摘要：建立大豆及豆制食品中转基因成分分析的real-time PCR扩增体系和方法。选择市售的大豆、豆粉、豆干、豆腐、豆浆和腐竹等6种大豆及豆制食品,针对不同的样品探索高质量基因组DNA的提取方法,扩增大豆内参基因lectin进行质量检测。针对我国批准的3种主要转基因大豆品系(GTS40-3-2,A2704-12和MON89788)设计特异性的引物和探针,进行real-time PCR检测。购买3种转基因大豆品系的标准品作为质控对照。从该6种大豆及豆制食品中均提取到了高质量的基因组DNA,建立了稳定的针对外源基因特异性、结构特异性和品系特异性片段检测的real-time PCR扩增体系。成功建立了6种大豆及豆制食品中针对3种转基因大豆品系成分检测的real-time PCR方法。

摘要：耐除草剂基因g10evo-epsps在我国转基因农作物研发中常常被用作目标性状基因或筛选标记基因,因此可作为转基因成分检测的重要筛查基因,但目前缺少相应的检测方法。本研究旨在建立g10evo-epsps基因特异性的实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,从而为转基因大豆的监测提供一种稳定可靠的方法体系。本研究基于转基因大豆中的g10evo-epsps基因序列设计了qPCR检测引物和探针,并对检测方法的特异性、灵敏度、准确度和精确性进行了实验室内验证。结果显示,建立的g10evo-epspsqPCR检测方法能够特异性检测转基因大豆ZUTS-33中的g10evo-epsps目的基因;标准曲线分析表明,3次重复试验的扩增效率在90%以上,R2均大于0.99;方法的检测限(LOD)为不高于8拷贝,定量限(LOQ)推测为16拷贝;对含量为4.5%、2%、0.5%、0.09%和0.045%的转基因大豆ZUTS-33基因组DNA进行准确度分析,发现该方法测定的平均值和预期值之间的偏差为0.00%~11.11%,3次重复试验的RSDr为2.30%~17.10%。结果表明本研究建立的g10evo-epsps qPCR检测方法能够满足转基因大豆筛查检测的要求,为转基因大豆监管和标识提供技术支撑。

摘要：用CTAB法提取大豆熟坯DNA,试剂盒法提取压榨毛油及脱胶油中的DNA,分别针对内源基因和外源基因设计引物进行PCR扩增或巢式PCR扩增。结果表明,大豆熟坯中可检测到1500 bp左右较长的DNA片段,经过压榨后的毛油中长度约500 bp左右的片段已检测不到,长度200 bp以下的内源基因、外源基因、调控原件可以扩增出清晰的条带。脱胶工艺去除了大部分的DNA,脱胶油中200 bp以下的条带均未检测到,但用灵敏度较高的巢式PCR可检测出清晰条带。通过实验研究了大豆油不同生产工艺后大豆DNA降解和去除的情况,并建立了脱胶油的巢式PCR检测方法,可以为大豆油生产不同阶段转基因成分检测提供引物设计和检测方法的依据。

摘要：[目的]将抗草甘膦转基因大豆中的CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS 3种外源基因融合在PMD-18T载体并建立三重实时荧光PCR检测方法,实现通过一次PCR反应就能完成抗草甘膦转基因大豆的转基因成分检测。[方法]通过PCR扩增和基因克隆的方法构建含有CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS外源基因的质粒,设计TaqMan探针建立三重荧光PCR检测体系。[结果]成功构建融合抗草甘膦转基因大豆3种外源基因质粒PMD18T/SOY,并建立三重荧光PCR检测体系,检测限值为10-3 ng/μL,线性关系良好r,2在0.998以上。[结论]构建同时含有多种外源基因的质粒作为转基因检测的阳性参照物并建立多重PCR检测体系,不仅可降低试剂成本、节省时间和人力,而且可以减少PCR反应次数和加样环节,降低PCR污染的几率。