摘要：目的:设计与筛选融合标签血吸虫谷胱甘肽s-转硫酶(Glutathione s-transferase,GsT)的高亲和配体。方法:将原核融合表达载体pGsT-MOLUC转入大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导GsT标签表达,用Glutathione sepharose 4B亲和纯化此标签GsT。初速度法测定GsT对底物1-氯-2,4-二硝基苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)和还原型谷胱甘肽(Glutathione,GsH)的Km;测定GsT产物s-(2,4-二硝基苯基)-谷胱甘肽(Gs-DNB)、3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸及3者对应的对称双酰丁二胺对标签GsT的抑制作用。结果:纯化标签GsT对GsH和CDNB顺序结合且Km都高于0.10mmol/L;Gs-DNB相对CDNB的竞争性抑制常数约5μmol/L,相对GsH的非竞争性抑制常数约33μmol/L。3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸对此GsT抑制常数都大于0.20 mmol/L;N,N’-双依他尼酰-1,4-丁二胺和N,N’-双对丁基苯甲酰-1,4-丁二胺都为GsT相对GsH的强竞争性抑制,抑制常数分别为31 nmol/L和(0.61±0.43)μmol/L(n=3)。结论:将标签GsT低亲和力芳香羧酸用柔性短链连成对称结构,可获得结合于单个活性中心的高亲和力标签GsT抑制剂。