摘要：本文应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测乙型脑炎病毒基因。所设计引物在E基因组,引物1位于碱基序列的第1953～1972位,引物2位于第1788—1806位。反应产物为185bp,内含HaeⅢ限制性内切酶位点。产物在含溴化乙锭的2％琼脂糖中电泳。本法可特异性地检测乙型脑炎病毒核酸,并可检出少至5TCID_(50)的病毒RNA。

摘要：利用与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组５＇非编码区保守序列同源的套式引物，建立了检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，由于在引物设计中选择了最保守的区域且避开了与黄病毒属的同源序列，保证了ＰＣＲ检测的灵敏度和特异性。经逆转录和两轮ＰＣＲ扩增，可检出１×１０－３ｕｌ血清中的ＨＣＶＲＮＡ。研究了影响ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ检测的各种因素，并对ＲＮＡ分离及ＲＴ－ＰＣＲ反应体系进行了优化，在此基础上研制了ＨＣＶ的ＰＣＲ检测试剂盒。

摘要：为探讨逆转录过程对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)定量检测的影响,本研究针对PRRSV保守性序列设计引物,优化反应体系及反应条件,建立准确检测PRRSV的数字PCR方法,并选择5种不同逆转录试剂盒,分析逆转录过程对数字PCR检测结果的影响。结果表明,建立的数字PCR方法线性关系良好(R^2为0.9995及0.9999),重复性良好(变异系数1.01%);利用不同逆转录试剂盒得到的定量结果存在显著性差异,揭示逆转录过程是影响RNA病毒定量检测的关键因素,提示实验过程中不同逆转录试剂盒的选用需要考察与分析。

摘要：本文应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ⅱ型登革病毒基因。所设计引物在E基因区,引物1位于碱基序列的1566—1586,引物2位于1437—1458。引物在黄病毒属中为Ⅱ型登革病毒特有,它是Ⅱ型各株保守区。反应产物为150bp,内含一个HindⅢ酶位点,酶切后有111bP和39bp两个片段。使用本法对一系列稀释的培养液进行检测,可检出少至5TCID_(50)的病毒RNA。此外还检测了10份经病毒分离与免疫萤光分型证实为Ⅱ型登革热病人的血清和14份疑似Ⅱ型登革热病人但病毒分离阴性的急性期血清。证明本法敏感性明显高于病毒分离。

摘要：目的将逆转录(RT)、多重交叉置换扩增(MCDA)以及基于纳米颗粒的测流生物传感器(LFB)结合在一起,建立一种快速检测H5N1禽流感病毒的新方法。方法根据H5N1禽流感病毒中血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的特异性基因序列分别设计一套MCDA引物组。实现在一个反应体系中对目的基因HA和NA的逆转录和MCDA扩增,最终检测结果通过LFB显示。此方法被命名为H5N1-RT-MCDA-LFB。优化H5N1-RT-MCDA-LFB方法的最佳反应条件,同时评价此方法的敏感度和特异性。结果H5N1-RT-MCDA-LFB方法在恒温65℃下孵育40 min便可实现良好的扩增效果。该方法的检测下限为100 fg/反应,检测敏感度比实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)(检测下限为10 pg/反应)高100倍。该方法在对除H5N1禽流感病毒以外的其他28种常见病毒、支原体、衣原体、细菌和真菌的检测中均为阴性。除此之外,H5N1-RT-MCDA-LFB方法在模拟临床样本中得到较好的验证,其检测下限为1×10^(2)拷贝/ml。结论H5N1-RT-MCDA-LFB方法具有简便、快速、敏感度和特异性高等特点,是一种有效检测H5N1型禽流感病毒的分子诊断技术。

摘要：人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)作为逆转录病毒,在进入宿主细胞以后其正链RNA基因组就在逆转录酶的作用下开始逆转录合成双链的DNA。HIV-1逆转录的过程大致包括以下几个步骤:负链强力终止DNA的起始合成,负链强力终止DNA的链转移,正链DNA的合成起始,正链强力终止DNA的链转移和最终完整双链DNA的合成。逆转录是HIV-1复制的重要环节,现已成为抗HIV-1药物研究开发的重要靶标。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)可用来检测HIV-1的逆转录过程,设计引物扩增HIV-1基因组R/U5序列、U3序列、U5/PBS序列和LTR与Gag之间的序列,根据PCR结果可相应判断出HIV-1的逆转录是否起始、是否进行了负链的链转移、正链的起始和双链DNA的完整合成。本文将主要介绍逆转录过程以及应用PCR的检测方法。

摘要：庚型肝炎病毒基因组为单链、正股ＲＮＡ、全长９，３９２Ｂｐ。根据５’－非编码区基因序列设计合成两对引物。随机选取酶联抗－ＨＧＶ阳性病人血清３份，阴性病人血清６份，应有和逆转录－巢式降合酶链反应进行检测。结果２份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较强的特异扩增带，１份抗－ＨＧＶ阳性血清可见较弱的特异扩增带。其余６份抗－ＨＧＶ阴性血清均无特异扩增带。特异扩增片断大小与设计相符，结果表明本方法特异。

摘要：本项技术选取丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）ＲＮＡ的非抗原编码区的相对保守区为靶序列，设计两对引物，进行巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＨＤＶＲＮＡ。血清及肝组织采用蛋白酶消化法提取ＲＮＡ。结果发现９８例各型病毒性肝炎血清中，ＨＤＶ—Ｍ阳性组ＨＤＶＲＮＡ检出率为５６６％（３０／５３），ＨＤＶ—Ｍ阴性组为８９％（４／４５）（Ｐ＜００１）；ＨＤＡｇ或／及抗ＨＤＩｇＭ阳性血清测定ＨＤＶＲＮＡ的阳性率为５７１％（２８／４９），抗ＨＤ阳性血清的阳性率为５００％（２／４）；９例ＨＤＶ—Ｍ阳性肝组织测定ＨＤＶＲＮＡ阳性者６例，２例ＨＤＶ—Ｍ阴性肝组织均阴性。本项技术是在分子水平上检测病毒核酸、操作简便、稳定、可靠、特异性高、重复性好，可以作为ＨＤＶ血清学指标的佐证和补充，肝组织ＨＤＶＲＮＡ的测定可应用于回顾性研究，在临床病原诊断、抗病毒疗效判定、病毒复制、重叠感染等研究方面提供重要实验依据。

摘要：实时RT PCR是一种新技术 ,它利用荧光实时检测PCR反应 ,灵敏度高、特异性好、节约时间。本文对分子灯塔、DNA结合染色、杂交探针和水解探针四种方法的原理、特点作了简要的介绍。并比较了三种可供选择的仪器 ,即ABIPrism770 0、Lightcycler和BioradiCycler各自的特点。使用特定的仪器、选择不同的实时RT PCR策略 ,可以将实时RT PCR应用于绝对定量、检测点突变和等位基因、mRNA结合变量 ,并可通过优化设计 ,实现多重RT

摘要：背景由于肺癌患者的死亡率仍在很高水平，开发敏感的检测方法仍是一项迫切的任务。本文作者设计了普通黑素瘤抗原基因(MAGE)引物用以同时检测出MAGE A1-6亚型。这些引物应用于经痰标本检测肺癌。方法这一研究包括了53例癌症患者组和3个非癌症组(193位健康人，