摘要：为建立一种简单、快速的急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)检测方法,本研究根据pirB基因保守序列设计了多组引物和exo探针组合,经过筛选优化,建立了VpAHPND实时荧光RPA检测方法。结果显示,该方法在42℃恒温反应15 min即可快速、特异性地检测出急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND),与其他虾类病原和养殖环境中的致病菌不发生交叉反应,最低菌体细胞检出浓度为3.8×10^(2)CFU/mL,质粒检测限为1.17×10^(1)copies/μL,且具有良好的重复性。利用本研究建立的实时荧光RPA方法与WOAH推荐的实时荧光qPCR方法对50份人工感染的南美白对虾样品进行检测,二者检测结果一致。结果表明,本研究建立的检测方法操作简单,反应灵敏,仪器依赖性低,结果可靠,适用于实验室和现场对VpAHPND快速检测。

摘要：目的:建立一种可现场快速检测空肠弯曲杆菌的方法。方法:应用重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术,设计引物探针,建立侧向流RPA法,使用特异性、灵敏性实验对该方法进行验证。结果:实验所用的所有非空肠弯曲菌在侧向流试剂盒上都是阴性的,空肠弯曲菌都是阳性的;该方法的检出限为1.2×10^3 CFU/mL。结论:本研究制作的RPA技术制作的侧向流试剂盒特异性和灵敏性良好,简单快捷,具有较强的应用价值。

摘要：为实现菊花滑刃线虫的高效准确鉴定,利用重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA),根据菊花滑刃线虫核糖体28S rRNA-D2/D3片段的保守区域设计特异性引物,建立了菊花滑刃线虫的RPA检测方法。结果表明:建立的RPA检测方法对菊花滑刃线虫具有高度的特异性,扩增出202 bp的特异性目标片段,检测灵敏度可达单条线虫DNA的1/320。该方法扩增效率高、检测时间短、特异性好、灵敏度高,适用于菊花滑刃线虫的快速检测。