摘要：运用生物信息学软件对GenBank中收录的30株新城疫病毒(NDV)全基因组序列间的差异和它们对应的F基因片段22～420核苷酸序列间的差异进行了分析。发现这些差异高度相关(r=0.937),该片段可作为区分NDV野毒和疫苗毒的指纹序列。据此设计了1对扩增用简并引物(其中一条用于PCR产物的直接测序),建立了RT-PCR-测序技术,并测得2个参数:NDV标准疫苗指纹序列库和指纹序列的变异参数。在此基础上,开发出多功能自动分析软件,通过对该指纹序列的分析,不仅可以区分NDV疫苗毒和野毒,还能同步测定这些病毒的毒力和基因型。该技术对NDV标准毒株的测定结果与已知信息完全吻合,且只需3 d即可获得结果。对不同禽类(鹅、鸽、鸵鸟、鸡)中分离的NDV的测定结果表明,59%为残留的疫苗毒。

摘要：为建立一种对猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)临床样本快速、简便的检测技术,以区分猪瘟(classical swine fever,CSF)野毒和疫苗毒感染,为规模化猪场CSF净化奠定基础。通过对GenBank中CSF野毒、疫苗毒及近源病毒的基因组全序列比对,发现CSF兔化弱毒疫苗株3′-NTR独立存在富含T的插入序列,根据这一特点分别在该插入序列的上、下两端设计2对单一RT-PCR引物并选择特异保守区域设计了二重RT-PCR引物,优化筛选能够鉴别CSF野毒与兔化弱毒疫苗的PCR反应条件,建立了能鉴别CSF野毒和疫苗毒的单一与二重RT-PCR鉴别诊断方法。敏感性和特异性分析表明,单一RT-PCR检测CSFV各引物最低核酸检测量分别为2.2pg(单一RT-PCR中的1对引物)和1.7pg(单一RT-PCR中的另外1对引物);二重RT-PCR检测CSFV各引物最低核酸检测量分别为8.2pg(CSF野毒)和6.7pg(CSF疫苗毒),两种方法均检测不到PRV、PRRSV、JEV、BVDV、PCV2的DNA/RNA。采用该方法对146份可疑临床样品进行检测,结果表明CSF疫苗毒与野毒在能繁母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪中的二重感染率分别为6.3%、7.4%、8.3%、8.6%。本研究建立的单一与二重RT-PCR方法都具有敏感性强、特异性优、重复性好的特点,该研究对规模化猪场猪瘟的净化具有十分重要的参考价值。

摘要：对GenBank中的小反刍兽疫野毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)及疫苗毒株的基因序列进行分析,设计两对引物和两条特异探针,建立小反刍兽疫病毒野毒与疫苗毒株的双重荧光RT-PCR鉴别检测方法。特异性检测表明,建立的双重荧光RT-PCR方法,可特异检测野毒(FAM通道)和疫苗毒(VIC通道)。灵敏度实验表明,FAM通道可检测到10^(-5)稀释度的RNA(3.576 ng/mL),VIC通道可检测到10^(-3)稀释度的RNA(27.6 ng/mL)。重复性实验表明,该双重荧光RT-PCR方法重复性较好。用建立的二重荧光RT-PCR方法对20份组织样品进行检测,结果显示,该方法可以有效区分野毒和疫苗毒株,且野毒检测结果与实验室确诊阳性结果一致,可以用于临床检测。

摘要：为快速准确检测小反刍兽疫病毒野毒和疫苗毒,建立一种特异性强、灵敏性高、经济实惠的实验室鉴别诊断方法,在同一反应体系内同时鉴别诊断小反刍兽疫野毒株和疫苗毒株用于应对该疫病诊断,使实验室检测工作更具有实效性。根据基因库中基因组序列设计2对特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立能够同时检测并鉴别小反刍兽疫病毒(PPRV)野毒和疫苗毒的双重荧光RT-PCR检测方法。结果表明,建立的双重荧光RT-PCR可特异性检测小反刍兽疫野毒(FAM通道)和疫苗毒(TAMRA通道);敏感性实验表明,野毒(FAM通道)可检测到10^(-3)稀释度的RNA,疫苗毒(TAMRA通道)可检测到10^(-5)稀释度的RNA;用建立的二重荧光RT-PCR方法对20份样品进行检测,结果显示,该方法可以有效区分野毒和疫苗毒株,且检测结果与商品试剂盒检测结果一致,可用于临床检测。

摘要：根据猪伪狂犬病病毒(PRV)g I/g E基因序列,设计一对特异性引物,建立了鉴别PRV野毒感染的荧光定量PCR方法。该方法灵敏度达到102拷贝/μL,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、乙脑病毒(JEV)不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;用PRV强毒攻毒仔猪,荧光定量PCR比普通PCR能更灵敏检出组织带毒量。该方法可以用于猪的组织样品,如脑、肺、扁桃体、淋巴结等样品中伪狂犬野毒的定量,可用于临床伪狂犬野毒感染的早期检测和定量分析猪伪狂犬病毒感染程度。

摘要：根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与 PRV 的 gB、gD、gE 基因序列互补的3对引物。对样品中的 PRV DNA 模板进行了多重 PCR 扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带。

摘要：为建立一种能够快速鉴别猪瘟病毒野毒和疫苗弱毒株的临床检测方法,本实验针对猪瘟病毒野毒株及疫苗弱毒株分别设计了特异性鉴别引物及探针,利用RT-PCR方法特异性扩增目的基因后进行芯片杂交反应并显色,直观判定检测结果,经反应条件优化建立了一种鉴别检测猪瘟病毒的基因芯片方法,并对该方法的特异性、敏感性及重复性进行了试验。结果显示,该芯片检测方法仅能鉴别检测出猪瘟病毒野毒株与疫苗弱毒株,不能检测猪的其他12种主要传染病病原,特异性较强。对猪瘟病毒野毒株和疫苗弱毒株重组质粒标准品的最低检出限分别为6.98拷贝/μL和6.92×101拷贝/μL,敏感性较高。选择不同批次基因芯片对同一质粒标准品的检测结果均为阳性,重复性良好。利用该方法检测177份临床样本,结果与国标猪瘟病毒RT-nPCR检测方法(GB/T26875-2018)相比较,总体符合率为99.43%(176/177)。可视化猪瘟病毒鉴别诊断基因芯片方法可在2 h内完成对猪瘟野毒感染和疫苗免疫的临床样本的鉴别检测,且检测结果可用肉眼直观判定,在基层猪瘟流行病学监测及我国猪瘟的防控和净化方面具有良好的应用前景。

摘要：猪伪狂犬病病毒g E基因缺失疫苗已得到世界各地养殖户的普遍认可,使用范围较广。为建立一种快速区别疫苗毒和野毒的检测方法,本试验针对PRV的g E基因序列设计引物。经过各种条件的不断摸索优化,建立了一套敏感度较高、特异性较好的反应体系,适用于临床诊断、流行病学调查及科学研究,对确诊猪伪狂犬病有重要意义。

摘要：根据猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因序列保守区段,设计一对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可区分猪伪狂犬病毒野毒株与基因缺失疫苗株的PCR检测方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证。结果显示,该PCR方法可扩增出388 bp的目的片段;对模板的最低检测量为1.1 pg;与猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪支原体、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪乙型脑炎病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应,具有高特异性。采用建立的PCR方法对2014年以来全国不同地区81个猪场421份疑似病料进行检测,发现PRV猪场平均阳性率为35.80%,样品平均阳性率为25.42%。该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于PRV的临床诊断和流行病学调查。

摘要：参考GenBank发表的传染性法氏囊病毒(IBDV)基因组序列,设计并合成了一对特异扩增IB-DVVP2基因的引物。以广西玉林发病火鸡群分离的IBDV野毒YL株为材料,以其基因组为模板利用RT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物,将VP2基因克隆于PUC119质粒上,得到重组PUC119质粒。并对VP2基因全序列测定、分析和聚类表明,YL株与欧洲超强毒株非常相似,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。