摘要：依据火把梨编码谷胱甘肽s-转移酶(GsT)的EsT序列设计基因特异引物,采用快速扩增cDNA末端技术,从云南火把梨中克隆到一个新的GsT基因的全长cDNA序列。该基因被命名为PpGsT(GenBank登录号为HQ889136)。PpGsT全长cDNA为1 177bp,具有130bp 5′-UTR、696bp ORF以及351bp 3′-UTR,编码含231个氨基酸的蛋白质。与已知植物GsTs家族成员间的氨基酸序列聚类分析将PpGsT聚为zeta类GsT。RT-PCR分析显示,PpGsT在火把梨光照的果皮和没有光照的果皮中大量表达,并且表达强度不受光照时间的影响,而在幼嫩叶片中没有表达。研究结果暗示在果皮中大量表达的PpGsT可能参与维持火把梨果实发育过程中的氧化还原平衡及应答逆境胁迫。

摘要：谷胱苷肽s-转移酶(GsT)是昆虫体内广泛存在的一类解毒酶,可以保护机体免受内源性或氧化物的损害。昆虫对一些杀虫剂的抗性与GsT表达水平增高有关。GsT的研究主要集中在杀虫剂抗性上,可将其作为昆虫的药物靶标,设计和开发新型的杀虫剂。采用RACE的方法,克隆了葱蝇(Delia antiqua)GsT基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:JQ625502),获得的cDNA全长874bp,其中阅读框ORF 627bp,编码208个氨基酸,推测其相对分子质量为23.9kD,等电点为5.83。通过该基因推导的氨基酸序列与其它物种的GsT蛋白进行相似性比较和系统发育分析,发现葱蝇与丝光绿蝇(Lucilia cuprina)的谷胱甘肽转移酶氨基酸序列同源性最高。该结果进一步丰富了GsT基因的基础数据,有助于葱蝇的杀虫剂抗性机理和发育机理的相关研究。

摘要：目的构建多药耐药基因(MDR1)、谷胱甘肽s-转移酶(GsTπ)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其表达。方法参照siRNA模板设计原则,设计并化学合成2条siRNA模板序列,退火后将其插入质粒psilencer2.1-U6,限制性酶切和基因测序进行鉴定。脂质体介导下转染K562/Adr细胞,实时荧光定量PCR分析MDR1、GsTπmRNA的表达,荧光免疫组化检测Pgp、GsTπ蛋白的表达。结果重组质粒psilenc-er2.1-MDR1、GsTπ经酶切、测序分析表明siRNA模板序列成功插入预计位点,并且序列正确。用psilencer-mdr1、psilencer2.1-GsTπ分别转染K562/Adr细胞株,mdr1mRNA表达量下降了71.5%,GsTπmRNA表达量下降了39.8%,荧光免疫组化显示Pgp、GsTπ表达均显著减少(P<0.01)。结论成功构建了MDR1、GsTπ特异性siRNA真核表达载体,该载体可不同程度逆转K562/Adr细胞的多药耐药。

摘要：由石油污染土壤中分离到一株能以多环芳烃 (菲、芴、萘 )为唯一碳源的细菌 ,经形态观察、生理生化 (Biolog GN)和G +Cmol%分析 ,鉴定该菌为少动鞘氨醇单胞菌 (sphingomonaspaucimobilis)。与 1 6srDNA序列同源性的比较进一步确证了鉴定结果。经菲诱导后的细菌谷胱甘肽s 转移酶 (Glutathiones transferase ,GsT)酶活明显高于未诱导前 ,表明谷胱甘肽s 转移酶可能与多环芳烃的降解有关。根据该酶基因的同源性序列设计引物 ,PCR扩增出编码谷胱甘肽s 转移酶基因片段 ,进一步证实在该菌中有GsT的存在。测序后基于编码GsT的基因所进行的系统发育分析表明 ,该多环芳烃降解菌与其它多环芳烃降解菌在进化上亲缘关系较近。

摘要：目的研究转录因子Fank1与GsT融合蛋白原核表达载体的构建和表达。方法根据Fank1基因的DNA序列,经引物设计软件Primer Premier 5.0优化设计出上下游引物(Ⅰ,Ⅱ),同时在5′端引入BamHⅠ酶切位点,3’端引入salⅠ酶切位点。以pdsRED-Fank1质粒为模板进行PCR扩增Fank1目的片段,经限制性内切酶酶切后连接到原核表达载体pGEX4T-2,构建成pGEX4T-2-Fank1原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导进行目的蛋白表达。结果经菌液PCR、电泳分析及测序证明成功构建了Fank1融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹显示,相对分子量为43 kDa的蛋白条带,与预期一致。结论成功构建了pGEX4T-2-Fank1原核表达载体,并在原核细胞中有表达,为进一步研究转录因子Fank1的功能奠定了基础。

摘要：目的应用生物信息软件分析细粒棘球蚴谷胱甘肽s-转移酶(EgGsT)的蛋白二级结构并预测B淋巴细胞表位和T淋巴细胞表位,为后续表位疫苗的设计研究提供基本的数据和资料。方法采用DNAstar软件、ProPred MHC Class-ⅡBinding Peptide Prediction server和Biosun软件对EgGsT的B淋巴细胞表位和T淋巴细胞表位进行预测。结果预测EgGsT存在8个B淋巴细胞表位区域和7个T淋巴细胞表位。结论分析预测的EgGsT抗原表位将对后续的表位疫苗研究具有重要意义。