摘要：根据GenBank上猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株的核苷酸序列与古典美洲株的核苷酸序列,设计一对高致病性PRRSV特异性引物,结合快速的RNA抽提试剂和一步法RT-PCR,建立高致病性PRRSV快速RT-PCR检测体系。通过测序和同类试剂盒检测效果比对,证实该体系检测结果准确,体系特异性和灵敏度试验结果显示,该体系对猪瘟病毒、普通PRRSV、禽流感病毒无扩增产物,至少能检测经10万倍稀释后的临床阳性样品。该方法可直接对可疑组织样品进行检测,操作简单、快速、价廉、受环境因素污染概率小,适合临床样品的检测。

摘要：目的　对分离自湖北省不同地区的 30株汉坦病毒 (HV)RNAM片段进行分析 ,以了解湖北省不同地区HV的基因特征及基因组功能。方法　参考HV的基因文库软件设计M片段G1 区型特异性引物 ,用适合于湖北省HV分型的逆转录 -半巢式聚合酶链反应 (RT -heminestedPCR) ,并结合限制性内切酶酶切图谱分析 ,对湖北省不同地区分离的 30株HV进行分型、酶切。结果　分离于湖北省不同地区的 30株HV的分型结果为汉滩型 2 1株、汉城型 9株。 2 1株汉滩型靶基因被HinfⅠ、HaeⅢ消化的图形与标准株 76/ 1 1 8株的图形一致 ,未见与H - 1 1 4株相似的图形 ,其中武汉和洪湖各有l株靶基因HaeⅢ消化只见 1个片段 ;应城、江夏、黄陂和麻城各有 1株靶基因HinfⅠ消化有 3个片段。另外 2 1株汉滩型靶基因除前述的应城毒株外均被HincⅡ消化。 9株汉城型靶基因不能被HaeⅢ消化 ;HinfⅠ消化只见 2个片段 ,而EcoRⅠ消化却见 2个片段 ,与R2 2 株消化的图形不一致。结论　湖北省HFRS流行为混合疫区 ;汉城型M片段基因稳定 ,汉滩型M片段基因不稳定 ,且在湖北地区具有一定的地理聚族性。

摘要：参考汉坦病毒（ＨＶ）的基因文库软件设计Ｍ片段Ｇ－１区型特异性引物，以ＨＶ　７６／１１８、Ｈ－１１４、Ａ－９及Ｒ－｛２２｝株ＲＮＡ为阳性模板，建立ＨＶ的分型方法──逆转录一半巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ），对湖北省不同地区分离的３０株ＨＶ进行分　型。结果显示：（１）建立的ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ分型方法对ＨＶ两型的代表株７６／１１８（ＨＴＮ）、Ａ－９（ＨＴＮ）、Ｈ－１１４（ＨＴＮ）及Ｒ－｛２２｝（ＳＥＯ）ＲＮＡ进行了特异性扩增，其大小与理论值一致；此　法只能检测ＨＶ　ＲＮＡ，不能检测其它病毒ＲＮＡ。（２）分离于湖北省不同地区的３０株ＨＶ的分型结果　为汉滩型２１株、汉城型９株，其中长江以南汉滩型１２株、汉城型２株；长江以北汉滩型９株、　汉城型７株。这表明建立的ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ用于ＨＶ的检测特异性好；分析湖北省不同　地区分离的３０株ＨＶ，显示湖北省ＨＦＲＳ流行为混合疫区；且在湖北地区具有一定的地理聚集性。

摘要：目的 探讨晶状体上皮细胞mRNA定量分析中内部参照标准β-肌动蛋白RT-PC反应条件。方法 从培养的人晶状体上皮细胞中提取mRNA，应用设计的引物RT-PCR检测β-肌动蛋白，电泳分析53.2℃、53.9℃、55℃、56.2℃、57.4℃、58.6℃、59.8℃、60℃、62℃、62.7℃不同的退火温度的扩增产物。结果 各退火温度条件下，β-actin扩增产物均形成长度为302bp片段，且未见非特异性扩增产物条带。退火温度为58.6℃时，β-actin扩增产物的条带最清晰。结论 采用本实验中所设计的引物联合58.6℃退火温度等实验条件所扩增的长度为302bp片段，清晰稳定，是晶状体上皮细胞mRNA定量分析中良好的内部参照标准。

摘要：目的 :探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 -V (β -1,4-GalTV)表达水平的生物学意义 ,构建正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。方法 :设计 β -1,4-GalTV全长引物 ;提取小鼠脑总RNA ,通过RT -PCR方法 ,得到全长 β -1,4-GalTV基因片段 ,将其克隆到 pGEM -T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将 β -1,4-GalTV全长序列克隆到 pcD NA 3 .1表达载体中。设计反义引物 ,以pGEM -β -1,4-GalTV质粒为模板 ,将PCR产物克隆到 pcDNA 3 .1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,得到了正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒。 结论 :正、反义 β -1,4-GalTV表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β -1,4-GalTV表达水平的生物学意义奠定基础。

摘要：小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属,为有囊膜的单股负链RNA病毒。以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据GenBank下载的序列及进行原核表达载体的要求,设计可扩增小反刍兽疫病毒N、M、F及H4个基因的全长读码框(ORF)的引物,进行RT-PCR扩增及扩增片段的T载体克隆、序列分析。结果显示,均有预期大小的片段扩增出。扩增片段经核苷酸序列测定、分析,N、M、F及H基因ORF全长分别为1578、1008、1641、1830nt;4个基因均与疫苗株Nigeria75/1(X74443)有100%的同源性,说明所购试剂盒用的检测抗原应该是用此疫苗株制备,也证明了设计用于原核表达的4对引物扩增片段的正确性。

摘要：根据GenBank鸡β-actin、IFN-γ的基因序列设计引物,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术克隆获得β-actin和IFN-γ基因,采用β-actin为内参的半定量方法检测IFN-γ mRNA在鸡柔嫩艾美耳球虫免疫前后不同时间的表达情况,以探讨IFN-γ的表达动态与柔嫩艾美耳球虫免疫的关系。结果显示,IFN-γ在两次免疫期间的表达量整体上呈现双峰模式,首免后第7天达到一个高峰,二免后第7天达到另一个高峰。

摘要：目的 :探讨脂多糖 (LPS)对人单个核细胞表达白细胞介素 6 (IL 6 )mRNA的影响。方法 :抽取人外周静脉血 ,经EDTA抗凝 ,LPS刺激培养 ,分离单个核细胞并提取总RNA ,将总RNA逆转录为cDNA ,然后用IL 6引物进行热启动PCR扩增。扩增产物热变性后与IL 6检测探针、捕获探针进行夹心杂交 ,最后加入亲和素 辣根过氧化物酶及其底物 ,显色检测杂交信号。IL 6引物及探针用PrimerPremier 5 .0软件设计。结果 :LPS可在转录水平上诱导IL 6mRNA表达 ,其作用强度与LPS剂量呈正相关 ;IL 6mRNA表达丰度有时间效应 ,刺激 4h后 ,IL 6mRNA的表达最高。结论 :LPS能显著增强人单个核细胞表达IL 6mRNA。

摘要：根据GenBank上发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,针对TGEVN基因全序列设计合成了一对引物,以TGEV疫苗株为模板,建立了检测TGEV的RT-PCR方法。应用该方法对TGEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为1168bp的特异性目的片段;测序结果与已报道的TGEV不同毒株序列的同源性为95%～97%;敏感性测定结果为可扩增到18pg的TGEVN基因cDNA。结果表明,建立的RT-PCR方法对TGEV的检测敏感性高、特异性强,可用于TGEV感染的诊断和流行病学调查。

摘要：目的 :为了探讨不同 β1,4半乳糖基转移酶 - I(β1,4 - galactosyltransferase I,β- 1,4 - Gal T- 1)表达水平的生物学意义。方法 :通过分子生物学手段 ,构建正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒。:设计β- 1,4 - Gal T- I全长引物 ;提取小鼠脑总 RNA,通过 RT- PCR方法 ,得到全长 β- 1,4 - Gal T- I基因片段 ,将其克隆到 p GEM- T载体。再通过多克隆酶切位点 ,将β- 1,4 - Gal T- I全长序列克隆到 pc DNA3.1表达载体中。设计反义引物 ,以 p GEM- β- 1,4 - Gal T- I质粒为模板 ,将 PCR产物克隆到 pc DNA3.1表达载体中。通过酶切和测序鉴定构建的质粒。结果 :通过酶切和测序证实 ,实验得到了正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒。结论 :正、反义β- 1,4 - Gal T- I表达质粒的构建 ,为进一步研究不同 β- 1,4 - Gal T-