摘要：为建立一种简单、快速检测病毒性神经坏死病毒(VNNV)的重组酶介导等温扩增(RAA)方法,本研究通过比较分析VNNV RNA2基因保守序列,设计引物与探针。经过筛选优化,建立了VNNV实时荧光RT-RAA快速检测方法。结果显示,该方法在39℃恒温反应15 min即可快速、特异性地检测出VNNV,并与常见的鱼类RNA病毒核酸不发生交叉反应,其对标准质粒的检测下限为2.6×10^(1)copies/μL,组内和组间变异系数均小于5%。利用该方法对48份实验室及送检样品进行检测,结果与实时荧光RT-PCR的一致。上述结果表明,本研究建立的检测方法操作简单,特异性强,敏感性高,结果可靠,且不依赖于复杂的仪器,可适用于现场和实验室对VNNV的快速检测。

摘要：为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)简捷、高效的基层临床检测方法,本研究选取非洲猪瘟病毒保守基因B646L(P72)序列,设计特异性引物和探针,建立非洲猪瘟病毒实时荧光重组酶介导等温扩增(RAA)检测方法。结果显示,所建立方法与OIE推荐的荧光定量PCR方法灵敏度相当,低至10 copies,μL,检测时长仅需10 min,与口蹄疫病毒(FMDV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)均无交叉反应。对100份临床样品的检测结果与OIE推荐的荧光定量PCR结果一致,但相较于荧光定量PCR检测时间的2h,检测时间大大缩短。结果表明,本研究建立的方法灵敏度较高、特异性较好,为ASFV早期临床诊断提供了技术支持。