摘要：目的建立可视化-跨越式滚环等温扩增技术检测肉制品中鼠肉掺假的分析方法。方法选取鼠的线粒体cytb基因为靶基因,设计并筛选出一对引物,选择9个不同物种的新鲜肌肉组织样本为研究对象,验证跨越式滚环等温扩增技术(saltatory rolling circle isothermal amplification, SRCA)方法的特异性;测定该技术的灵敏度以及人工污染样品中鼠肉成分的检出限,验证SRCA方法的准确性。结果 SRCA荧光可视化法检测鼠肉DNA的灵敏度为7.3×100fg/μL,与传统PCR方法相比,SRCA荧光可视化法的灵敏度提高了1000倍。在人工添加鼠肉的模拟掺假样品中, SRCA方法可检测到含量为0.01%的鼠肉。结论 SRCA技术可以灵敏、快速、准确地检测出肉制品中的鼠肉掺假成分,适用于基层单位对肉制品掺假的快速检测。

摘要：建立一种新型的单核细胞增生李斯特氏菌检测方法,即通过可视化跨越式滚环等温扩增(saltatory rolling circle amplification,SRCA)技术检测单核细胞增生李斯特氏菌。根据单核细胞增生李斯特氏菌hlyA基因序列设计引物,进行特异性验证,对灵敏度和人工污染样品的检出限进行测定。通过检测70种实际食品样品对SRCA方法的敏感性、特异性和符合率进行评价。结果表明:所有单核细胞增生李斯特氏菌呈阳性结果,非单核细胞增生李斯特氏菌呈阴性结果,说明该方法特异性良好。SRCA方法的灵敏度为8.9×10^(0)fg/μL,是传统聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法的1000倍,检出限为2.8×10^(0)CFU/g,是传统PCR方法的1/1000。在实际样品的检测中,SRCA方法与GB 4789.30—2016《食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌》方法进行比较,其敏感性、特异性和符合率分别为100%、97.01%和97.14%。可视化SRCA技术具有操作简便、设备简单、特异性强、灵敏度高、检出限低、检测成本低等优点,适合在基层单位和中小型食品企业中推广应用。