摘要：背景:转化生长因子β1对骨髓间充质干细胞成骨和成软骨的促分化作用已被广泛证实。目的:假设转化生长因子β2可在体外诱导鼠脂肪间充质干细胞向成软骨细胞分化,实验拟验证其可行性。设计、时间及地点:体外细胞学实验,于2007-03/11在北京大学第三医院中心实验室完成。材料:清洁级3周龄雄性Lewis大鼠24只,用于分离培养脂肪间充质干细胞。方法:取第2代脂肪间充质干细胞,通过10μg/L外源性转化生长因子β2以离心管内微团培养、单层培养两种方式向软骨细胞进行诱导分化,培养3周。对照组单纯加入基础培养液。主要观察指标:两种诱导方式下细胞(团)形态结构的变化、Ⅱ型胶原免疫组织化学检测结果、软骨细胞特异性基因Ⅱ型胶原和aggrecan mRNA的表达。结果:微团培养诱导的脂肪间充质干细胞组织块经苏木精-伊红染色显示在组织内部形成类似软骨陷窝样结构,阿尔新蓝染色呈强阳性,II型胶原免疫组化结果显示有棕褐色强阳性颗粒,RT-PCR检测到II型胶原和Aggrecan mRNA的表达。单层培养诱导的脂肪间充质干细胞无细胞外软骨基质分泌,未发现II型胶原蛋白和Aggrecan mRNA的表达。结论:在离心管内微团培养方式下,转化生长因子β2可以启动或促进脂肪间充质干细胞的软骨分化,且分泌软骨细胞特异性基质。简单的单层培养方式诱导失败。

摘要：背景:长波紫外线与人体皮肤光老化关系密切,线粒体的损伤是细胞衰老和死亡的分子基础。目的:观察长波紫外线照射对体外培养的皮肤成纤维细胞的线粒体脱氧核糖核酸缺失损伤的影响,以及转化生长因子β1对长波紫外线引起的线粒体DNA缺失有无保护作用。为皮肤光老化研究提供实验依据。设计、时间及地点:实验于2007-03/2008-04于解放军第四军医大学西京医院全军整形外科研究所完成。材料:转化生长因子β1为PerProtech公司产品;线粒体DNA 4977 bp引物由上海生工合成;长波紫外线光源为北京光学仪器厂生产;紫外线辐照计为北京师范大学光电仪器厂生产。方法:收集20～23岁成年男性包皮环切术后的皮肤组织12例,体外培养成纤维细胞。将细胞分组为对照组、长波紫外线累计照射达到30,60,90J/cm2组,半定量PCR检测DNA 4977 bp缺失情况。不同质量浓度转化生长因子β1(0.1,1,10μg/L)干预长波紫外线累积照射达90J/cm2的皮肤成纤维细胞。主要观察指标:观察不同累积照射剂量产生的DNA 4977 bp缺失;观察累积照射剂量90J/cm2后不同浓度转化生长因子干预对DNA 4977 bp缺失的影响。结果:体外培养的皮肤成纤维细胞经长波紫外线照射,长波紫外线累积剂量为长波紫外线60J/cm2后发生线粒体DNA 4977 bp缺失,长波紫外线90J/cm2时缺失加重。吸光度值和PCR产物电泳及条带密度扫描结果显示,在照射前2h加入不同剂量转化生长因子处理后,大剂量组(10μg/L)线粒体DNA表达降低,中、小剂量组与长波紫外线照射组比较,差异无显著性意义。结论:一定剂量(10μg/L)转化生长因子对体外培养的成纤维细胞线粒体DNA缺失起到保护作用。

摘要：目的:获取人转化生长因子β3的编码基因,开发抗衰老的皮肤药物。方法:采用重叠PCR的方法,设计4对引物,进行4次PCR合成人转化生长因子β3的编码基因。结果:4次PCR后,经2%的琼脂糖凝胶电泳可见一357 bp的条带,将电泳产物回收,连接入pMD-18T载体,经测序分析证实,所获得DNA片段为人转化生长因子β3的编码基因。结论:利用重叠PCR方法能够成功构建人转化生长因子β3的编码基因。

摘要：背景:版纳微型猪近交系能较好的模拟人取皮区创面,构建动物模型,检测与创面愈合及瘢痕形成密切相关的转化生长因子的表达。目的:观察创面愈合过程中转化生长因子β1基因的表达情况。方法:利用版纳微型猪近交系4～6月龄猪构建了皮肤创面愈合动物模型,通过提取皮肤创面总RNA,设计特异引物,对与创面愈合相关密切的转化生长因子β1基因进行了RT-PCR扩增。纯化目的片段并与pMD18-T载体连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,并经酶切、PCR和测序鉴定,计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR。结果与结论:建立的转化生长因子β1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法特异性较好,检测灵敏度可达103拷贝/μL,线性范围达103～109拷贝/μL,阈值循环数与PCR体系中起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系(R2=0.988),扩增效率高(E=107.433%)。利用该检测体系检测了45份样品,效果良好,该方法可为研究TGF-β1基因在创面愈合过程中的作用机理奠定分子生物学基础。

摘要：目的:针对转化生长因子-!(TGF-β)Ⅱ型受体基因的不同部位,构建不同TGF-βⅡ型受体特异性短发夹状RNA(shRNA)表达质粒载体,在转录后水平抑制TGF-βⅡ型受体的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法:用DNA重组技术将针对人TGF-βⅡ型受体基因不同部位所设计的4对shRNA序列克隆到真核表达质粒pSilencerTM3.1-H1neovector中,构建TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3、4。脂质体介导转染成人原代成纤维细胞,经G418筛选抑制TGF-βⅡ型受体表达的稳定细胞克隆。结果:3个TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westernblotting均证实3种shRNA重组质粒中pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA2可明显降低细胞内TGF-βⅡ型受体mRNA峰度及TGF-βⅡ型受体蛋白表达。结论:成功构建了TGF-βⅡ型受体shRNA表达载体pSilencerTM3.1-H1-TGF-βRⅡshRNA1、2、3,并筛选出特异而高效的阻断TGF-βⅡ型受体表达的克隆。此实验结果为进一步研究TGF-βⅡ型受体蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。

摘要：表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）是一种糖蛋白．具有酪氨酸蛋白激酶的活性，对表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）或转化生长因子（TGF）-α具有高度的亲和性．两者特异性结合后能激活一系列与细胞生长、增殖、转化有关的生化过程，并可参与肿瘤的发生和生长。而EGFR在胰腺癌中的表达明显高于正常胰腺组织，并且可能与胰腺癌的增殖、侵袭关系密切。近年来针对EGFR的信号转导系统．设计和合成特异性的EGFR抑制物，可望对胰腺癌的防治开辟新的途径。本文就EGFR与胰腺癌的关系以及以EGFR为靶向治疗胰腺癌方面的新进展作一综述。

摘要：一、对照不全的实例例1原作者探讨转化生长因子(TGF-β1、β2)作为卵巢内调节物在卵巢激素分泌中的调节作用.在无卵泡刺激素(FSH)条件下,TGF-β对颗粒细胞分泌雌二醇有轻度的刺激作用,而对孕酮分泌的影响不明显.在加入FSH后,发现FSH+TGF-β1与FSH+TGF-β2分别提高雌二醇的分泌,而抑制FSH刺激颗粒细胞分泌孕酮的作用,使孕酮的分泌下降可达70%以上.这些作用呈现了一定的时间和剂量依赖性.经分析TGF-β作为卵巢内调节物,参与了卵巢激素的分泌调节.

摘要：目的:观察低强度脉冲超声(low intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对牙本质牙髓复合体损伤修复模型中TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法:25只Sprague-Dawley大鼠随机选择5只大鼠作为空白对照组,不予任何处理。剩余20只于双侧上颌第一磨牙采用改良备洞法备洞,建立牙本质牙髓损伤修复模型,右侧为LIPUS组,予以LIPUS辐照(强度为30 m W/cm2,频率为1.5 MHz,调制信号波宽为200μs,重复率为1 k Hz,20 min/d);左侧为备洞组,予以超声假照处理。分别在辐照1,3,5,7,14 d后处死大鼠,运用免疫组织化学法及图像分析技术检测TGF-β1,Smad 2和3在牙髓组织中的动态表达和定位情况。结果:TGF-β1,Smad 2,3蛋白在正常牙髓组织中均呈弱阳性表达,而在牙本质损伤后出现不同程度的表达增加。备洞组TGF-β1蛋白表达在1 d时增加,在5 d时TGF-β1表达最强,在14 d时表达减弱接近正常水平;与备洞组相比,LIPUS组在3和5 d时表达明显升高(均P<0.05)。Smad 2,3在LIPUS组及备洞组牙髓中表达均呈现逐步升高的基本变化,其中LIPUS组升高更明显(P<0.05)。结论:TGF-β1/Smad 2,3信号通路可能参与了牙本质损伤的修复过程,LIPUS在牙本质损伤修复早期可上调TGF-β1,Smad 2,3的表达,可能参与并促进了牙本质牙髓复合体的损伤修复过程。

摘要：目的筛选胰腺癌中TGF-β1的smad4非依赖性途径作用的相关基因,初步探讨TGF-β1在肿瘤发生、发展过程中的作用机制。方法应用抑制性消减杂交技术,构建TGF-β1作用后差异表达的cDNA消减文库,采用反向Northern blot的方法鉴定是否存在差异表达的基因,对插入片段测序后进行blast的同源性搜索。结果筛选出TGF-β1作用后上调表达的基因10个,下调表达的基因12个,其中13条具有已知功能,9条为未知基因。体外刺激试验也验证了结果中的PKC-α是随着TGF-β1浓度的升高而表达增强。结论TGF-β1作用相关的cDNA消减文库的建立为进一步研究其smad4非依赖性途径与胰腺癌发生、发展的分子机制提供了实验依据。

摘要：目的建立检测细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)10、转化生长因子(TGF)β1、IL4、IL6及其受体单核苷酸多态性位点的寡核苷酸芯片,通过测序等方法评价其性能。方法根据相关文献、参照NCBI的SNP数据库和NCI的SNP500Cancer数据库,选取临床上有意义的细胞因子及其相应受体单核苷酸多态性位点基因和相应序列,设计寡核苷酸探针59条,基因组DNA通过多重多聚酶链反应(PCR)扩增,Cy5标记。标记后的产物与芯片上探针杂交,激光扫描,荧光信号值分析,判断各位点的基因型,并通过测序验证。结果130份外周血样,除10份因时间过久,没有PCR产物外,余120份均检测成功,3次重复检验无差异,测序验证无位点错误。结论寡核苷酸芯片技术检测细胞因子及其受体单核苷酸多态性位点,具有特异性高、敏感性高、重复性好、高通量、操作简便等优点,是一种较为理想的方法。