摘要：目的:探讨重组大肠杆菌合成内切几丁质酶培养条件的优化。方法:首先采用部分因素试验设计研究发酵培养基中各组分对产内切几丁质酶比活力的影响,找出主要影响因素,然后采用Box-Behnken设计确定各主要影响因素质量浓度的最佳值。结果:影响重组大肠杆菌合成内切几丁质酶的主要因素为葡萄糖,Na_2HPO_4·12H_2O和KH_2PO_4。最优化的发酵培养基组成(g/L):蛋白胨14,葡萄糖8.8,Na_2HPO_4·12H_2O 16.8,NH_4Cl 1,MgSO_4·7H_2O 0.14,酵母粉6,KH_2PO_4 2。在优化发酵培养基中重组大肠杆菌产酶量是未优化发酵培养基的1.67倍。结论:本研究结果为内切几丁质酶产业化生产提供了良好基础。

摘要：目的:利用响应面法优化重组大肠杆菌发酵生产肝素酶培养基的关键介质成分。方法:通过PlackettBurman设计对影响肝素酶产量的相关因素进行评价和筛选,选出影响其产量的主要关键因子,然后采用响应面分析法确定这些关键因子的最佳水平。结果:筛选出的具有显著效应的因子为蛋白胨、酵母粉和葡萄糖,当3个因素的质量浓度分别为7.4,11.95 g/L和2.74 g/L时,理论预测的肝素酶活力的最大值为181.49 U/L。3次验证试验获得的肝素酶活力的平均值为177.34 U/L,与理论预测值接近,肝素酶的活力比未优化前提高了1.95倍。结论:本研究结果为肝素酶的产业化应用奠定了良好基础。

摘要：利用Clostridiumacetobutylicum的丁酸激酶基因 (buk)和磷酸转丁酰基酶基因 (ptb) ,以及Thiocapsapfennigii的PHA合成酶基因 ,设计了一条能够合成多种聚羟基烷酸的代谢途径 ,用构建的质粒转化大肠杆菌 ,获得了重组大肠杆菌菌株。前期的研究表明 ,在合适的前体物条件下 ,该重组大肠杆菌能够合成包括聚羟基丁酸、聚 (羟基丁酸 戊酸 )等多种生物聚酯 [LiuandSteinb櫣ｃｈｅｌ,*** .Microbiol.6 6 :739 743]。利用该重组大肠杆菌 ,通过生物催化作用合成了 3 巯基丙酸的同型共聚酯 ,同时利用该重组大肠杆菌还获得了含 3 巯基丙酸单体的多种异型共聚物。实验首先研究了 3 巯基丙酸对大肠杆菌生长的影响 ,在此基础上优化了培养过程中添加 3 巯基丙酸的时机和浓度 ,结果表明 ,在实验的条件下 ,细胞合成聚 (3 巯基丙酸 )可达 6 7% (占细胞干重 ) ,合成聚 (3 羟基丁酸— 3 巯基丙酸 ) (分子中 3 巯基丙酸 :3 羟基丁酸 =3:1)可达 2 4 3%。实验进一步研究了同时或分别表达以上 3个基因的重组大肠杆菌合成聚合物的能力 ,结果表明只有当 3个基因同时表达时才能合成聚合物 ,说明 3个基因对合成过程是必须的 ,从而表明了合成途径是按照设计的路线进行的。还通过GC MS、GPC、IR等手段对合成的化合物进行了定性?

摘要：利用Plackett-Burman实验、最陡爬坡实验和中心组合设计对产香叶醇重组大肠杆菌的发酵培养基进行了优化。首先运用Plackett-Burman设计对7种培养基组分进行了筛选;然后运用最陡爬坡法使关键因素的浓度接近最佳响应区域;最后通过中心组合设计确定了关键因素的最佳浓度及回归模型。结果表明柠檬酸铁铵、硫酸镁和微量元素混合液为影响香叶醇产量的关键因素,其最佳浓度分别为0.13 g/L,2.12 g/L和16.7 m L/L,在此条件下香叶醇的产量可达223.24 mg/L,是优化前香叶醇产量(68.5 mg/L)的3.26倍。

摘要：以谷氨酰胺转氨酶生产菌株重组大肠杆菌BL21(DE3)/mtg为研究对象,对工程菌的发酵产酶条件进行了优化。首先通过单因素实验法,对培养基碳、氮源种类及浓度、培养温度、初始p H、装液量、接种量、诱导时机、诱导浓度、诱导温度及诱导时间进行了优化;随后采用Plackett-Burman设计从中筛选出3个关键影响因子:初始p H、培养温度及诱导温度;最后通过Box-Benhnken设计建立上述3个因子对谷氨酰胺转氨酶比酶活的响应面模型。结果表明,最佳发酵条件为:葡萄糖5 g/L,酵母粉28 g/L,蛋白胨14 g/L,培养温度34℃,初始p H7.0,装液量50 m L(250 m L三角瓶),接种量5%,诱导时机4 h,IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导温度25℃,诱导时间14 h。在该条件下,优化后的谷氨酰胺转氨酶比酶活达1.507 U/mg,为未优化前的1.56倍。

摘要：为了提高重组大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)-pET-22-bgl-(kil-Km)的产酶能力,采用单因素试验研究了培养基碳源、氮源及碳氮比(摩尔比)对重组大肠杆菌Rosetta(DE3)-pET-22-bgl-(kil-Km)分泌表达重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶H(A107-M)的影响.在此基础上,采用Box-Behnken设计法和响应面分析法对以上影响因素进行优化,得出最优培养基成分为(g/L):甘油10.01,酪蛋白胨12.03,酵母粉24,NaCl 10,(NH4)2SO44.77,KH2PO42.31,K2HPO412.54.

摘要：研究利用重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-28a-ldh D全细胞生物转化苯丙酮酸(phenylpyruvic acid,PPA)合成D-苯基乳酸(D-phenyllactic acid,D-PLA)的条件。通过Plackett-Burman试验设计,从影响细胞转化的6种因素中筛选得出转化温度、底物浓度和磷酸钠缓冲液p H值对底物PPA摩尔转化率有显著影响;采用Box-Behnken试验设计和响应面优化,对该重组菌全细胞转化合成D-PLA的条件进行了优化。最佳分批转化条件:转化温度为38℃、底物浓度为42 mmol/L、磷酸钠缓冲液p H 7.0、菌体质量浓度20 g/L、葡萄糖质量浓度20 g/L。在该条件下反应0.5 h,底物摩尔转化率为65.32%。根据此最佳转化条件,经4 h的间歇补加底物转化获得D-PLA最终浓度为119 mmol/L(19.75 g/L),生产率为4.94 g/(L·h)。

摘要：探讨响应面法优化重组大肠杆菌发酵生产藻蓝蛋白培养基的关键介质组分,确定其最佳用量。首先通过部分因素试验设计评价影响重组大肠杆菌发酵生产藻蓝蛋白产量的相关因素,筛选出具有显著效应的关键因素,然后采用响应面法确定关键因素的最佳质量浓度。筛选出的3个具有显著效应的关键因素为蛋白胨用量、酵母提取物用量和K_2HPO_4·3H_2O用量,其最佳用量分别为23.8、13.4 g/L和9.4 g/L,在该条件下获得的藻蓝蛋白质量浓度为15.28 mg/L。本研究结果为藻蓝蛋白的产业化生产和应用提供了一定实验支撑。

摘要：为了提高RGD-TRAIL的表达量,对重组大肠杆菌的发酵工艺进行优化。在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken实验设计进行了四因素三水平的响应面分析试验,研究了接种体积分数、pH值、诱导时间、诱导温度对RGD-TRAIL表达的影响。响应面结果表明,RGD-TRAIL表达的最佳条件为:接种体积分数7.88%,pH值7.02,诱导时间10.25 h,诱导温度22℃。在此条件下RGD-TRAIL的表达量达到17.27%,与模型预测表达量(17.31%)接近,较优化前提高了40.06%。

摘要：设计了基于碳氮源平衡的底物流加策略,研究其对重组大肠杆菌(Escherichia coli)生长与表达目的蛋白融合型乳酸片球菌素的影响。在菌体生长的不同时期流加不同碳源与氮源的质量比(mC/mN)的营养源,实现碳氮源的实时平衡流加,有效地避免了乙酸的积累,获得了高密度的菌体(最大菌体密度可达57.6 g/L)和高表达的融合蛋白(产率可达46.3 mg/L)与可溶性蛋白(产率可达15.7 mg/L)。