摘要：背景:组织工程化软骨的构建为软骨缺损的修复开辟了全新的途径,克服了传统治疗方法的不足。目的:探讨分离骨髓间充质干细胞,在特定培养液条件下诱导其向软骨细胞表型转化的体外培养方法。设计:完全随机实验。单位:广西医科大学第一附属医院创伤骨科、手外科及广西医科大学组织学与胚胎学教研室。方法:实验于2002-08/2003-04在广西医科大学完成。实验动物选择新生断奶SD大鼠20只。抽取大鼠四肢骨髓,Percoll梯度分离液离心分离结合贴壁筛选法得到间充质干细胞,在含体积分数0.15的胎牛血清的低糖DMEM培养液中,置于37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱内培养10～14d。传代后以体积分数0.15的胎牛血清的高糖DMEM培养液(含转化生长因子β110μg/L,地塞米松10-7mol/L,维生素C50mg/L)对其进行诱导培养。主要观察指标:观测在体外特定培养条件下间充质干细胞的形态、生长特点和诱导培养后软骨特异性基质的表达情况。结果:所有20只SD大鼠全部进行分析观察,无一例脱失。①分离获取了较高纯度的骨髓间充质干细胞,保持了细胞的活性。②骨髓间充质干细胞原代培养呈均匀分布的集落样生长,呈长梭形;传代培养中形态特性无明显变化,细胞增殖周期缩短,细胞均质性明显提高。③诱导后的细胞由梭形向多角形转变,Ⅱ型胶原免疫组化阳性。④诱导培养后软骨特异性基质Ⅱ型胶原免疫组化阳性。结论:①采用Percoll梯度分离液离心分离结合贴壁筛选法可获得较高纯度和活性的骨髓间充质干细胞。②间充质干细胞在体外特定培养条件下能大量增殖,实现数量扩增。③间充质干细胞在特定培养液的诱导下能向软骨细胞表型转化,并能分泌软骨特异性基质,可成为软骨组织工程理想的种子细胞。

摘要：背景:前软骨干细胞虽然具有较强的自我增殖能力和多向分化潜能,但生物学性状不稳定,易分化。导入外源性基因能使其永生化,且不改变细胞的表型和性状。目的:建立永生化大鼠前软骨干细胞株,为以后精确调控前软骨干细胞的增殖与分化打下基础。设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-10/2006-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成。材料:出生<24h的新生SD大白鼠,雌雄不限,用于取前软骨干细胞。方法:用LipofectamineTM2000介导基因转染,将含有SV40T抗原基因的真核表达载体pCMVSV40T/PUR导入经免疫磁珠分选出的原代前软骨干细胞进行稳定表达,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆并扩大培养。主要观察指标:①前软骨干细胞的生物学性状。②质粒鉴定。③用免疫细胞化学方法和反转录聚合酶链反应鉴定SV40T抗原基因在转染细胞中的表达。④反转录聚合酶链反应结果。⑤细胞生长曲线。结果:①免疫磁珠分离获得细胞阳性克隆,用免疫组织化学证实FGFR-3表达阳性。②双酶切质粒,电泳证实pCMV为3kb,SV40T基因为2.3kb。③嘌呤霉素分离获得转化后细胞阳性克隆,用免疫组织化学证实FGFR-3表达阳性。④提取RNA后用反转录-聚合酶链反应法成功扩增出588bp的片段。转染细胞经扩大培养,命名为永生化前软骨干细胞。⑤贴壁培养的转染细胞群体倍增时间为(22.98±2.77)h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论:在体外培养条件下,可以从新生大鼠干骺端中分离、培养出前软骨干细胞,pCMVSV40T/PUR转染能使其永生化。

摘要：背景:用组织工程的方法修复软骨缺损克服了传统方法的诸多不足。目的:体外诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型分化,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可行性。设计:完全随机设计,对照实验研究。单位:哈尔滨医科大学组胚教研室及神经生物教研室。材料:Wistar大鼠清洁级动物6只,雌雄不限,来源于哈尔滨医科大学()附属第二医院实验动物中心,实验动物生产许可证号:SCXK(黑)20020002。方法:取第二代成年大鼠骨髓间充质干细胞,实验组用无血清培养液诱导;对照组用含10%胎牛血清的培养液自然分化。Ⅱ型胶原免疫组化、甲苯胺蓝染色检测其分化情况。主要观察指标:软骨细胞的鉴定,不同诱导时间Ⅱ型胶原免疫组化阳性率的比较。结果:诱导后的MSCs具有软骨细胞的特点。结论:成年大鼠骨髓间充质干细胞在特定的培养基能向软骨细胞方向转化,作为软骨组织工程种子细胞具有可行性。

摘要：背景:各种关节损伤、关节手术后导致的创伤性骨关节炎较为常见,关节腔注射透明质酸钠已被视为一种治疗骨关节炎的有效手段。目的:以前交叉韧带切断的方法建立兔创伤性骨关节炎模型,观察关节腔注射透明质酸钠对其关节软骨中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达水平的影响。设计:随机对照动物实验。单位:武汉大学人民医院骨科。材料:实验于2003-04/12在武汉大学人民医院骨科实验室完成。选取清洁级5～6月龄大耳白兔16只,随机数字表法分为透明质酸钠注射组、生理盐水对照组,8只/组。透明质酸钠(上海建华精细生物制品有限公司提供,国药准字2000第366095号)。方法:①两组均建立创伤性骨关节炎模型。每只兔以氯胺酮1.0mg/kg体质量麻醉,单侧膝关节行前交叉韧带切断造模。②术后第5周,透明质酸钠注射组患膝关节腔注射质量浓度为10g/L的透明质酸钠0.3mL,1次/周,连续5周。生理盐水对照组注射等量生理盐水。③术后10周处死,观察两组股骨内髁关节软骨的大体形态学(0分:关节面光滑,色泽正常;1分:关节面粗糙,有小的裂隙,色泽灰暗;2分:关节面糜烂,软骨缺损达软骨表层或中层;3分:关节面溃疡形成,缺损达软骨深层;4分:软骨剥脱,软骨下骨质暴露)和组织学病理变化,采用反转录聚合酶链反应方法检测软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达情况。主要观察指标:①两组股骨髁关节面标本大体观察结果。②两组股骨内髁软骨光镜组织学观察结果。③两组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达。结果:实验选取清洁级大耳白兔16只,全部进入结果分析。①两组股骨髁关节面标本大体观察结果:解剖显微镜下观察股骨髁关节面病理变化,透明质酸钠注射组软骨退变程度较生理盐水对照组明显减轻。②两组股骨内髁软骨光镜组织学观察结果:透明质酸钠注射组见软骨膜变性脱落,表层软骨细胞变性、坏死、排列紊乱,形成糜烂;生理盐水对照组见软骨细胞变性、坏死,排列紊乱,溃疡病变达软骨深层,并见新生的毛细血管和成纤维细胞增生,溃疡底部见纤维组织增生。③两组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达:透明质酸钠注射组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA表达量均值为1.09±0.18,生理盐水对照组的表达量均值为1.26±0.23,两组基本相似(P>0.05)。结论:关节腔注射透明质酸钠对早期骨关节炎软骨具有修复和保护作用,能有效减轻早期创伤性骨关节炎关节软骨的退变,对诱导型一氧化氮合酶的表达没有下调作用。

摘要：目的:自行设计应用自体软骨-软骨膜复合物进行移植,修复手指关节的软骨缺损,达到重建关节面的目的。方法:2005年10月至2009年10月治疗11例手外伤患者,其中男7例,女4例;年龄17～50岁,平均29岁;均伴有严重手指关节毁损。进行自体软骨-软骨膜移植术,术后指导其进行适当的功能锻炼。术后按手部关节的综合评分法进行评分。结果:全部患者获得随访,时间1～4年,平均24个月。手术全部成功,无感染出现。术后2年随访,手部关节综合评分平均(41.0±0.63)分;其中优(>38分)8例,良(35～38分)2例,差(<30分)1例。结论:自体软骨-软骨膜复合物移植术,对关节软骨毁损的修复重建功能效果好,减少了手部外伤的伤残率。

摘要：民族品牌是千锤百炼的金字招牌。可一位有识之士戏言：有些中国民族品牌是广告“炸”出来的，是网点“铺”出来的，是价格“杀”出来的，是花样“翻”出来的。此话可谓一语击中要害。“炸”、“铺”、“杀”、“翻”这四招确实也成就了一些民族品牌，可绝大多数只是昙花一现，如过眼烟云。这四招其实只是四根“软骨”，在勉强支撑着某些民族品牌，朝不保夕。

摘要：目的:尝试以骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)为种子细胞,利用细胞聚集体复合聚乳乙醇酸(PLGA)内支撑体,在外支架塑形以及生物反应器环境下构建人鼻翼形态软骨。方法:全骨髓培养法收集培养兔BMSCs,转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导,高密度连续培养构建出膜状细胞聚集体,制作人鼻翼形态PLGA内支撑体,将细胞聚集体缠绕在其表面,并用金属外支架对复合体进行塑形,进入生物反应器动态培养8周。取材从大体形态、组织学特点、蛋白多糖(glycosam inoglycans,GAG)含量以及抗压性能等方面评价新生软骨的质量。结果:体外构建的组织工程软骨保持了预先设计的外形,外观及组织学结构均类似于天然软骨,含有丰富的蛋白多糖。结论:细胞聚集体复合支撑体能形成特定形态的软骨组织,形成的组织结构均匀,细胞表型维持良好,并为软骨缺损的修复提供了新的方法。

摘要：目的:设计一套计算机控制的组织工程软骨实验用灌流型生物反应器。方法:通过计算机控制时间及流量,利用蠕动泵、密闭的硅胶管、玻璃管、储液瓶等串联设计一套无菌的灌流型软骨组织工程用生物反应器。结果:生物反应器由控制系统和培养系统组成,运行良好,能置于培养箱中对软骨细胞材料复合物进行动态培养。结论:反应器设计合理。整个生物反应器系统运行可靠。

摘要：作者以正常人股骨头软骨和坏死的关节软骨制成标准试样,进行拉伸试验,得出数据和曲线,为新型人工关节假体的设计提供了理论依据。