摘要：用苹果的叶片作为材料,研究比较了两种提取苹果总RNA方法的效果,确定了较好的提取方法。根据苹果茎沟病毒外壳蛋白基因设计引物,通过RT-PCR扩增在苹果叶片总RNA样品中获得了524 bp的特异片断,通过对该片段的序列分析与苹果茎沟病毒外壳蛋白基因源序列比较,其同源性高达93%。通过多次重复实验验证,该方法能很好地检测苹果茎沟病毒。

摘要：目的建立小鼠脑脊髓炎病毒RT-PCR方法并对方法进行初步应用。方法根据NCBI发表的TMEV GD VII株(GI:62039)基因组序列设计特异引物,建立RT-PCR方法,验证方法的敏感性和特异性;脑腔接种方式感染9只BALB/c小鼠,感染后第6天采集动物的脑、心、肝、脾、肺、肾、盲肠内容物和血清等样本,用建立的方法进行检测;同时检测100份小鼠盲肠内容物样本,对方法进行初步应用。结果以GD VII RNA为模板,建立的RT-PCR方法能够扩增出约371bp的单一目的条带,敏感性验证显示能够检测到的最低GD VII c DNA量为0.69pg/μL;以脑心肌炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、日本乙型脑炎病毒、小鼠诺如病毒及正常小鼠脑组织为对照进行方法特异性验证,均未出现目的条带。脑腔接种感染小鼠,所有小鼠在接种第3天均产生不同程度的精神萎靡后肢麻痹等症状,其中2只小鼠于第5天死亡;采集心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠内容物及血清等样本进行检测,所有小鼠的脑组织均检测到GD VII RNA,而其他组织均未检测到;对100份小鼠盲肠内容物进行检测,结果均为阴性。结论建立的TMEV GDVII株RT-PCR方法能够高效的检测小鼠组织中的病毒感染,可作为实验动物国家标准的有力补充。

摘要：根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。从感染马铃薯卷叶病毒(PLRV)的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA合成并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约627bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。从而建立了快速灵敏的PLRV检测方法,为PLRV的防治及检测提供了有效手段。

摘要：根据黄瓜花叶病毒(CMV)的复制酶基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,CMV质粒作为RT-PCR反应的阳性对照,进行cDNA合成和PCR扩增。对2002-2003年采集的98份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果从感病组织中扩增出与预期的767bp大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物。结果表明98份材料中96.94%检测到CMV。

摘要：目的:探讨利用RNAi沉默cdc2基因逆转人卵巢上皮性癌细胞顺铂耐药的可行性,为卵巢癌顺铂耐药逆转提供一个可选择的靶点。方法:针对cdc2基因的DNA设计具有特异性的SiRNA,经脂质体转染卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测转染组cdc2基因表达是否抑制;用MTT法测定转染前后A2780/DDP细胞对顺铂敏感性的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:(1)转染cdc2-SiRNA在RNA及蛋白水平均有效抑制A2780/DDP细胞中cdc2的表达,抑制率分别为78.2%、76.8%;(2)顺铂化疗IC50,A2780/DDP-S(0.66±0.02)较A2780/DDP(5.02±0.05)显著下降(P<0.01);(3)5 mg/L顺铂作用后,A2780/DDP-S与A2780/DDP比较,各时间点细胞生长抑制率明显增加(P<0.05),细胞凋亡率明显增多(P<0.05)。结论:在A2780/DDP细胞中,SiRNA能有效抑制cdc2基因的表达,并能部分恢复其对顺铂化疗的敏感性。

摘要：目的:研究红芪Hedysari Radix次生代谢产物与基因表达的相关性,克隆红芪的肌动蛋白基因(actin)并进行序列分析和定量研究。方法:通过查找GenBank中的其他豆科植物的编码序列(CDS)设计简并引物,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术克隆红芪actin基因的核心片段,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析该基因在不同部位中的稳定性表达。结果:克隆出了长度946 bp的红芪actin基因,其中编码蛋白框855 bp,编码284个氨基酸,经Blast比对序列,红芪的actin基因与甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、花苜蓿Medicago ruthenica(L.)Trautv.、红车轴草Trifolium pratense L.的核苷酸序列同源性分别为95.44%、94.42%、94.20%,氨基酸序列的相似性也高达97%以上,红芪actin基因在根、茎、叶不同部位中的表达量基本稳定。结论:首次在国内成功克隆出了红芪的actin基因,并且证实了该基因可作为红芪其他优良基因表达调控的内参基因,为红芪质量研究提供参考。

摘要：文章以冷链食品中的诺如病毒为研究对象,建立冷链食品中诺如病毒的高效提取方法。该方法设计特异性引物探针,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检验冷链食品中诺如病毒,文章应用所构建的方法开展了冷链食品中诺如病毒污染状况的抽样调查。结果表明,应用RT-PCR成功扩增了诺如病毒特征性核酸,在后续使用该方法进行的冷链食品中病毒的抽样检测调查中发现诺如病毒总体检出率为7.0%(27/383),病毒分型发现检出的27株诺如病毒中有25份为诺如病毒GII型,2份为诺如病毒GI型。