摘要：目的获得编码人尿酸转运蛋白(humanuricacidtransporter,hUAT)的全长基因。方法从人肾小管上皮细胞株(HK-2)中提取总RNA,根据Genbank中hUAT基因序列设计特异性引物,然后通过RT-PCR法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pEGFP-C1连接,经酶切及序列分析鉴定。结果成功扩增出980bp的hUAT全长基因,克隆到pEGFP-C1载体后酶切分析结果与预期一致,序列分析结果与Genbank上公布的hUAT序列完全一致。结论成功克隆出hUAT基因,序列分析结果完全正确,为对该基因进一步研究奠定了基础。

摘要：目的　观察诱导型一氧化氮合酶反义核酸 (ASODN iNOS)对大鼠脊髓损伤 (SCI)后神经功能恢复的影响。方法　设计并合成ASODN iNOS ,微量注入大鼠蛛网膜下腔后制备成脊髓压迫伤动物模型 ,伤后 6h用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测iNOSmRNA表达变化 ,2 4h后用分光光度法测定组织中一氧化氮 (NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活性 ,4周后用电生理、动物行为学和病理学等指标评价神经功能的恢复情况。对照组为正常组、损伤对照组和无义核酸对照组 (NSODN)。结果　SCI后组织中存在iNOS的表达 ,应用ASODN iNOS可以抑制相应酶的表达 ,并可以降低组织中的NO含量和NOS活性 ,改善神经传导功能 ,与损伤对照相比差异有显著性 ,NSODN没有上述作用。结论　脊髓损伤后应用iNOS反义核酸可以使伤后神经功能得到改善。

摘要：目的　观察从胚胎期到老年期大鼠海马和额叶皮层中褪黑素 (Melatonin ,MT)合成限速酶N 乙酰基转移酶 (ArylalkylamineN acetyltransferase ,AANAT)表达的变化特点。方法　①引物设计 ,②RT PCR方法 ,③酶联法。结果　①大鼠额叶皮层和海马中AANAT在胚胎和幼年期表达较高 ,成年后有一定下降。②在老年大鼠 ,海马中AANATmRNA明显降低甚至消失。③大鼠额叶皮层和海马中褪黑素水平在胚胎和幼年期较高 ,老年大鼠海马中褪黑素水平降至最低。结论　胚胎期额叶皮层AANAT有较高的表达 ,生后 3周～18月组降低 ,而老年大鼠海马中AANAT表达的降低和消失 ,可能是老化时中枢神经系统褪黑素水平下降的原因之一。

摘要：目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)外周血单个核细胞(PBMCs)的c-myc mRNA表达在SLE发病中的作用。方法:从33例SLE患者及20例健康对照组外周静脉血中分离PBMCs,提取总RNA作模板,按文献设计合成c-myc引物,以β-actin作内参,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SLE患者及健康对照的PBMCs c-myc mRNA表达水平并进行组间比较,用系统性红斑狼疮疾病活动性指数(SLEDAI)评定每例患者疾病活动性,并对SLE患者PBMCs的c-myc mRNA表达水平与SLEDAI进行相关分析。结果:c-myc及β-actin的RT-PCR扩增产物电泳显示分别为268和163 bp条带。SLE患者PBMCs的c-myc mRNA相对表达量为0.58±0.26,而正常对照的相对表达量为0.07±0.04,两组差别有显著性(t'=11.024,P=0.000)。25例活动期SLE患者的c-myc mRNA相对表达量为0.62±0.25,而8例缓解稳定期SLE患者的c-myc mRNA相对表达量为0.25±0.01,组间差别也有显著性(t'=7.86,P=0.000)。SLE患者PBMCs的c-myc mRNA相对表达量与SLEDAI呈正相关(r=0.865 1,P<0.05)。结论:SLE患者PBMCs的c-myc mRNA表达异常,c-myc mRNA表达水平与SLE疾病活动评分指数呈直线正相关关系。c-myc mRNA表达水平可作为判断SLE疾病活动性的一个指标。

摘要：根据GenBank上发表的鸡新城疫病毒(NDV)基因组中F基因的保守序列,利用Primer 5.0设计一对引物,扩增201bp特异性核酸片段,建立了检测NDV的RT-PCR方法。特异性试验结果表明,针对NDV能扩增出201bp的核酸片段,而对传染性支气管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)均无特异性条带出现。敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为10pg的模板。利用该方法对10株从青海、内蒙、吉林及河北分离的疑似鸡NDV毒株进行检测,结果均为阳性。上述结果表明,本试验建立的RT-PCR方法特异性强、稳定性好。该方法的建立为NDV的检测及流行病学调查提供了可靠的手段。

摘要：目的建立登革病毒(dengue virus,DENV)、黄热病毒(yellow fever virus,YFV)和基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)核酸的三重实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法。方法通过全球共享数据库下载DENV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)、YFV、CHIKV全基因组序列进行比对分析,针对这3种病毒的相对保守区域分别设计特异性引物和探针,建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,以其他病毒核酸评价方法的特异性,用病毒体外转录RNA评价方法的灵敏度,以病毒高、中、低浓度核酸进行独立重复实验评价方法的重复性。DENV采用登革热患者血清进行验证,YFV、CHIKV采用模拟阳性标本进行验证,采用健康人血清进行阴性验证。结果本方法与其他病毒核酸无交叉反应;对DENV(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)、YFV、CHIKV的最低检出限分别为21.55拷贝/反应、21.25拷贝/反应、21.85拷贝/反应、22.75拷贝/反应、22拷贝/反应、45.65拷贝/反应;各浓度检测Ct值的标准差在0.5以内、变异系数在3%以下;临床阳性标本及模拟阳性标本的检出率为100%,健康人血清的阴性率为100%。结论本研究建立的DENV、YFV和CHIKV的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性。

摘要：为了建立适用于本地区小反刍兽疫病毒的分子生物学快速检测方法,通过分析NCBI数据库中小反刍兽疫病毒N基因序列,根据该基因设计特异性引物,建立针对本地区小反刍兽疫病毒N基因的一步法RT-PCR检测方法,利用该方法对来自疫源地的不同病料样本进行检测,结果显示该方法对病料的可选择性较多,对检测到的阳性条带通过测序分析,发现流行毒株与陕西毒株基因型差异不明显。该检测方法的建立有利于开展小反刍兽疫疫情监测,为有效防控小反刍兽疫提供技术支撑。

摘要：为建立一种快速的新城疫病毒病原检测方法,根据GenBank上登录的NDV F基因序列,利用生物学软件设计合成一对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测NDV的RT-PCR一步法。该方法对传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性喉气管炎病毒的扩增结果均为阴性,检测的敏感性达1ngRNA。临床初步应用显示该检测方法特异性强、敏感性高,可以用于新城疫病毒的临床快速检测。

摘要：旨在建立检测仔猪先天性震颤瘟病毒(APPV)的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。根据GenBank上登录的APPV基因组序列,设计1对引物,以临床上表现典型震颤仔猪的淋巴结为材料,提取RNA,建立了RT-PCR方法,并进行敏感性、重复性和特异性试验,对其扩增产物测序比对分析;利用该方法,对临床病料进行检测。结果显示,从典型震颤仔猪的淋巴结中均扩增到与预期大小有一致的片段,经测序比对,扩增片段序列与APPV相应片段的核苷酸同源性在89%以上;该方法只能扩增出APPV片段,而其他几种常见猪病毒均为阴性,3次重复检测结果基本一致,可检测最低cDNA浓度为184.11ng/μL;对临床病料检测,典型病例的检出率达100%。试验结果表明,建立的RT-PCR方法具有良好的特异性、重复性、敏感性等优点,可用于临床APPV引起的仔猪先天性震颤早期检测、病毒鉴定和分子流行病学调查。

摘要：为建立一种猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速、鉴别诊断方法,根据GenBank中已发表的2种病毒的基因组序列,选择病毒的保守基因各设计了一对特异性检测引物,建立了可以同时鉴别检测猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的双重RT-PCR方法。该方法能从猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒分别扩增出310bp和161bp的特异性片段,对2种病毒混合基因组同时扩增出310bp和161bp的特异性片段;该方法对猪乙型脑炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;该方法最低可以检出0.2pg病毒RNA含量。本研究建立的RTPCR方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,在一个PCR反应体系中就可以准确、快速鉴别检测出猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒,可以用于临床病料的快速检测。