摘要：酸性磷酸酶(ACP)是前列腺癌、戈谢病、肾病等疾病的重要生物标记物,因此开发灵敏、高选择性的ACP检测方法具有重要的意义。目前,已发展出多种ACP检测方法,包括免疫法、光谱法、色谱法、电化学法等;其中,荧光检测方法因灵敏度高、选择性好、快速、准确等优点备受关注。通过席夫碱反应,利用2-氨基苯硼酸(2-APBA)二聚体和磷酸吡哆醛(PLP)合成了一种新型的ACP“Turn-on”型荧光底物APBA-PLP(ABPL)。反应后,PLP的—CHO基团和2-APBA二聚体的—NH 2基团的特征峰消失,同时ABPL的C N基团的特征峰出现;此外,^(1)H和^(1)H—^(1)H COSY核磁波谱的信号峰与ABPL的结构相对应。以上表征结果证实了ABPL的成功合成。进一步,将ABPL应用于ACP检测。我们发现向ABPL水溶液中加入ACP后,体系的荧光强度增强,机理为:2-APBA二聚体为聚集诱导发光增强(AIEE)分子,其AIEE特性源于2-APBA二聚体的高度有序堆积;当2-APBA二聚体分子上引入PLP后(即合成ABPL),分子的高度有序堆积结构被破坏;加入ACP后,PLP水解为吡哆醛并从2-APBA二聚体分子上脱落,2-APBA二聚体分子又可重新进行高度有序堆积,表现为体系的荧光增强。在0~5 U·L^(-1)活性范围内,376.5 nm处的相对荧光强度与ACP活性之间呈现出良好的线性关系(R 2=0.99)。此外,当ACP、果胶酶、木瓜蛋白酶和脂肪酶的活性分别为4、50000、80000和10000 U·L^(-1)时,四种酶对应的相对荧光强度分别为0.2、-0.006、0.03和0.05。该结果表明ABPL对ACP具有高选择性。ABPL分子易合成,对ACP具有线性和高选择性响应,为设计合成可用于ACP检测的新型高效荧光底物提供了新策略。

摘要：导管经历了完整的细胞程序性死亡过程(programmed cell death,PCD),形成运送水分的管状通道;而筛分子分化则经历了细胞程序性半死亡过程,形成运输有机养分的通道。为了进一步弄清二者在小麦(Triticumaestivum L.)颖果发育过程中超微结构上的变化,本研究利用生物电镜和酶的超微细胞化学定位技术比较了筛分子和导管分化过程中超微结构的变化,以及酸性磷酸酶(ACPase,acid phosphatase)活性的分布动态。结果表明:筛分子呈对称性半圆形分布于导管的两侧,且筛分子内细胞核的降解晚于导管,筛分子细胞质主要通过液泡膜内陷包裹细胞器,形成自噬体进行降解,最终仍保留了部分细胞器碎片,筛分子仍然存活;而在导管分化中,主要是液泡破裂后,胞内细胞质被完全降解,导管最终死亡,形成管状分子。ACPase作为液泡的标志性酶,在导管液泡膜破裂后,多定位于线粒体等发生降解的细胞器上。而在筛分子中,不仅在发生降解的线粒体等细胞器上检测到了ACPase活性,在成熟筛分子胞间连丝上也检测到了ACPase活性,表明ACPase不仅参与了小麦颖果筛分子和导管发育中PCD进程,可能还与细胞间物质运输有关。

摘要：为了探索青稞酸性磷酸酶基因 HvnACP2的基因和蛋白结构特点,为青稞磷吸收利用机制研究提供基础。以青稞‘肚里黄’叶片为材料,根据植物基因组数据库Gramene中的大麦 HvACP2基因和启动子区域序列设计引物,通过PCR获得青稞 HvnACP2基因和启动子区域序列。采用生物信息学软件对 HvnACP2基因启动子区域元件以及蛋白理化性质、跨膜结构、磷酸化位点、信号肽、二级、三级结构进行分析。结果表明: HvnACP2有2个外显子和1个内含子,启动子区域有与分生组织、光响应、厌氧、茉莉酸和脱落酸相关的顺式作用元件。HvnACP2蛋白由454个氨基酸组成,分子质量为51 285.15 u,总原子数为7 058,亲水系数为-0.451,理论等电点为6.17,不稳定指数34.54,脂溶性指数为67.05。具有12个磷酸化位点和信号肽,不具有跨膜结构。 HvnACP2中α螺旋、延长链、β转角、无规则卷曲所占比例分别为18.72%、53.96%、23.57%、3.74%。 HvnACP2和其他物种的同源蛋白都有紫色酸性磷酸酶N末端结构域和金属酸性磷酸酶结构域,将 HvnACP2与其他植物的氨基酸序列进行对比并构建进化树,发现青稞 HvnACP2与小麦TaACP2亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示 HvnACP2定位在细胞膜上。

摘要：背景:脑细胞生长肽(cerebrocellulargrowthpeptide,CCGP)对庆大霉素引起的耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶(acidphosphatase,ACP)的变化是否有影响?对受损耳蜗组织是否有促进修复的作用?目的:观察CCGP对庆大霉素引起的耳中毒豚鼠ACP的影响。设计:随机对照研究。地点和材料:实验地点:泰山医学院听觉研究室。选用健康杂色豚鼠40只,对照组10只,肌肉注射生理盐水1mL/(kg·d);庆大霉素组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d);CCGP组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素同庆大霉素组,并肌肉注射CCGP1mg/(kg·d)。各组用药25d。方法:用脑干听觉诱发电位(brainstemauditoryevokedpotential,BAEP)和组织化学方法检测动物听阈的变化和耳蜗毛细胞ACP显色变化。主要观察指标:各组动物BAEP反应阈值和ACP显色变化。结果:用药前BAEP反应阈值犤dB(peSLP)犦:生理盐水组32.62±2.33,庆大霉素组31.87±2.63,CCGP组32.56±2.39。用药后BAEP反应阈值均有不同程度的升高,用药后25dBAEP反应阈值:生理盐水组32.81±2.48,庆大霉素组56.73±17.21,CCGP组42.87±9.95,庆大霉素组、CCGP组与生理盐水组比较,差异均有显著性意义(t=3.113,4.335,P均<0.01),CCGP组与庆大霉素组比较,差异有显著性意义(t=2.700,P<0.05)。

摘要：通过测定不同浓度Hg2+和Cu2+与酸性磷酸酶(APase)及量子点标记酸性磷酸酶(QD-APase)体系在不同温度下发生相互作用后的荧光变化,计算热力学常数,检测Hg2+和Cu2+对APase及QD-APase活性等手段,研究了Hg2+和Cu2+与APase及QD-APase之间的相互作用效应.结果表明:Hg2+、Cu2+均能对APase及QD-APase的构象与活性产生影响,但首先是通过对APase和QD-APase的结构造成影响,进而才会对其活性产生抑制效应,且Hg2+对APase和QD-APase的构象及活性的影响与约10倍剂量的Cu2+相当.Hg2+、Cu2+与QDAPase体系发生结合反应的能力强于与APase的结合,前者的结合反应是由焓熵共同驱动,而后者的结合主要是由熵驱动.根据研究结果可以设计出荧光性能优异且具有生物活性的酶探针,在生物标记及荧光分析法检测重金属离子对酶的作用效应方面具有良好的应用前景.

摘要：开设综合性、设计性实验,提高学生的动手能力和创新意识,已成为当前实验教学改革的总体趋势。就中国海洋大学酶工程实验开设的酸性磷酸酶综合性和设计性实验,从选题依据、实验设计安排、实验内容关键点、实验设计心得等5个方面进行介绍。本实验取材经济方便,操作简单易行,适合于东部沿海相关大专院校本科酶学实验教学。

摘要：从高温塘泥(温度在40～85℃之间)中分离到一组嗜热微生物,提取环境基因组DNA,通过随机测序,发现许多基因与Thermus属的DNA相似性很高,根据Genbank上Thermus thermophilusHB8基因组序列中推定的酸性磷酸酶基因(TTHA1616),设计引物,PCR扩增得到一段798bp的DNA序列,测序结果与Thermus thermophilusHB8基因组中酸性磷酸酶基因相似性达98%,含有完整的酸性磷酸酶保守区,于是将该基因在大肠杆菌中表达,得到一条约33KD的特异蛋白条带,酶活检测证实该推定蛋白具有酸性磷酸酶活力。

摘要：缺磷是限制目前农林业产量的一个重要因子,传统的农林业生产主要通过施肥和土壤改良来满足植物对 磷的需求,近年来人们开始发掘磷高效利用植物来替代传统方法提高磷的利用效率。杉木(Cunninghamia lanceola- ta)是我国亚热带地区最重要的造林树种之一,生长快、材质好、产量高,在中国人工林经营中占有重要地位。为揭 示磷素胁迫条件下杉木无性系酸性磷酸酶的变化规律和筛选磷高效利用杉木无性系,通过土培试验,设计4种磷 素处理水平(正常供磷***·kg-1、轻度磷胁迫8 mg·kg-1、中度磷胁迫4 mg·kg-1、重度磷胁迫0 mg·kg-1),进行磷 素胁迫条件下不同杉木无性系酸性磷酸酶(APA)活性的比较研究。结果表明:缺磷条件下1年生杉木叶片和根际 的APA活性明显高于正常供磷处理。随缺磷时间的延长、不同杉木无性系酸性磷酸酶的变化规律不同,其中8号、 24号、37号无性系叶片和根际的APA活性明显高于正常供磷处理;5号、9号无性系根际APA活性虽然增幅较大, 但其叶片酶活性变化较小;3号、23号、34号无性系整体而言对磷胁迫不敏感,缺磷条件不对其叶片APA及根系 APA活性造成显著影响。在磷胁迫条件下,杉木无性系可通过叶片及根际酸性磷酸酶活性的增强来适应环境磷缺 乏,但不同杉木无性系对磷缺乏的适应性存在明显差异。

摘要：采用蚯蚓毒性试验和均匀组合设计（Cd：0-15 mg·kg^-1,Cu：0-175 mg·kg^-1,Pb：0-600 mg·kg^-1）方法,以赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）为试验蚓种,研究了土壤中重金属Cd、Cu、Pb复合污染对蚯蚓体内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽硫转移酶（GST）和酸性磷酸酶（AP）活性的影响,为重金属污染土壤的生物学诊断和风险评价提供科学依据.结果表明,Cd、Cu、Pb复合胁迫对蚯蚓SOD、GST和AP活性产生显著的诱导效应,酶活性与重金属含量及其持续时间密切相关：蚯蚓SOD活性在暴露前8 d因受重金属胁迫比第0 d增加了7.4%-240.5%,之后因胁迫过强被抑制,比第8 d下降了19.4%-69.7%.GST活性则在暴露前16 d持续增加了104.3%-217.3%,之后受抑制比第16 d下降了1.2%-40.3%.AP活性随时间呈＂促进-抑制-促进-抑制＂变化,在第8 d受胁迫比第0 d下降了9.2%-37.8%,至第16 d产生适应比第8 d增加了37.2%-117.2%,但最终因胁迫过强比第16 d下降了24.3%-34.0%.回归分析表明,Pb和Cd-Cu-Pb对SOD活性的产生影响最为显著,Cd和Cu则显著影响了GST和AP活性.

摘要：通过光学显微镜观察发现:鹤顶兰[Phaius tankervilliae(Aiton)Bl.]授粉后10d胎座出现指状突起,20d形成胚珠原基,24d大孢子母细胞发生,30d功能大孢子形成,41d发育为成熟的八核胚囊,而后完成双受精发育成早期球形胚。用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法研究鹤顶兰从指状突起出现到早期球形胚形成的全过程中酯酶(Est)、酸性磷酸酶(Acp)的变化发现:这一过程中Est表达有7个同工酶位点,Acp有5个同工酶位点,两者均在八核胚囊时期变化最显著。Est-7和Acp-4在整个发育过程中都有表达;在八核胚囊时期特异表达的位点有Est-4和Acp-3;而Acp-2只在这一时期不表达。Est-1在八核胚囊时期和大孢子母细胞减数分裂中期表达。授粉后Est和Acp的酶位点变化说明与胚珠发育相关的一系列基因表达有时序性,位点Est-4、Acp-2和Acp-3是否直接参与了八核胚囊发育的控制,有待于进一步的研究。