摘要：通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),设计特异性引物检测猪粪便中猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因片段。结果发现,所检测的8份猪粪便样本中有6份扩增出了目的条带,判定为阳性。

摘要：为建立流行性感冒 (流感 )的快速诊断技术 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测甲3型流感病毒的血凝素 (HA)基因。对甲3型流感病毒的HA基因保守区域设计相关引物并进行PCR扩增 ,比较了它的特异性与灵敏度。结果显示 :该引物只能扩增甲3型流感病毒的特异性片段 ,而对其它型别的流感病毒以及麻疹、风疹、流行性腮腺炎病毒无交叉反应。检测的灵敏度 1次PCR可达 1 0TCID50 / 50ml以下 ,2次PCR反应可达 0 1TCID50 / 50ml以下。采用该方法从临床患者含漱液标本中的检出率 ,比采用狗肾传代细胞 (MDCK)分离病毒的阳性率更高 ,可达到迅速。

摘要：目的：建立一种快速灵敏的方法来检测人B组轮状病毒。方法：参照文献，设计并合成了8对不同引物，利用RT-PCR技术同时扩增相应的基因片段。结果：经过一轮RT—PCR后，均扩增出与引物对应的大小不一的DNA条带。结论：由于常规B组轮状病毒的免疫诊断和聚丙烯酰胺凝胶电泳存在各自的缺点，不能很好的应用于临床和实验室诊断。RT-PCR是一种高灵敏度的检测方法，8对特异性引物同时用于人B组轮状病毒的检测，其灵敏度和特异度相当高，且使用一个配方和一样的扩增程序，这使得在实验室诊断变得更为便捷和简单。

摘要：目的研究建立一种简便快速的鉴别中国麻疹病毒疫苗株与野病毒的方法。方法在血凝素(Hemagglutinin)蛋白基因(H基因)上,寻找能将中国麻疹病毒疫苗株区别于野毒株的限制性内切酶酶切位点,并在包含此酶切位点的基因片段上设计逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)引物,同时对所建立的RT-PCR方法进行敏感性和特异性实验证明,对RT-PCR产物利用限制性片段长度多态性分析方法(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)进行酶切鉴定。结果该一步法RT-PCR方法比较敏感,至少能够检测4.64TCID50(50%组织培养感染剂量,Median Tissue Culture Infective Dose)麻疹病毒。而非麻疹病毒RT-PCR结果均未见阳性条带,说明RT-PCR方法特异。PCR产物经Af1Ⅱ酶切作用后,中国麻疹病毒疫苗株沪191与长47PCR产物均能被切成两个片段,分别为287bp和151bp,2株麻疹野病毒代表株均不能被Af1Ⅱ酶切。结论新建立的RT-PCR-RFLP是一种快速、简便的鉴别中国麻疹病毒疫苗株与野毒株的方法。

摘要：目的建立仙台病毒(SV)RT-PCR检测方法,并对灰仓鼠仙台病毒感染情况进行调查。方法根据NCBI发表的SV(gi:9627219)基因组序列设计引物,建立RT-PCR方法,对方法的特异性和灵敏性进行验证,并用该方法检测60份灰仓鼠的肺脏样本。结果建立的SV RT-PCR方法显示有较好的敏感性和特异性:以仙台病毒为模板扩增产生197 bp的单一目的条带,经测序比对与NCBI数据库中SV相关序列的一致率为98%,而以猴副流感病毒(SV5)、犬瘟热病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型及腮腺炎病毒为对照无任何条带产生;能检出的SVcDNA最低浓度是96.8 ng/mL;用该方法检测60份灰仓鼠,SV的感染率为3.33%(2/60)。结论建立的SV RT-PCR方法可用于实验类啮齿动物动物SV的常规检测,自然条件下灰仓鼠感染SV的问题不容忽视。

摘要：目的　研究日本血吸虫重组疫苗 ,表达和制备血吸 32ku抗原重组疫苗。方法　根据Merckelbach等报道的日本血吸虫中成虫 32ku抗原完整编码序列设计引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,采用逆转录 -聚合酶链反应技术 ,扩增其 32ku抗原完整编码区cDNA。将cDNA重组于pGEM Teasy载体上 ,转化大肠杆菌。结果　重组质粒经测序进行鉴定 ,结果与Merckelbach等报道的 32ku抗原编码区cDNA进行比较 ,二者序列一致。结论　 32ku抗原在不同的地区异株间的 32ku蛋白进化上存在高度保守性 ,因此 32ku抗原可以作为重组疫苗的候选抗原。

摘要：目的建立仙台病毒的RT-PCR方法并应用于常规检测。方法根据仙台病毒(gi:9627219)F蛋白的基因序列,设计Ff和Fr引物,以仙台病毒总RNA逆转录的cDNA为模板扩增出约609 bp预期条带;将建立的RT-PCR方法应用于人工感染小鼠和送检细胞样品检测。结果八份感染小鼠样品中全部扩增出约609 bp目的条带,16份肿瘤细胞样品有12份扩增出609 bp目的条带。结论建立的仙台病毒RT-PCR方法是一种灵敏、快速、特异的方法,能够用于常规检测。

摘要：目的建立登革病毒(DENV)通用型实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法,检测病原微生物实验室环境中DENV的污染状况,识别实验室内易发生污染的重点部位。方法根据DENV各血清型基因组保守序列,自行设计4个DENV血清型通用引物及探针,建立DENV通用型RT-qPCR检测方法并确定检出限和正确率,用病毒采样拭子对实验操作后的物表、常用仪器、实验室环境及个人防护用品表面进行采样,用所建立方法进行检测。结果该研究所建立的DENV通用型RT-qPCR检测方法对不同血清型的敏感性分别为:DENV-1:38.9拷贝/反应、DENV-2:45.75拷贝/反应、DENV-3:31.75拷贝/反应、DENV-4:24.5拷贝/反应;用上海某商用试剂盒品牌以临床标本进行特异性及重复性对照,两者结果一致,特异性及重复性良好;以该法评估实验室污染风险,发现实验后实验人员个人防护装备、核酸提取实验中相关仪器设备表面污染风险较高。结论该研究所建立DENV通用型RT-qPCR检测方法,准确度高,灵敏性较好,实验室污染风险初步评估结果,提示应重点关注核酸提取过程中的风险控制,需规范佩戴个人防护装备。

摘要：目的探讨SOX5、SOX6基因在豚鼠耳蜗中的表达及该基因对耳蜗发育的影响与作用。方法活体解剖取出豚鼠耳蜗、肝脏、脑、肾脏和心脏等组织,应用Primer 5.0软件设计SOX5、SOX6引物。使用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测SOX5、SOX6基因的表达情况。结果SOX5基因在不同组织中均有表达,耳蜗中的表达相对较弱。SOX5和SOX6基因均在耳蜗组织表达。结论SOX5、SOX6基因的表达具有一定的组织特异性,两者均在耳蜗中的表达提示SOX5、SOX6基因对耳蜗的骨性组织发育可能存在一定作用。

摘要：根据PRRSV（LV株）ORF7基因设计一对引物，建立了欧洲型PRRSV的RT-PCR检测方法。通过对50份组织病料检测及其ORF7基因序列分析，结果表明，有4份组织病料扩增出欧洲型PRRSV576bp特异性片段，阳性率为8％，其ORF7基因序列和氨基酸推导序列与欧洲型PRRSV弱毒疫苗株（AMER-VAC-PRRS）的同源性分别在99．0％～99．7％和98．5％～100％之间，而与标准毒株（LV）的同源性分别在95．9％～96．6％和96．99，6～97．7%之间。表明该PT-PCR体系适合组织病料中欧洲型PRRSV的直接检测，同时也证实了欧洲型PRRSV在我国的存在，并且与疫苗株之间具有较高的同源性。