摘要：背景：血管平滑肌细胞过度增殖是血管支架置入或血管成形后发生再狭窄的重要机制,如能有效调控血管平滑肌细胞增殖必将对再狭窄的治疗产生积极影响。目的：观察PTEN基因对血管损伤后再狭窄的调控作用和过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂罗格列酮对血管平滑肌细胞PTEN蛋白表达的作用。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-01/03在深圳市人民医院动物实验中心完成。材料：SPF级雄性SD大鼠45只,体质量350～400g,用于建立大鼠颈动脉球囊损伤模型。方法：45只SD大鼠随机数字表法分为对照组,损伤组和罗格列酮组,每组15只。损伤组：球囊损伤左侧颈总动脉,在球囊损伤前3d开始给予生理盐水灌胃;罗格列酮组：在左侧颈动脉球囊损伤前3d开始给予过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂罗格列酮5mg/（kg？d）灌胃;对照组为手术找出左侧颈总动脉,但不予球囊损伤,术前3d开始给予生理盐水灌胃。3组分别于球囊损伤后14d取材。主要观察指标：病理切片观察大鼠颈总动脉形态学变化,免疫组织化学检测各组血管PTEN、α-actin的表达,WesternBlot检测各组PTEN表达量的改变。结果：①球囊损伤后14d各组标本苏木精-伊红染色可见不同程度内膜增厚。病理切片结果分析显示,损伤组内膜增生程度明显高于对照组（P〈0.05）,罗格列酮组内膜增生程度明显低于损伤组（P〈0.05）。②PTEN主要表达在血管平滑肌细胞胞浆,胞核亦有部分表达。③WesternBlot检测各组目的条带与内参α-actin的灰度值比值发现,罗格列酮组PTEN表达量较其他两组明显增高（罗格列酮组0.82±0.06,损伤组0.54±0.05,对照组0.57±0.03,P〈0.05）。结论：PTEN基因在调控血管损伤后再狭窄中起重要作用,促进血管平滑肌细胞PTEN表达可能是过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂罗格列酮治疗血管损伤后再狭窄机制之一。

摘要：背景:过氧化物酶体增殖物激活受体γ是细胞分化重要的调控因子,通过调节其他转录因子的表达,参与调节骨髓间充质干细胞的分化。目的:构建pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ真核表达载体,体外转染兔骨髓间充质干细胞,为过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体功能和基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-09/2008-07在南华大学附属一医院临床研究所完成。材料:选择雄性2～5月龄新西兰大白兔,用于分离培养骨髓间充质干细胞。方法:应用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,贴壁法不断纯化。从正常小鼠的肝组织中提取总RNA,反转录-聚合酶链反应法获得过氧化物酶体增殖物激活受体γcDNA,经XhoⅠ,ApaⅠ双酶切,定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ。主要观察指标:经酶切分析和测序鉴定重组质粒中过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因的完整性和真实性,脂质体介导下体外转染骨髓间充质干细胞,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率,提取总RNA和总蛋白,进行反转录-聚合酶链反应和Westernblot检测。结果:获得的过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因片段经酶切和测序鉴定正确,重组质粒经酶切和测序鉴定证实构建正确,成功转染骨髓间充质干细胞,在其中检测到目的基因及蛋白表达。结论:实验成功构建了pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ重组质粒,同时在转染的骨髓间充质干细胞中获得了过氧化物酶体增殖物激活受体γ的高效表达。

摘要：背景:骨髓间充质干细胞成骨分化与成脂分化方向对骨再生和修复的影响是目前的研究热点,过氧化物酶体增殖物激活受体γ特别是过氧化物酶体增殖物激活受体γ2和核心结合因子α1对骨髓间充质干细胞分化方向有调控作用。目的:分析2型糖尿病大鼠骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体γ和核心结合因子α1的表达变化与骨折愈合障碍的关系。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-08/12在中南大学第三附属医院中心实验室完成。材料:选用雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为2组,对照组10只,实验组20只,分别给予普通饲料、高糖高脂饲料喂养。方法:大鼠喂养8周后断尾法取血,实验组腹腔注射链脲佐菌素30mg/kg,对照组注射等量枸橼酸盐缓冲液。注射2周后断尾法取血,建立大鼠左胫骨牵引成骨模型,行左胫骨中上段骨干横行截骨,安置特制延长外固定架,牵引14d。主要观察指标:行X射线摄片比较2组大鼠牵引间隙内骨痂的形成;在组织学水平观察牵引骨痂内微骨柱及初始基质前沿形成及骨折两端髓腔内脂肪细胞形成,并计算骨折两端髓腔内脂肪细胞与骨髓腔面积百分比;以反转录-聚合酶链反应法检测双侧股骨骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体γ和核心结合因子α1mRNA的表达。结果:实验组大鼠高糖高脂饲料喂养8周后,总胆固醇、三酰甘油及空腹胰岛素浓度均高于对照组(P<0.05～0.01);实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素2周后:空腹血糖、总胆固醇及三酰甘油浓度高于对照组(P<0.05～0.01),说明2型糖尿病建立成功。X射线摄片显示,实验组大鼠骨折断端之间牵引骨痂形成明显减少,骨痂组织学检查表现为微骨柱基质排列紊乱,初始基质前沿浅染。组织学检查显示,实验组大鼠骨折两端髓腔内脂肪细胞及脂肪细胞占骨髓腔面积百分比高于对照组(P<0.01)。反转录-聚合酶链反应法检测显示,实验组大鼠双侧股骨骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA表达上调(P<0.05),核心结合因子α1mRNA表达下调(P<0.05)。结论:2型糖尿病大鼠骨折愈合障碍可能与2型糖尿病条件下骨髓腔内过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA表达增加及核心结合因子α1mRNA的表达受抑制有关。

摘要：目的:研究干扰RNA片段对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达的影响,了解PPARγ基因表达量发生变化的时候,内皮素-1(ET-1)的基因表达量有无变化,以探讨PPARγ及ET-1基因在动脉粥样硬化致病机制中的作用。方法:采用siRNA Expression Cassette方法干预体外培养的人正常脐静脉内皮细胞,通过RT-PCR、适时定量PCR(quantitative real-time PCR)及Western blot法检测PPARγ及ET-1的mRNA、蛋白质表达水平。结果:针对PPARγ基因设计的siRNA Expression Cassette 1(1 326)使PPARγmRNA及蛋白表达量下调,ET-1 mRNA表达量增多,二者之间表达量的mRNA灰度比值变化有相关性(r=0.995,P=0.042)。siRNAExpression Cassette 2,3,4片断未能发挥干扰效应。结论:干扰RNA片段siRNA Expression Cassette 1(1 326)对PPARγ的基因表达有抑制作用,可以在转录水平抑制PPARγ在人脐静脉内皮细胞的基因表达,同时使ET-1基因表达上调。

摘要：目的研究短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)真核表达载体在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendo-thelial cell,HUVECs)中对人过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达的抑制作用。方法设计3条靶向PPARγ的shRNA,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中构建重组载体,经酶切鉴定和测序确认后,将3个重组表达载体转染到HUVECs,利用Western blot检测并筛选出抑制效果最好的重组表达载体。结果通过酶切鉴定和测序分析,靶向PPARγ的3个pGPU6/GFP/Neo-shR-NA重组载体构建成功,Western blot结果显示pGPU6/GFP/NeoshRNAPPARγ3可有效抑制高糖诱导HUVECs中PPARγ基因的表达,抑制率为63.2%。结论 PPARγ基因靶向shRNA真核表达载体构建成功,且能有效抑制HUVECs中PPARγ基因的表达。

摘要：绝经后骨质疏松症(PMOP)是由于绝经后女性卵巢功能衰退、体内雌激素水平降低引起的一种累及全身骨组织的代谢性疾病,其导致骨质快速丢失、骨折风险增加,严重危害绝经后女性的身心健康和生存质量,造成巨大的经济和社会负担。PMOP的发病机制较复杂,但确切机制目前尚未阐明。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素、Wnt/β联蛋白、信号素3A/神经纤毛蛋白-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ等信号通路和免疫因子均可能参与PMOP的调节,形成体内调控网络,引起骨改建过程失衡,骨破坏大于骨形成,最终导致PMOP。因此,进一步明确PMOP的发病机制和精准信号调节通路,可为PMOP的防治提供理论依据和潜在治疗靶点。

摘要：目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心房肌细胞肿胀激活性氯电流(ICl,swell)通道重构的干预作用及相关机制。方法:以体外培养的心房肌细胞系HL-1为研究对象,分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+吡格列酮组、AngⅡ+夹竹桃麻素组。采用分光光度法测定细胞内活性氧(ROS)水平和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)活性,全细胞膜片钳检测ICl密度。结果:与对照组相比,AngⅡ组ICl密度增高,伴有ROS产生明显增多及NOX活性升高;吡格列酮或夹竹桃麻素预处理可明显抑制AngⅡ诱导的上述效应(P均<0.05)。结论:吡格列酮可抑制AngⅡ诱导的ICl重构,其机制可能与抑制氧化应激反应有关。