菌体均发生萎缩、弯曲，且彼此相连，原本单在的杆菌变成了链杆菌；随着诱导时间的延长，菌体的交联程度明显增加，出现众多红绿交替的长链杆菌；Tween-80可使VBNC状态细菌恢复为可培养状态并实现复苏，而复苏后的细菌重新具备原菌的形态和生化特征。表明，乳酸杆菌具有VBNC状态，并且在此状态下呈现与正常菌体不同的形态特征。

摘要：为探索重组米曲霉碱性蛋白酶(rAlp)在毕赤酵母中表达的最佳诱导条件,本研究在单因子实验的基础上,运用Box-Behnken设计的响应面试验对诱导条件进行了优化。根据回归分析确定了影响rAlp表达的因子,求得最佳诱导条件为:诱导温度28.53℃,诱导pH6.63,甲醇浓度1.28%。此工艺条件下碱性蛋白酶活力实测值为49.78U/mL,回归模型的预测值与实测值的相对误差<1%,说明该回归方程与实际情况拟合很好。

摘要：利用正交试验设计方法探讨了植物生长物质(6-苄基腺嘌呤、奈乙酸)、蔗糖、水解酪蛋白(CH)对甜叶菊丛生芽诱导的影响。结果表明:蔗糖对丛生芽诱导影响最大,其次是6-BA,NAA、CH影响较小。筛选出甜叶菊丛生芽诱导的最适培养基为MS+6-BA1mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L。继代培养采用MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+琼脂6g/L+蔗糖30g/L。生根最适培养基为1/4MS+0.1mg/LIBA+琼脂6g/L+蔗糖30g/L+1g/L活性炭,生根率达100%。已获得驯化移栽成活的植株,移栽成活率为92.13%。

摘要：漆酶是一种多铜氧化酶,在食品、纺织、环境修复和造纸等领域有重要应用。为提高漆酶的发酵水平,该研究将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)来源的漆酶(CotA)表达于大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,并分别考察了核糖体结合位点、诱导表达条件及共表达裂解蛋白对其表达效率的影响。结果显示,最优核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)重组菌CotA-RBS5胞内CotA表达水平达到1236 U/L,较优化前提高1.75倍。基于正交实验设计确定了最佳诱导表达条件为:待菌体浓度OD_(600)达到0.8时,加入终浓度为2 mmol/L Cu及0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷后,于30℃诱导。在该条件下,重组菌CotA-RBS5的胞内酶活力提升至7926 U/L,较优化前提升了5.4倍;同时,胞外酶活力达到4984 U/L。共表达裂解蛋白E促进了细胞的裂解。在菌体浓度OD_(600)达到3.5时诱导裂解蛋白E表达,胞外CotA酶活力在发酵30 h达到10283 U/L。研究结果将为漆酶的工业化生产提供了重要的基础数据。

摘要：采用目前方法对交通信号灯进行控制时,没有构建城市交通网络模型,无法获取交通路口的实际情况,车辆在交通路口的延误时间和停车次数较高,方法的整体有效性差。在诱导条件下提出基于Multisim的交通信号灯混杂控制方法,首先构建了城市交通网络模型,获取车辆在交通路口的实际情况,并对交通路口的状态进行预测,采用Multisim软件根据预测结果设计交通信号灯混杂控制器,通过控制器实现交通信号灯的混杂控制。仿真结果表明,所提方法可有效预测交通路口的车流量,减少车辆在交通路口的延误时间和停车次数,验证了所提方法具有良好的控制性能。

摘要：根据GenBank报道的PRRSV VR2332基因序列设计引物,经RT-PCR扩增,得到大小约为390 bp的阳性产物;利用BamHⅠ,EcoRⅠ位点将N蛋白基因片段克隆到pET-28a载体,构建原核重组表达质粒pET-N,转化BL21(DE3)并进行SDS-PAGE,Western blot分析.结果表明:克隆的N蛋白基因与GenBank报道的VR2332基因同源性为93.83%;重组菌株经IPTG诱导后,N蛋白基因得到了高效表达;经筛选得到最佳诱导条件,即1 mmol/L IPTG诱导6 h,蛋白表达量可达菌体蛋白总量的52.635%,SDS-PAGE后切胶回收可得到纯化的N蛋白,为进一步制备免疫胶体金试纸条或ELISA试剂盒提供基础.

摘要：丁香酚合成酶(eugenol synthase,EGS)是北细辛(Asarum heterotropoides)主要活性成分甲基丁香酚体内合成途径中的关键酶之一。该研究根据北细辛转录组数据库中筛选到的序列设计特异引物,以RT-PCR法扩增获得北细辛丁香酚合成酶基因(AhEGS)的开放阅读框(ORF)序列,进行了相应的生物信息学分析。同时运用实时定量PCR法分析AhEGS在不同发育时期(幼叶期、花期、果期)和不同组织部位(叶、根茎、根)中的表达谱,并进行原核表达分析。结果显示:(1)AhEGS基因ORF序列长为951 bp,编码316个氨基酸,理论分子量为34.93 kD,等电点为6.19,AhEGS蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构,无信号肽序列;同源序列比对发现,北细辛AhEGS与月季RcEGS(AFQ98278.1)同源性最高。(2)实时定量PCR分析表明,AhEGS基因在北细辛幼叶期的根中表达量最高。(3)成功构建了原核表达载体pET28a-AhEGS-BL21,经pET28a-AhEGS重组子转化*** BL21(DE3),SDS-PAGE检测显示在大肠杆菌(Escherichia coli,***)中诱导产生了35 kD左右的特异性蛋白,与理论分子量一致;最佳诱导条件为16℃、14 h,IPTG浓度为0.2 mmol/L。该研究首次克隆了北细辛的EGS基因,构建了原核表达载体,筛选出该蛋白最佳诱导条件,研究结果为北细辛甲基丁香酚代谢工程的应用奠定基础。

摘要：糖基转移酶Alg11作为N-糖基化途径中一个重要蛋白,功能为催化将甘露糖转移到底物DPGn2M3（Dolichyl-pyrophosphate-Glc NAc2Mannose3）上进而生成DPGn2M4和DPGn2M5这两种多萜醇寡糖前体的反应。在本研究中,首先通过对酿酒酵母Alg11的蛋白质结构进行分析,设计了去除跨膜域的蛋白Alg11（45-548）并成功在大肠杆菌中表达,进而对诱导时间、诱导剂浓度进行了产量最大化的优化,最终得到了纯化蛋白。以PPGn2（Phytanyl-pyrophosphate-Glc NAc2）为底物,利用体外表达的重组蛋白Alg1ΔTM和Trx-Alg2以酶法合成出Alg11的天然底物类似物PPGn2M3。用纯化的Alg11（45-548）蛋白催化转糖基反应,并通过液质联用（LC-MS）的方法检测产物,证实Alg11（45-548）蛋白具有催化PPGn2M3生成PPGn2M4和PPGn2M5的糖基转移酶活性。产物PPGn2M5通过不同的甘露糖苷酶酶切反应,验证了两个新加上的甘露糖以α-1,2糖苷键的形式连接到底物PPGn2M3上。底物特异性实验表明Alg11（45-548）可以特异性识别底物PPGn2M3,而其他N-糖基化中间体类似物如PPGn2和PPGn2M1无法被识别,且底物中的脂肪链结构也对酶的识别具有重要作用。Alg11的底物特异性保证了多萜醇寡糖前体的有序合成,具有重要的生理意义。

摘要：建立了双方无法承诺不再进行协商情况下的契约模型,研究表明:①养殖户和企业对合作剩余差额的均衡份额是双方折现因子、契约事先规定的分配比例的函数。当再协商次数有限时,若双方的提议都被拒绝,事前的讨价还价能力越高者,其均衡份额也就越大,但是当再协商的次数趋于无穷大时,双方的均衡份额均趋于一个常数,此时双方事前的讨价还价能力高低将无法影响双方的均衡份额。②契约再协商可防止双方在信号传递机制中出现的机会主义行为,双方的支付组合位于帕累托效率边界上,但是双方事前的专用投资及养殖户的努力水平却低于最优水平。