摘要：目的:比较正常人和B细胞白血病患者外周血中黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1(MALT1)2种异构体的分布和表达差异。方法:根据MALT1基因的结构特点,设计2对引物,通过建立2种转录本的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析8例B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、8例B细胞慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)和8例正常人的外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1的表达情况。实时定量PCR分析各组样本的MALT1 mRNA表达水平。结果:所有样本中均能得到所预期的PCR产物,其中第1对引物可以扩增出2条片段,分别为MALT1转录本1(包含第5、6、7、8、9外显子)和MALT1转录本2(包含第5、6、8、9外显子),第2对引物只能扩增出1条包含转录本1的片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实。MALT1 2种转录本均在外周血中有表达,并且MALT1转录本2表达水平高于转录本1。通过灰度分析发现,在B-ALL中,MALT1转录本1的灰度与正常人相比显著增高(P0.05)。此外,B-ALL中,MALT1 mRNA表达水平(中位数:1.253)低于正常人(中位数:1.976)(P=0.05);而B-CLL中,MALT1 mRNA的表达水平与正常人相比无显著差异(P>0.05)。结论:MALT1 2种转录本均表达于正常和B细胞白血病样本中,但B-ALL中两者的表达水平有所差异,同时,B-ALL的MALT1 mRNA表达水平也有所降低。B-ALL中MALT1基因表达的异常可能影响MALT1信号通路而与疾病的发生发展相关。

摘要：目的观察日本血吸虫钙离子通道变异的β亚基(SjCavβvar)在成虫期和童虫期转录本的表达情况,为研究吡喹酮的作用机制提供依据。方法根据日本血吸虫特异性基因序列,设计实时荧光PCR特异性引物,采用SYBRGreen染料法检测SjCavβvar2个虫期的转录本水平。结果雄虫、雌虫与童虫SjCavβvar的mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论SjCavβvar参与吡喹酮作用的机制可能与其他亚基的共表达有关。

摘要：目的:建立分析不同PPP2R5C转录本检测方法,分析正常人和血液肿瘤病人中5种PPP2R5C基因转录本的表达特点。方法:根据PPP2R5C基因的结构特点,设计4对引物,利用RT-PCR方法分析9例正常人、7例T细胞-非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)、11例B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和8例急性髓细胞白血病(AML)病人外周血单个核细胞(PBMC)中PPP2R5C基因的表达情况。结果:所设计的4对引物,均可在样本中扩增到预期PCR产物,其中第1对引物可扩增两个不同大小PCR产物(包含12+13+14外显子的大片段及仅含12+14外显子的小片段),而另3对对引物所扩增的产物分别为10+11+12+12 a外显子,Ⅲ+2外显子和Ⅳ+2外显子的基因片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实。结果显示所有样本均表达全部PPP2R5C转录本。结论:初步建立区分不同PPP2R5C转录本的方法,各转录本在正常人和不同血液肿瘤病人中的分布情况基本一致。

摘要：目的探讨EphA4受体对大鼠海马脑区神经元脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)蛋白质和转录本表达的影响。方法将原代培养的大鼠海马脑区神经元随机分为正常对照组和EphA4-Fc组,EphA4-Fc组给予EphA4受体拮抗剂EphA4-Fc,培养7 d后,Western blot法检测大鼠海马脑区BDNF蛋白的表达,qPCR检测BDNF mRNA的表达。结果与正常对照组相比,EphA4-Fc组大鼠海马脑区神经元BDNF蛋白表达明显升高(P<0.01),mRNA转录本Ⅱc的表达明显升高(P<0.001)。结论给予EphA4-Fc后,大鼠海马脑区神经元BDNF蛋白翻译增加与mRNA转录本Ⅱc表达升高相关。本研究为临床上脑卒中的治疗以及神经元保护提供了新的思路。

摘要：[目的]克隆非洲爪蛙Klf4基因的新转录本,并研究其在早期胚胎发育中的功能。[方法]提取胚胎总RNA,反转录构建c DNA文库。从Xenbase数据库中获得Klf4的基因组序列,分析序列发现新的ATG位点,设计引物、PCR扩增,将扩增的目的片段插入p CS2+,插入位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序鉴定,发现载体中插入的目的片段为编码483个氨基酸的Klf4的新转录本。体外转录获得mRNA,显微注射入胚胎,进行表型分析以及原位杂交检测。[结果]成功克隆出了Klf4基因的新转录本;过表达该转录本,表型分析发现胚胎发育异常,原位杂交检测发现Xag2和Dkk1的表达上升。[结论]成功克隆编码483个氨基酸的Klf4基因的新转录本,过表达该转录本胚胎发育异常,Xag2和Dkk1的表达被激活。

摘要：目的 构建6种转录本人早幼粒细胞性白血病(human promyelocytic leukaemia,hPML)基因的真核表达质粒,并分析其重组蛋白的亚细胞定位情况。方法 根据GenBank中登录的hPML基因序列设计引物,RT-PCR法扩增获得6种转录本hPML基因片段(hPMLⅠ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ),分别连接至真核表达载体pCAGGS,获得6种转录本hPML基因的真核表达质粒。将6种真核表达质粒分别转染293T细胞,Western blot法检测蛋白表达情况;分别转染至Vero细胞,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)法检测亚细胞定位情况。结果 6种真核表达质粒中的目的基因片段均与GenBank中登录的hPML基因序列一致。6种重组蛋白均可与Myc抗体发生特异性结合,其中重组蛋白hPMLⅠ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ定位于细胞核及细胞质内,重组蛋白hPMLⅦ主要定位于细胞质,极少定位于细胞核中。结论构建的6种转录本hPML基因真核表达质粒均可在哺乳动物细胞中正确表达,表达的重组蛋白同时定位于细胞核及细胞质或主要定位于细胞质中。本研究为重组蛋白hPML抗病毒等生物学功能的深入研究提供了实验依据。

摘要：砂生槐为青藏高原特有灌木种,具有重要生态价值。开发多态EST-SSR引物对其居群遗传多样性研究及保护策略的制定具有重要意义。利用SciRoKo v3.4软件对前期获得的砂生槐转录组中146 943个转录本进行扫描共发现9428个SSR位点。转录本中的微卫星种类十分丰富,其中以三核苷酸和五核苷酸重复最多,分别占SSR总位点数的33.32%和21.70%,重复次数主要集中在3-9次重复。其中（AG/CT）n、（GA/TC）n、（GAA/TTC）n、（AAAAT/ATTTT）n重复基序最多,占总重复基序的4.50%、4.34%、3.13%和2.44%。本研究中设计130对ESTSSR引物,有80对扩增出预期大小条带,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,最终有11对具有较高多态性,且对于30个模板得到的位点平均等位基因数为2.9;观测杂合度（HO）和期望杂合度（HE）平均值分别为0.423 9和0.3364。

摘要：目的:研究RASSF1基因在各种肿瘤细胞中的表达情况以及分析RASSF1各成员与肿瘤发生的相关性。方法:设计特异性的引物,用RT-PCR方法检测5种肿瘤细胞中RASSF1家族7种不同转录本mRNA的表达情况。结果:同源序列分析表明,转录本A、D、E序列最长,同源性较高,推测是起主要功能的一类基因,而B、C、F和G等缺失部分较大,可能是细胞突变引起;转录本A、D和E在各种肿瘤细胞中均未见表达,而其他转录本B、C和F在肿瘤细胞中有转录。结论:RASSF1基因7种转录本在被测试的5种肿瘤细胞中的表达存在明显差异,转录本RASSF1的A、D和E等在几种肿瘤细胞中均未表达,说明这几个转录本可能作为抑癌的候选基因。

摘要：目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)各种转录本亚型在成骨细胞分化中的作用。方法应用特殊设计的引物,逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测VEGFmRNA在人类成骨细胞样细胞SaOS2和MG63和胎鼠颅盖骨细胞(FRC)在第0、5、9、14天不同分化阶段中的选择性剪接表达。结果人类成骨细胞样细胞SaOS2和MG63表达所有的VEGFmRNA亚型,其中以VEGF121和VEGF165表达最强。鼠FRC细胞表达3种VEGFmRNA亚型(即VEGF120,VEGF144和VEGF164),其中以VEGF120和VEGF164表达最强。伴随着FRC细胞的增殖、分化和矿化,这些亚型的表达逐渐增强,并且在结节矿化后达到最高水平。结论小分子的VEGF121/120和VEGF165/164在成骨细胞的分化过程中表达增强,可能起重要的血管源性调节作用。

摘要：为探讨一种新型的神经营养因子,Neuritin在神经系统成熟及其损伤后的再生修复过程中发挥着重要的调节作用。为了获得大鼠Neuritin基因转录本及其蛋白结构的基础数据,本研究利用比较基因组学分别设计与小鼠2个转录本同源的引物,采用RT-PCR的方法钓取大鼠Neuritin基因。采用生物信息的方法对大鼠Neuritin的序列同源性及蛋白结构进行全方位分析。结果表明,大鼠只存在一个Neuritin转录本,编码142个氨基酸,与其他动物的编码序列高度同源;三级蛋白结构分析结果显示大鼠Neuritin蛋白富含有α螺旋,其结构和理化性质无异于人类Neuritin基因。由此可知,本研究首次厘定了大鼠Neuritin mRNA,其蛋白质结构的深入分析也为进一步理解大鼠Neuritin基因的生理功能奠定了基础数据。