摘要：转酮醇酶(transketolase,TK,EC.2.2.1.1)是一种焦磷酸硫胺素和二价阳离子依赖性酶,可催化二碳单位的转移,可逆形成C–C键,在多酶催化生产化学品、药物前体和不对称合成方面有广泛应用。文中以大肠杆菌(Escherichia coli)K12转酮醇酶TKTA为研究对象,通过定点饱和突变和组合突变提升对非磷酸化底物的反应活性,并探索突变酶TKTA_M催化合成酒石酸半醛。结果表明:突变酶TKTA_M(R358I/H461S/R520Q)最适反应温度为32℃,最适反应pH为7.0,以D-甘油醛为受体底物的比酶活为(6.57±0.14)U/mg,是野生型比酶活((0.71±0.02)U/mg)的9.25倍。在酶学性质研究的基础上,设计20 mL的反应体系,以50 mmol/L 5-酮基-D-葡萄糖酸和50 mmol/L非磷酸化乙醇醛为底物,TKTA_M催化合成酒石酸半醛,最终酒石酸半醛的产量为3.71g,摩尔转化率为55.34%。研究结果为生物质制备L-(+)-酒石酸提供数据支撑,同时为转酮醇酶催化非磷酸化底物提供了借鉴。

摘要：根据烟草（Nicotiana tabacum）转酮醇酶（transketolase）基因序列设计引物，通过RT-PCR克隆了珊西烟（Nicotiana tabacum *** NN）的transketolase基因，并将其命名为NtTK．该基因全长2235bp，编码744个氨基酸，与已报道的烟草TK基因（A52295）的核酸序列同源性迭99％，与TK基因氨基酸序列一致性达97．16％，有18个不同氨基酸残基，尤其在第101—110位点有连续10个氨基酸残基完全不同．利用pMAL—c2x原核表达载体对transketolase基因进行了原核表达，并获得纯化的蛋白．

摘要：为发现新颖结构的转酮醇酶抑制剂,本研究采用swiss-MODE同源模建拟南芥的转酮醇酶蛋白模型,并运用分子对接技术进行虚拟筛选。基于转酮醇酶与小分子相互作用的预测值,筛选并购买SPECS数据库中的16个化合物。利用小杯法对所筛选出的化合物进行除草活性验证。结果显示,在250 mg/L浓度下,化合物1a、1b、1d、1e、1f、1g、1k、1l和1n表现出较好的除草活性,其中,1l和1n对反枝苋根长抑制率分别为70%和64%,显著高于对照药剂硝磺草酮(45%)和莠去津(56%),同时1l对稗草根长抑制率为70%,显著高于对照药剂硝磺草酮(62%)和莠去津(55%)。另外,油菜经1b处理后表现出叶片黄化失绿等现象,其除草活性值得进一步研究。本研究基于新型的靶标转酮醇酶,运用计算机辅助药物设计分子对接技术和除草生物活性验证策略,可高效筛选得到除草剂先导化合物,对新型除草剂的开发具有重要意义。

摘要：目的筛选出干扰小鼠转酮醇酶(TK)的短发卡RNA(shRNA)表达载体。方法针对TK基因序列设计4条TK干扰序列:hMGFP-shRNA1、hMGFP-shRNA2、hMGFP-shRNA3、hMGFP-shRNA4,PstⅠ酶切鉴定其序列。然后利用质粒转染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,用逆转录-聚合酶链式反应和酶活性方法检测转染TKshRNA后Hepa1-6细胞内TK mRNA和蛋白表达变化。结果经酶切凝胶电泳证实shRNA载体构建正确,质粒筛选实验表明hMGFP-shRNA1质粒对TK基因的抑制作用最强。结论成功构建表达靶向TK的shRNA重组质粒载体。

摘要：基于除草剂新靶标转酮醇酶,采用农药分子合理设计的方法,对化合物α-三联噻吩进行结构改造,以异噁唑胺为核心杂环,引入噻吩、呋喃、苯并咪唑等杂环结构,设计合成9个异噁唑胺类化合物5(a-i)。所有化合物均经1H NMR和元素分析验证,除草活性筛选发现,含有苯并咪唑基团的5c和5f表现出较高的除草活性,在200 mg/L浓度下,对马唐和反枝苋的根茎抑制率达到90%~96%,其优于阳性对照药剂丙炔氟草胺(80%~88%),表明以异噁唑胺为先导,引入苯并咪唑基团有利于提高化合物的除草活性,且5c和5f有潜力作为除草剂候选化合物,值得进一步结构优化。

摘要：D_核糖是一种重要的生理物质,可用于合成维生素B2,风味提高剂以及多种核酸药物等,具有广泛的应用前景。由于化学合成法存在污染公害,故近年来各国相继研究微生物发酵法生产D_核糖,并致力于工业化生产。对D_核糖的性质、生产及应用作了综述。

摘要：本研究基于除草剂新靶标转酮醇酶,采用骨架跃迁的方法对化合物5aw进行了先导优化,通过酰胺键和硫醚键将噻吩、嘧啶、1,2,4-三唑等活性亚结构拼接,设计合成了5个1,2,4-三唑酰胺类化合物8(a-e),所有目标化合物均经IR、MS和;H NMR验证。除草活性测试结果表明,8b和8d具有比阳性对照丙炔氟草胺更优异的除草活性;构效关系研究表明,氯原子取代基有利于提高化合物的除草活性。荧光结合实验表明,化合物8b,8d与转酮醇酶之间亲和力更高,这是由于形成了更稳定的络合物,从而导致它们对此酶产生更强的抑制活性,因此,化合物8b和8d有潜力作为转酮醇酶抑制剂类除草先导化合物,值得进一步结构优化。

摘要：目的观察硫胺素和烟酰胺对高脂饲料诱导的肥胖大鼠能量代谢酶活性的影响。方法采用预防肥胖模型法,2×2析因设计分为4组:高脂对照组(F0),高脂+硫胺素(F1),高脂+烟酰胺(F2),高脂+硫胺素+烟酰胺(F3),每组大鼠12只,高脂饲料喂养;同时每天给予硫胺素100mg/kg bw、烟酰胺250mg/kg bw灌胃,F0组自来水灌胃;设正常对照组(C)12只,普通饲料喂养,自来水灌胃,15w后处死大鼠,检测干预前后红细胞能量代谢酶活性。结果经15w喂养后,F0组大鼠体重比C组平均增加了15.7%;而F2及F3组与F0相比,体重分别降低了35.0%和30.0%(P0.05)。红细胞能量代谢酶结果显示:与F0组大鼠相比,C组红细胞转酮醇酶活力系数(ETKAC)降低了86.55%,Na+-K+-ATPase活性升高了40.54%;F1、F2及F3组,ETKAC分别降低了87.89%、95.07%和86.25%,转酮醇酶(TK)活性显著升高(P<0.05);Na+-K+-ATPase活性分别升高了49.55%、122.17%和57.84%(P<0.05)。结论烟酰胺补充可抑制大鼠体重增长,而硫胺素作用不明显;但二者均可使TK、Na+-K+-ATPase的活性增强,影响机体能量代谢。