摘要：几丁质是昆虫外骨骼和围食膜的重要组成部分,鉴于几丁质酶在昆虫生长发育过程中发挥着举足轻重的作用,应用昆虫几丁质酶为探索新的生物防治害虫的方法提供了途径。本文分别根据苜蓿银纹夜蛾Autographa californica核型多角体病毒多角体蛋白基因序列和编码舞毒蛾Lymantria disparⅠ型几丁质酶基因的开放阅读框设计引物,使用聚合酶链反应扩增出以上两个基因,全长分别为783 bp和1 737 bp。构建重组质粒pFastBac-LdCht和pFastBac-AcPH-LdCht,转化大肠杆菌DH10Bac后获得重组穿梭载体,通过脂质体介导转染Sf9细胞产生重组杆状病毒AcMNPV-AcPH--LdCht和AcMNPV-LdCht,分别用于表达蛋白和获得重组病毒。细胞成功表达出有活性的舞毒蛾几丁质酶,并在棉铃虫体内扩增得到重组病毒。研究为深入了解昆虫几丁质酶性质提供依据,并为应用重组病毒奠定基础。

摘要：本文设计并合成了狂犬病病毒PV株基质蛋白(matrixprotein,MP)基因与优化的PV株基质蛋白基因,分别克隆至转移载体pVL1393中构建穿梭质粒,再以穿梭质粒与线性化的杆状病毒BaculoGoldTM进行重组,构建表达MP的重组杆状病毒,然后感染Sf9昆虫细胞进行表达.通过SDS-PAGE电泳分析显示,表达的MP和优化后MP约分别为27kDa和26kDa.间接免疫荧光检测(IFA)显示,表达的MP和优化后MP均可与鼠抗His单克隆抗体及鼠抗RV血清特异性结合,出现明显的特异性绿色荧光.Western blot检测显示,表达的MP和优化后MP均可被鼠抗His单克隆抗体特异性识别.

摘要：为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)主要结构蛋白VP73在哺乳动物细胞中真核表达,本研究根据已发表的ASFV序列,设计合成VP73基因全序列,以巨细胞病毒极早期启动子(CMV-IE)和经水泡性口炎病毒G蛋白(VSV/G)修饰过的pFastBac杆状病毒为载体构建了重组杆状病毒AcNPV-G-VP73。Western blot结果表明,该病毒感染BHK-21哺乳动物细胞后,VP73基因在细胞中获得表达。本研究构建的重组杆状病毒能够介导ASFV VP73蛋白在哺乳动物细胞中表达,为ASF新型疫苗与诊断方法的探索研究奠定了基础。

摘要：为构建Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白昆虫细胞表达载体,并免疫小鼠制备多克隆抗体,研究根据病毒衣壳蛋白基因序列设计引物,采用RT-PCR扩增衣壳蛋白基因全长,亚克隆至杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTA,经过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒质粒rBacmid-cap,将鉴定正确的阳性质粒转染至昆虫Sf9细胞获得重组杆状病毒。Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明,Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白在昆虫Sf9细胞中成功表达,利用表达衣壳蛋白的昆虫细胞免疫小鼠制备的多克隆抗体血清与天然病毒也具有良好的反应性。试验结果为进一步研究鸡星状病毒衣壳蛋白的生物学功能以及病毒检测方法的建立提供了生物材料。

摘要：根据Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-I)基因组序列设计并合成一对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增DHV-I(A66株)VP1基因。用限制性内切酶EcoRⅠ/HindⅢ消化VP1基因和转移载体pFastbacⅠ,在T4DNA连接酶作用下将二者连接构建转移质粒pFastbac-VP1。经PCR、双酶切及测序鉴定后将其转化至含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10bac中,蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-VP1,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf 9,获得重组杆状病毒rvBac-VP1。SDS-PAGE分析结果表明,VP1基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物分子量约为2.7×104。Western-blot检测结果表明,表达产物能与抗DHV-I阳性血清发生反应,具有良好的反应原性。

摘要：前期研究发现,相对于其它组织器官,有一种低分子量热激蛋白在家蚕肾型卵中高量表达,并命名为低分子量热激蛋白HSP20.8。为了进一步阐明家蚕低分子量热激蛋白HSP20.8的基因结构、表达特性及其在家蚕染色体上的分布,根据HSP20.8基因cDNA序列设计特异引物,进行了克隆、表达及荧光原位杂交研究。结果表明,该基因含有1个561碱基对的开放阅读框(open reading frame,ORF),与cDNA序列比较分析发现该基因无内含子序列。重组蛋白的分子量在20 kD左右。热激蛋白基因HSP20.8在家蚕基因组中为单拷贝基因,其位点在染色体近中部区域。

摘要：为开发猪O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒(VLPs)基因工程亚单位疫苗,试验参考GenBank中登录的FMDV毒株基因序列(登录号:JN998085),设计针对VP 1、VP 2、VP 3和VP 44个基因片段的特异性引物,以O型FMDV O/MYA98/XJ/2010毒株的cDNA序列为模板,对目的基因进行PCR扩增;将获得的VP 3、VP 1和VP 4、VP 2基因片段分别插入2个杆状病毒供体质粒(pFastBacDual)的p10和pH双元启动子中,构建pFBD-VP3-VP1和pFBD-VP4-VP22个重组转座质粒;将验证正确的2个重组转座质粒分别转化含有穿梭载体(Bacmid)的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得2个重组杆粒rBacmid-VP3-VP1和rBacmid-VP4-VP2,经验证正确后,对其进行扩增和提取,将其分别转染Sf9贴壁昆虫细胞,构建2个重组杆状病毒rvAc-VP3-VP1和rvAc-VP4-VP2;2个重组杆状病毒共同感染悬浮培养的Sf9昆虫细胞,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞内对4个基因进行表达,目的蛋白通过间接免疫荧光试验(IFA)、SDS-PAGE、Western blotting及透射电镜(EM)进行检测。结果显示,本研究成功构建2株分别表达FMDV VP1、VP2、VP3和VP44个结构蛋白的重组杆状病毒;特异性抗体检测发现,4个蛋白VP1~VP4均成功表达,且具有良好的特异性反应;4个蛋白在Sf9昆虫细胞内能够完成自我组装,形成与天然病毒结构相似的VLPs,直径大小在25~30 nm。本研究利用共感染表达方式在Sf9昆虫细胞内成功制备出FMDV病毒颗粒,为开发高效安全的FMDV基因工程亚单位疫苗开辟了一条新思路。

摘要：根据美国马传染性贫血病病毒（EIAV）Wyoming株基因序列，设计扩增EIAVgag和p26基因的引物，用PCR法能忠实的分别扩增出全长gag和p26基因。经用杆状病毒表达系统对所获gag和p26基因进行克隆和重组，获得了高效稳定表达Gag和p26蛋白的重组杆状病毒（rBVs）。含有gag和p26基因的重组杆状病毒感染昆虫Sf21细胞，经无血清昆虫细胞培养基增殖和纯化，每升培养物能获得2mgCag或12mgp26蛋白。

摘要：960285 设计高效抗鳞翅目和鞘翅目昆虫的重组苏云金芽孢杆菌菌株[俄]/Kuzina, L. V.…∥Biotekhnologiya.-1994,7.-15～19[译自DBA,1995,14(8),95-04683] 将苏云金芽孢杆菌*** HD1负责晶体蛋白CryIA(b)合成的44MDa质粒分别接合转入不合成晶体蛋白的苏云金芽孢杆菌***98和苏云金芽孢杆菌***1516变种中。