摘要：以转赖氨酸基因小鼠为研究对象,根据转入基因的载体结构分别设计赖氨酸基因、新霉素抗性基因、转基因启动子及小鼠基因组内参基因特异性引物,优化反应条件,建立转基因小鼠多重PCR检测方法。结果表明,建立的方法可以用于转赖氨酸基因小鼠的检测,同时为转基因动物检测标准的建立提供试验依据。

摘要：为探究睾丸注射法制备转基因动物的可能性,文章将携带有山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和绿色荧光蛋白标签的重组载体经脂质体包裹后随机打点注射小鼠睾丸。对实验小鼠进行睾丸切片、精子荧光检测以及精子DNA检测,证实外源基因在亲代小鼠体内成功表达。睾丸注射后小鼠与正常母鼠交配产生的F1代,以及F1代自交产生的F2代在不同水平均可检测到外源基因的成功表达,阳性率分别为4%和30.23%。研究结果说明睾丸注射是一种制备转基因动物行之有效的方法,且外源基因可以稳定遗传。该方法的完善和成熟对于动物转基因以及动物性状改良和育种具有理论和实践意义。

摘要：目的以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293FT细胞,包装成慢病毒。通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUGW为参照,测定FUW-HLA-G病毒液的滴度。用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下,建立HLA-G转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因整合,用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达,用Western blot检测HLA-G蛋白的表达。结果载体BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致。浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上,符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求。PCR筛选出阳性鼠6只,RT-PCR与Western blot检测结果表明HLA-G基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达。结论通过慢病毒介导的基因转移,成功建立了表达人HLA-G蛋白的转基因小鼠,为研究HLA-G的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型。

摘要：目的:构建过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠,筛选高表达稳定遗传系,建立PP2A Cα基因相关功能研究模型动物。方法:将Flag蛋白标签序列与鼠源PP2A Cαc DNA转录本设计成融合基因,插入CAG启动子下游,构建过表达载体pCAG-3×flag-PP2A Cα。通过原核显微注射技术,将线性化pCAG-3×flag-PP2A Cα质粒注射入受精卵雄原核,构建pCAG-3×flag-PP2A Cα过表达模型小鼠,PCR筛选阳性过表达小鼠。提取阳性过表达小鼠组织总蛋白,在蛋白质水平分析转基因小鼠3×flag-PP2A Cα的表达。结果:PCR鉴定及测序结果证实,pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因载体及过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠模型构建成功。Western blot筛选转基因高表达系小鼠。结论:筛选得到pCAG-3×flag-PP2A Cα高表达稳定遗传系小鼠。

摘要：目的:构建心肌细胞特异性过表达miR-19b的转基因小鼠,并对其进行表型分析。方法:先确定载体插入的酶切位点,根据CloneEZRPCR Cloning Kit重组原理设计相应引物,以小鼠基因组为模板克隆出带有miR-19b前体序列(pre-miR-19b)的目的片段,利用重组酶连接到带有alpha-MHC启动子的载体上。将所得载体线性化后,采用显微注射方法注射到小鼠胚胎干细胞内。再将所得的重组胚胎干细胞移植入假孕的C57BL/6J雌鼠子宫内,在所得的子代,即Founder小鼠中采用特异的引物鉴定出转基因小鼠,并选出相应的品系,进行表型分析。结果:成功构建miR-19b转基因小鼠,且miR-19b转基因小鼠舒张期室间隔厚度、舒张期左室游离壁厚度以及射血分数均有升高。结论:心肌特异性过表达miR-19b可以导致心脏肥大。

摘要：本实验旨在探讨一种简单易行,能有效识别APPSWE转基因小鼠基因检测中假阴性结果的方法。在PCR体系中设计两对引物,一对为APP基因特异性引物,另一对为根据其内源性管家基因β-actin设置的参照引物。利用同一个PCR反应体系,对两对引物进行扩增。结果显示,双重引物PCR扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合,利用该法检出的转基因阳性率高于单引物PCR检出的转基因阳性率。本方法简单易行,能够有效识别以往利用单一PCR检测出现的假阴性结果,并且具有很好的特异性和灵敏性,值得在转基因小鼠鉴定实验中推广。

摘要：为了进一步研究阿尔茨海默病(AD)的发病机制,人们已经设计了各种动物模型诸如胆碱能系统损伤模型、铝模型、tau蛋白模型、Aβ模型等,这些模型尽管可以存在部分特征病理改变,但是均不能模拟人类疾病渐进性的退行性改变。目前日趋成熟的转基因动物(transgenic animal)技术可以在活体上研究某一特定致病基因的作用,是研究AD独特而重要的模型,其中最常用的是转基因小鼠模型。因为AD的人类患者主要表现为进行性的记忆和认知能力的减退,相应的转基因小鼠模型也表现出学习和记忆能力的改变。现在人们已经设计出了多种实验方法对AD的转基因小鼠进行行为学的测试。本文主要是对目前国内外常采用的AD转基因小鼠行为学测试方法作一综述,有助之后相关研究中行为学检测方法的选择与应用。

摘要：目的通过制备Vill转基因小鼠研究该基因的功能。方法与结果首先由RT-PCR方法获得全长约2 605 bp的Vill基因;经T载体克隆测序验证后,以克隆载体pMD19-T-Vill为模板,设计引物并引入酶切位点,将PCR扩增产物与pEF6/V5-His-LacZ同时进行酶切、连接,构建表达载体pEF6/V5His-Vill;经真核表达验证后,酶切获得含Vill基因的显微注射DNA构件;显微注射390枚受精卵后,在出生存活的77只仔鼠中获得转基因阳性G0代小鼠19只,其中16只能够稳定遗传并建系,转基因阳性小鼠外观未有明显改变。结论 Vill转基因小鼠为该基因的功能研究准备了实验材料。

摘要：目的建立MagA转基因小鼠,为活体MRI成像系统提供重要的实验动物模型。方法采用显微注射法,将MagA基因导入小鼠受精卵,再培育成转基因小鼠并繁殖传代。利用PCR方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。结果酶切和DNA测序分析证实MagA基因准确克隆表达载体设计位点,目的基因序列与GenBank中MagA序列完全一致。通过PCR分析,进行转基因整合检测。目前转基因小鼠已稳定传代至第5代。结论 MagA基因在转基因小鼠中整合,成功建立了MagA转基因小鼠。MagA转基因小鼠将成为MRI影像系统的重要实验动物模型。

摘要：采用C57BL/6J小鼠及含有突变基因cDNA序列的转基因载体建立先天性白内障转基因动物模型。方法:利用含有突变型EPHA2基因cDNA全长的转基因载体,经限制性内切酶对载体线性化后注入小鼠受精卵雄原核,后将受精卵植入代孕母鼠子宫。在转基因载体序列选取两个跨功能片段设计2对鉴定引物用于整合鉴定。对转基因阳性小鼠与阴性对照小鼠晶体组织做mRNA表达分析,证实转基因在整合阳性小鼠晶体组织确有特异性表达。结果:首建系小鼠共75只,经整合鉴定确定3只转基因阳性founder小鼠,经与野生C57BL/6J小鼠杂交传代后,产生3代共279只小鼠,其中阳性鼠106 只,阳性率为37.99% 。所有转基因阳性鼠均经裂隙灯检查诊断为先天性白内障表型。提取转基因阳性小鼠晶体组织总RNA,经RT-PCR检测结果为阳性。结论:先天性白内障转基因小鼠动物模型成功建立,转基因在小鼠晶体组织有特异性表达。