摘要：小肠上皮细胞刷状缘侧的寡肽转运蛋白(PEPT1)以及侧底膜的寡肽转运蛋白是寡肽转运蛋白(PEPT)的2种亚型,它们在寡肽及拟肽类药物(peptidomimetic drug)肠转运中发挥重要作用。通过前体药物(prodrug)设计将一些吸收差的药物修饰成类似二肽或三肽的结构,在PEPT1的介导下吸收,能够提高这些药物的口服生物利用度,这是非常有意义的。

摘要：目的 :用丙型肝炎 (丙肝 )病毒 (hepatitisCvirus,HCV)胞膜蛋白 2 (envelopeprotein 2 ,E2 )胞外区片段 ,构建酵母双杂交体系中“饵”载体 ,明确其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用 ,验证其能否用于酵母双杂交体系筛选cDNA文库。方法 :设计引物 ,从本室构建的含中国株Ⅲ型HCVE2片段的载体上 ,扩增出不包含C末端跨膜区的E2片段E2 6 6 1,经EcoRI和PstI双酶切后 ,克隆到酵母双杂交的“饵”载体pAS2 1质粒上 ,构建成载体pAS2 1 E2 6 6 1。阳性克隆经EcoRI和PstI双酶切鉴定后 ,转入酵母中 ,用酵母蛋白抽提物作Western杂交 ,证实其表达 ;滤膜印记杂交验证其有无自身激活作用。结果 :所构建的载体 pAS2 1 E2 6 6 1双酶切后 ,片段大小正确 ;转入酵母后 ,提取酵母质粒 ,PCR扩增出预期大小的片段 ,Western杂交出现阳性条带 ;滤膜杂交 ,转有 pAS2 1 E2 6 6 1和阴性对照pLAM5 ' 1的酵母菌落没有激活报告基因 ,而GAL4全长的阳性对照菌落变为蓝色。结论 :含有HCVE2 6 6 1的“饵”载体构建正确 ,在酵母细胞中能表达出E2蛋白 ,并且没有自身激活报告基因的功能 ,能够应用于酵母双杂交体系。

摘要：目的 :VEGF C基因的真核表达载体 ,以便进一步研究VEGF C基因在淋巴管生成中的作用。方法 :根据人VEGF C的cDNA序列 ,设计合成一对 5’端分别含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的特异性引物 ,运用RT RCR方法扩增人乳腺癌细胞MDA MB 2 31中的VEGF CcDNA(1 2 6kb) ;回收PCR产物 (1 2 8kb) ,并将其连接至克隆载体pUMT 18中 ,重组的pUMT 18在大肠杆菌DH5α内扩增后 ,经质粒提取、EcoRⅠ和BamHⅠ酶切 ,筛选出阳性重组子 ,并进行基因测序鉴定 ;琼脂糖凝胶电泳回收含有VEGF CcDNA全长的酶切片断 (1 2 7kb) ,然后在DNA连接酶作用下将其与真核表达载体pcDNA3 1(- )连接 ,重组质粒经EcoRⅠ和BamHⅠ酶切予以鉴定。结果 :RT PCR产物含有VEGF CcDNA ,基因测序显示重组的pUMT 18中含有正确的人VEGF CcDNA全长序列 ,重组的pcDNA3.1(- )中含有人VEGF CcDNA全长序列。结论 :VEGF C pcDNA3.1(- )。