摘要：目的:探讨无溶剂体系酶法合成己酸乙酯的最佳工艺条件。方法:在单因素试验的基础上,以脂肪酶添加量、底物(己酸/乙醇)物质的量比、反应时间为影响因素,应用二次回归中心组合试验法进行三因素五水平试验,以己酸乙酯产率为评价指标,进行响应面分析。结果:无溶剂体系酶法合成己酸乙酯的最佳工艺条件为脂肪酶添加量0.5%、酸醇物质的量比1:1.3、反应时间12.2h、反应温度30℃,转速150r/min。在此条件下,己酸乙酯产率实际值为81.6%,与预测值相近。结论:采用中心组合试验设计——响应面法对无溶剂体系酶法合成己酸乙酯工艺条件进行优化合理可行。

摘要：维生素A具有维持正常视力、改善皮肤、抗衰老等多种生理活性,但极不稳定,很容易在光、热、氧的作用下发生分解。选择二十二碳六烯酸乙酯(Ethyl docosahexaenoate,EDHE)与维生素A醋酸酯(Vitamin A acetate,VAAE)作为底物,在脂肪酶Novozyme435的催化下发生转酯反应,从而合成一种新型的维生素A-DHA酯(Vitamin A docosahexaenoate,VADHE)。利用液相及质谱对目的产物进行鉴定,在此基础上,利用硅胶柱层析(C18填料)对反应体系中的VADHE进行纯化。经液相色谱检测,VADHE的纯度达到90%以上。为了进一步提高目的化合物得率,分别在有机溶剂体系和无溶剂体系中对转酯反应进行了优化。在有机溶剂体系中,反应6 h转化率可达40.61%。在无溶剂体系中,用100 mg脂肪酶催化反应4 h,转化率可达56.39%。该研究首次设计并合成了新型脂质VADHE,实现了该物质的纯化制备,为后期的活性检测实验奠定了基础。

摘要：利用皇冠梨多酚氧化酶催化表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)合成茶黄素双没食子酸酯(theaflavin-3,3’-O-digallate,TFDG),首先单因素试验确定了酶促反应的底物EGCG/ECG物质的量比3∶1、pH 4.0、反应温度35℃,在此基础上采用Box-Behnken试验设计法进行3因素3水平响应面优化试验,确定了TFDG最优酶促反应条件为底物EGCG/ECG物质的量比3.1∶1、pH 4.1、反应温度37℃;在最优反应条件下进行TFDG的合成,并利用AB-8层析柱结合高速逆流色谱技术分离纯化反应液,结果表明TFDG的得率和纯度分别达到85.14%和97%。

摘要：基于利用脂肪酶对天然油脂进行改性生成结构脂质(Structured Lipids,SLs)可赋予油脂额外的健康属性,有效提高产品附加值,对近期报道的各类SLs酶法合成及通过酶工程技术(结构设计和固定化)提升合成效果的研究进行综述,认为,使用sn-1,3位置专一性脂肪酶可精准合成SLs,利用分段变温反应、超临界流体反应、真空反应、超声波辅助等途径可有效抑制酰基转移,从而提高产物得率;脂肪酶的结构设计可提高其催化效率、稳定性和底物专一性,使SLs的合成效率和得率有所提升;固定化脂肪酶技术也能提高脂肪酶的反应活性和稳定性,增强其重复利用性,降低SLs酶法合成的成本。未来应针对不同SLs的结构特点,通过结构设计获得高活性、高稳定性和专一性的酶分子,结合新型固定化技术创制高性能酶制剂,以期为高效、精准的SLs酶法合成工艺的创新发展提供参考。

摘要：应用发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶法合成α-半乳糖基-β-环糊精,研究其合成工艺。通过Box-Behnken设计等方法,得出工艺条件为α-半乳糖苷酶用量73 nkat,时间28 h,pH 6.3,温度40℃,振荡速度75 r/min,反应体系包括2 mL醋酸缓冲液(50 mmol/L),β-环糊精0.4 mol/L,蜜二糖0.8 mol/L。在此条件下,α-半乳糖基-β-环糊精绝对产率为28.4%,比优化前提高了41.3%。

摘要：磷酸西格列汀的酶法合成工艺是美国Merck公司与Codexis公司合作开发的一条绿色高效合成途径。主要在酶法合成工艺基础上进行改进,具体通过可表达转氨酶的重组大肠杆菌BL21(ED3)培养获得菌泥,经破碎后投入催化反应,底物转化率达95.83%。调酸性分离使有机杂质含量低于1.0%,调碱性分离西格列汀,与磷酸成盐后精制得到磷酸西格列汀一水合物,收率84.6%,ee>99.99%,综合回收并使用二甲基亚砜与异丙醇。改进后相比文献方法提高约3%的转化率,明显降低了生产成本,适用于大量生产,为同类型酶催化工艺设计提供了一个新的思路。

摘要：主要探讨了利用牛乳中的乳糖直接合成原生低聚半乳糖的可行性,同时低聚半乳糖(GOS)的合成量还能支持到膳食纤维(以低聚半乳糖计≥1.5%)宣称的工艺和配方。进一步,在探索酶法合成低聚半乳糖的过程中,主要通过单因素试验设计和响应面试验设计讨论了β-半乳糖苷酶添加量、牛乳中初始乳糖含量和反应时间对低聚半乳糖的合成量的影响。结果表明,在β-半乳糖苷酶添加量0.09%±0.01%、牛乳中初始乳糖含量6.0%±0.2%、反应时间4.5±0.5 h的条件下, GOS合成量达到2.07%±0.15%。试验结果可有效运用于新型乳品开发。

摘要：低聚半乳糖(Galactooligosaccharide,GOS)是近来年备受人们关注的功能性低聚糖之一,是β-半乳糖苷酶与乳糖发生转糖苷反应的主要产物。目前生产GOS的效率不高,是β-半乳糖苷酶与乳糖发生转糖苷反应的最终产物,自然界中含有该酶的菌株很多,但也由于来源广泛导致了相关的酶学特性各不相同;若想要满足人们的需求,需要采用酶工程等手段对酶进行分子改造,将该酶的某一特性进行提高,以得到目的菌株,该文中大致讲述了3种分子改造的方向,均能达到提升转苷率的目的;无论是利用哪种手段进行的分子改造,都需要了解目的酶分子活性中心的构造,有针对性地、通过结合理性与半理性设计而非盲目性的对酶进行分子改造。GOS的应用范围很广,在食品、医药及畜产领域中扮演着重要角色,有着不可忽视的地位,并且有很大的开发与挖掘空间。

摘要：考察了脂肪酶催化合成葡萄糖硬脂酸酯(GSAE)的非水相转化条件及其效果。从7种商品化脂肪酶中筛选适于非水相酶法制备GSAE的酶,分别探讨脂肪酶种类及用量、助溶剂种类及用量、底物摩尔比、水分、分子筛用量、摇床速率、反应温度、反应时间等因素对GSAE合成反应产率的影响。结果表明,丙酮是适宜的助溶剂,在丙酮反应体系中固定化脂肪酶Novozyme 435是适宜GSAE酯化反应的最好催化剂,水分明显降低脂肪酶活性和酯化反应产率,底物、助溶剂和反应过程的除水对于该酯化反应是十分必要的。正交实验设计优化的酯化反应条件为:Novozyme 435酶用量0.08 g、分子筛用量0.8 g、n(硬脂酸)∶n(葡萄糖)=3∶1、反应温度45℃、丙酮用量10 mL、摇床转速150 r/min、反应时间5 h。该条件下最大反应速率Vm=0.749μmol/(min.g)和Km=0.020 3mmol/L,GSAE产率达64.11%。

摘要：以假单胞菌(Pseudomonas sp.)TS1138为供试菌株,运用响应面法对酶法合成L-半胱氨酸所用酶的生产条件进行优化。首先利用Plackett-Burman设计从影响TS1138菌株产酶的众多因素中筛选出影响较大的四个因素:DL-ATC 、玉米浆、转速和装液量。在此基础上再利用二次响应面分析法进行优化,得出了最佳的实验条件。最佳产酶培养基配方为(g/L):葡萄糖 30、DL-ATC·3H2O 3.0、玉米浆 3.1、尿素 3、MnSO4·H2O 1、K2HPO4·3H2O 3、FeSO4·7H2O 0.01、MgSO4·7H2O 0.5、NaCl 3;最佳产酶培养条件为:摇床转速 190r/min、500ml摇瓶装液量 42ml、接种量 10%、产酶培养基初始 pH7.5、培养温度 29℃。在优化条件下进行产酶培养,细胞酶活力达 2255U/ml,比未优化前的 2053U/ml 提高了 9.8%。