摘要：构建foxa1的原核表达载体,诱导表达并纯化后获得人foxa1的C端和N端蛋白片段,为寻找foxa1的互作蛋白提供材料基础.提取人乳腺癌细胞MCF7的总RNA,逆转录成cDNA,设计引物PCR克隆foxa1的cDNA,再以此为模板扩增foxa1的C端、N端cDNA片段,分别并克隆进带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒.双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21Rosetta DE3,经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定foxa1蛋白的表达.与MCF7细胞裂解液孵育,进行GST-Pull down试验,检测纯化蛋白与foxa1已知互作蛋白TLE3的相互作用.成功构建pGEX-4T-1-foxa1-C和pGEX-4T-1-foxa1-N的原核表达载体;在大肠杆菌中诱导目的蛋白表达;经Glutathione Sepharose 4B纯化后,获得了人foxa1的C端蛋白片段GST-foxa1-C与N端蛋白片段GSTfoxa1-N;证实GST-foxa1-C能与foxa1已知互作蛋白TLE3的相互作用.