摘要：重组腺相关病毒是当前体内基因治疗产品中最常用的载体。在其生产中,质粒是重要的起始原材料。质粒的设计与管理直接决定了产品的生物学作用机制、药学性质、有效性与安全性。因此,对质粒及其基因元件性质的理解是该类产品“质量源于设计”的管理基础。文章以商业化生产中常用的三质粒系统为例,概述了不同质粒的作用,介绍了主要基因元件,分析了质粒的设计要点,综述了合规要求,讨论了质粒的设计与合规考量,以期为以重组腺相关病毒为代表的基因治疗产品的开发和管理提供参考。

摘要：六、质量研究与质量标准1.质量研究rAAV载体类产品的质量研究应根据产品的设计、作用机制和生产工艺等方面确定,一般包括(但不限于):鉴别、结构分析、一般理化特性、含量、纯度、生物学活性、杂质、污染物检测等。研究样品应具有代表性,如工艺相近或相同的非临床研究用样品、临床试验用药品等。质量研究信息应完整,包括分析方法原理介绍、研究样品、试验条件和基本步骤、数据处理和结果分析等,分析方法应能满足预期用途。

摘要：二、适用范围本指导原则中的rAAV载体是指基于腺相关病毒的结构和理化特性,经设计和重组改造所形成的用于携带外源目的基因(或核酸片段)的病毒载体。本指导原则主要针对应用于体内基因治疗的rAAV载体类产品在申报临床试验时应完成和提交的药学研究信息提出建议。

摘要：目的构建表达DREAM基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺相关病毒(rAAV)载体,并观察感染PC12细胞后DREAM蛋白表达受抑制情况。方法设计并合成shRNA对应的2条互补的寡核苷酸链,pDC316-EGFP-U6质粒经BamHⅠ和HindⅢ双酶切与退火后的寡核苷酸连接,构建pDC316-EGFP-DREAMshRNA-U6质粒,以其为模板设计引物并引入EcoRⅠ和SalⅠ位点,PCR产物酶切后与pSANV2.0连接构建重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,酶切测序证实后,重组腺相关病毒介导将pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP感染PC12细胞,Western blot检测DREAM蛋白表达水平。结果经PCR、酶切及测序证实,重组腺相关病毒载体质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP构建成功,包装成病毒感染PC12细胞48 h后,Western blot结果显示与对照组细胞相比,DREAM蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论成功构建和筛选出介导特异性shRNA-DREAM的重组腺相关病毒载体。

摘要：腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是目前应用较为广泛的病毒载体之一。AAV载体作为基因治疗的工具,具有较高的生物安全性和稳定性、较低的免疫原性、较广的宿主范围、较强的特异性、可长时间表达外源基因等特点,因此,在基因治疗的研究过程中备受关注。本文就AAV的发现与生物学特性、重组AAV(r AAV)载体的设计、AAV载体在临床基因治疗中的应用及其可能引发的不良反应作一综述,以期为AAV载体今后的研究方向提供参考。