摘要：基因捕获技术是目前最具应用前景的基因克隆方法之一。利用该技术建立的随机插入突变的突变体文库,可用于寻找、鉴定和研究大量未知功能和已知功能的活化基因,它是继自然突变、物理突变和化学突变之后发展起来的新的分子生物学方法。基因捕获载体是带有报告基因和／或选择标记基因的不完整的基因表达载体;这些载体所带的基因只有在整合到宿主功能基因内部且与融合的宿主基因编码框一致时才能得以表达。经典的基因捕获载体有:增强子捕获载体、基因捕获载体和启动子捕获载体。增强子载体只有一个最小化的启动子控制下游报告基因的表达活性。只有当启动子上游存在一个增强子时才能启动其下游基因的转录;而单独依靠这个启动子则不能转录。狭义的基因捕获载体是指插入到结构基因内部从而捕获该基因的载体,分为内含子捕获载体和外显子捕获载体。前者插入内含子,因此需要在无启动子的报告基因前面添加一个splice acceptor(SA)位点;后者插入外显子,因此不需SA位点就能产生融合蛋白mRNA。启动子捕获载体由一个无启动子的报告基因和选择标记基因组成,只有在捕获载体插入到内源基因的外显子中,且两阅读框一致的时候才会有报告基因和被捕获的内源基因上游编码区的融合蛋白的表达。利用某些遗传元件的遗传特性也可以构建非常有用的捕获载体。常用的有:逆转录病毒介导的捕获载体和转座子介导的捕获载体等等。该文较为全面地概括了转座子介导的捕获载体的用途和研究现状。比如:在拟南芥中应用Ac／Ds转座子元件,在果蝇中应用P-element和piggyBac转座元件,在斑马鱼中应用Tol2转座子元件,在脊椎动物研究中应用Tcl／meriner转座子超家族,以及在哺乳动物和小鼠ES细胞中应用piggyBac 转座子元件。还列举了设计新颖的载体优化策略,比如:发展新的选择标记基因,利用内源核糖体识别／结合位点(IRES), 去掉起始密码子和加一小段接头(linker)等方法。最后介绍了几种针对特定实验目的而设计的捕获载体。附录部分还列出了关于基因捕获技术的网络资源。

摘要：恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病,死亡率极高。50％病人可以手术和放疗,另外50％病人因不能手术和放疗而需化疗。然而这些病人常化疗失败,其主要原因是肿瘤产生耐药性。人恶性肿瘤中MDR1基因及其产物P-糖蛋白(Pgp)表达非常普遍,约50％的肿瘤在治疗前即有MDR1基因表达,治疗后MDR1基因表达的百分比更高,同时肿瘤细胞对原先敏感的抗癌药物也不敏感,即产生了耐药性。ribozyme是一类具有RNA限制性内酶活性的RNA分子,可以识别RNA序列中的GUX(X为A,C,U)序列并进行有效切割,其中一种具有锤头结构(hammerhead)模型特征,根据此原理人工设计的ribozyme可以特异地定点切割靶RNA分子,阻断蛋白质表达。我们曾发现MDR1反义RNA可以明显抑制Pgp表达,但没有完全抑制。本研究利用逆转病毒介导的MDR1基因特异ribozyme,抑制人肺癌耐药细胞Pgp表达,探讨逆转其耐药性的可能性。

摘要：综述目的：动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，是发达社会中发病率及死亡率的主要原因。许多研究显示，巨噬细胞和T淋巴细胞在本病的发病机制中的多个方面起到关键作用。由于这些细胞最初来源于骨髓前体细胞，因此通过逆转录病毒转染造血干细胞对动脉粥样硬化进行基因治疗的观念已受到很多关注。本综述总结了为实现这一目标所做的最新研究进展。近期发现：通过逆转录病毒将基因导入造血干细胞的方法在临床应用中受到一定的阻碍，部分原因是由于缺乏介导基因持久的细胞特异性表达的载体。崭新的逆转录病毒和慢病毒载体的设计就可以解决这些困难，提供在动脉粥样硬化病损部位的特定细胞处表达治疗基因的途径，我们将在本篇综述中详细的介绍这方面的最新进展。我们还将根据我们的理解重点介绍动脉粥样硬化发病机理中的进展，可能提供新的基因治疗目标。小结：通过逆转录病毒转染造血干细胞对动脉粥样硬化患者进行的基因治疗虽然仍是一个长期的计划。然而，通过逆转录病毒载体使基因在特定受损细胞中表达这一技术的新近发展，使更多的有针对性的治疗策略得以发现。这种病毒载体更为我们进一步研究该病的病理机制提供了有价值的实验工具。

摘要：(一)阅读下面的文字,完成1~3题。戏剧和小说一样,在当代人的探索和实验中,出现过淡化情节、不要故事的倾向,但在中外文学史和戏剧史上似乎很难找到没有故事和情节的伟大小说或经典戏剧。英国小说家佛斯特曾强调'小说是说故事',王国维曾断言:'戏曲者,谓以歌舞演故事也。'高尔基说:'对戏剧的基本要求是:戏剧应该是现实的、有情节的、充满着行动的。'小说、戏剧同为叙事艺术,都是讲故事的艺术。

摘要：自从Cheh发现核酶以来,核酶的体外及细胞内应用取得了很大进展。人们已成功地设计、合成了核酶,并将其应用于抗病毒和抗肿瘤研究。现对国内外有关核酶的研究作一综述。

摘要：20多年前,分子生物学家率先认识到基因工程在医学领域有巨大发展潜力,与之相呼应,基因疗法的研究于近年问世,并得到迅速发展。本文专就肝基因疗法(hepatic gene therapy)的研究进展作一综述。基因疗法的概念基因疗法的原理,是将专门设计的治疗基因(therapeutic gene)引导入人体特定的细胞内。

摘要：首先用一步法从正常人胚胎肺细胞中提取了细胞总RNA,反转录合成cDNA第一链,再以此为模板,用事先设计并合成的特异引物进行PCR,得到了编码成熟p21的cDNA。插入到pUC18载体中,进行序列分析。测序的结果与国外报道的序列一致。 随后,我们将p21和p53的cDNA分别克隆至真核表达载体pMSCV,该载体含有Neo标记基因和逆转录病毒的LTR启动子。

摘要：近年来抗人体免疫缺陷病毒(HIV)药物的研究进展非常迅速。迭氮胸苷(Azidothymidine,AZT)是目前唯一获准正式用于治疗HIV感染的药物,但由于毒副作用大,疗效不甚理想,且价格昂贵等因素,故迫切需要研制出更为理想的药物代潜AZT。为早日征服AIDS这一引起世界性恐慌的致死性疾病,人们围绕HIV的生活周期,针对不同环节设计、研制了许多新的抗HIV的药物,其中一部分已投入或即将投入临床试用,以下就抗HIV药物的研究进展进行综述。一。

摘要：目的本文以逆转录病毒作为载体将sflt-1基因结构中前3个免疫球蛋白区域的编码序列插入 ,构建成含有sflt-1的载体 ,为抑制肿瘤的血管新生提供基础。方法与结果1、sflt-1基因制备购买新鲜胎盘 ,用异硫氰酸胍提取总RNA。经RT -PCR制备sflt-1基因 ,引物设计如下 :P1 :5’ -GGAATTCCGCGCTCAC CATGGTCAGC -3’ ;P2 :5’ -TTGGATCCTACCGCTTGCCAGCTACG GTTT-3’。目的基因共1080bp,包含sflt-1前三个免疫球蛋白区域 ,两端分别加上EcoRI和BamHI位点。PCR反应设定 :94℃5min,使模板充分变性 ,94℃1min ,55℃1min ,72℃1min30s ,共30个循环 ,72℃10min。PCR产物有目的片断和600bp的杂带 ,经调整复性温度不能去除 ,将含目的片断的凝胶条带切下并提取DNA。2、sflt—1基因片断的克隆与测序用 pUC -T-vector将目标DNA接入质粒 ,DNA片断A -tailing:2μl10Xbuffer,1UTaq酶 ,0 .5μl10mMdNTP ,纯化的DNA片断 ,共组成201反应体系。72℃15min。纯化DNA连接反应 ,1μlpUC_mT ,1μl2Xbuffer,1150 %PEG8000 ,纯化的DNA产物70g,0 .5μlT4DNA连接酶 ,加适量水组成10μl反应体系 ,20℃温育8h ,22℃温育8h ,连接反应产物转化感受态细菌 ,置于含50g/m1青霉素的LB平板 ,37℃过夜 ,挑取克隆在LB中扩增 ,提取质粒后用EcoRI和BamHI酶 切 ,

摘要：囊性纤维化(cystic fibrosis,CF)是由编码cAMP调控阴离子通道的囊性纤维化跨膜电导调节剂(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)基因突变引起的常染色体隐性遗传病。CF虽然是一种多器官系统疾病,但大多数CF患者死于继发的肺部疾病,大多在儿童期发病,以慢性细菌感染和炎症为特征。近90%的CF患者至少有一个ΔF508基因拷贝突变,如果有数百个CFTR突变会导致一系列严重的疾病。无论何种致病突变,CFTR基因替代方法都是有效的。从1989年发现CFTR基因后,CF基因治疗的体外试验在1990年迅速开展。从1993年开始许多基因治疗的临床试验开始尝试修复气道上皮细胞CFTR缺陷。尽管学者们热情很高,但FDA还没有批准CF基因治疗。该综述主要讨论CF基因治疗的发展史,从CFTR发现基因到目前最先进的载体设计。虽然CF基因治疗的实施比最初设想的更具挑战性,但由于不断的创新,未来有可能成为现实。