摘要：　金属硫蛋白（ＭＴ）的三维结构已由二维ＮＭＲ和Ｘ射线晶体衍射测定。本文使用ＰＳ－３００图象显示仪及计算机Ｈｙｄｒａ程序，对ＭＴ分子进行改造设计，目的是探索提高ＭＴ与Ｃｄ，Ｈｇ结合能力的分子设计。计算表明，ＭＴ分子中α－ｄｏｍａｉｎ很难再加入一个Ｃｄ原子，而β－ｄｏｍａｉｎ有可能设计再加一个Ｃｄ，提出在第２９位残基后加两个残基，其中２９（２）为Ｃｙｓ，可满足β－ｄｏｍａｉｎ新的结构要求。

摘要：背景：实验已证实金属硫蛋白对成熟心肌有保护作用，但对于未成熟心肌的保护作用尚缺乏实验证据。 目的：探讨诱导金属硫蛋白在未成熟心肌中的表达及对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能的影响，为未成熟心肌的保护提供有效的方法。 设计：完全随机分组设计，对照实验。 单位：青岛大学医学院附属青岛市立医院妇产科和心脏外科，华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科。 材料：实验于2001-10／2002-09在华中科技大学同济医学院药理实验室(安全级别一级)完成。选用出生14～21d日本长耳大白兔27只，雌雄不拘。随机将兔分为4组：对照组9只，腹腔注射ZnSO_4 12，24，48h组各6只。 方法：①对照组：腹腔注射蒸馏水0．3mL，按注射后12，24和48h取离体心脏，灌注重碳酸氢盐缓冲液15min转为工作心15min，全心停灌45min，恢复灌注15min改为工作心30min。腹腔注射ZnSO_1 12，24，48h组：分别按腹腔注射36g／L ZnSO_4 12，24和48h后取离体心脏，余方法同对照组。②计算心肌肌酸激酶和乳酸脱氢酶15min漏出率：心肌肌酸激酶(乳酸脱氢酶)(IU／L)×15min漏出液(L)／[1000×心肌湿重(g)]。③采用荧光素酶法心肌组织三磷酸腺苷含量。④心肌线粒体Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶活性按Jones方法在Shimadzu UV-1200型紫外分光光度计上测定。⑤在电感耦合等离子体原子发射光谱仪上测定线粒体Ca^(2+)含量。⑥取制备的心肌线粒体悬液按Nayler法测定线粒体合成三磷酸腺苷能力。⑦采用^(109)Cd-血红素饱和法测定心肌组织中金属硫蛋白含量。组间计量资料差异比较采用t检验。 主要观察指标：各组兔心肌细胞中金属硫蛋白含量、肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、三磷酸腺苷含量、心肌细胞内Ca^(2+)含量、心肌线粒体Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶活性及线粒体Ca^(2+)含量、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力比较。结果：日本长耳大白兔27只均进入结果分析。①乳酸脱氢酶漏出率、肌酸激酶漏出率、心肌Ca^(2+)含量、线粒体Ca^(2+)含量：腹腔注射ZNSO424，48h组明显低于对照组和腹腔注射ZnSO_412h组(P<0．01)；。②心肌三磷酸腺苷含量、心肌线粒体Ca^(2+)-三磷酸腺苷酶活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷能力、心肌金属硫蛋白含量：腹腔注射ZnSO_4 24，48h组明显高对照组和腹腔注射ZnSO_4 12h组(P<0．05～0．01)。 结论：腹腔注射ZnSO_4可诱导心肌金属硫蛋白长时间表达，金属硫蛋白可减轻未成熟心肌细胞缺血再灌注损伤。

摘要：根据GenBank中蚯蚓(Eisenia fetida)金属硫蛋白(MT)基因序列设计合成引物,采用RT-PCR扩增出目的基因片段,将目的基因片段插入pEASY-Blunt中制备质粒标准品.通过不同梯度稀释倍数的质粒标准品,建立了目的基因MT与内参基因β-actin的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法.通过土壤染毒培养实验,将蚯蚓分别暴露于50,500,1000mg/kg重金属Cd染毒的自然土壤中培养14,28d,研究蚯蚓体内MT mRNA转录水平的表达变化.结果表明,重组质粒测序后显示目的片段序列同源性好,证明所设计的MT、β-actin引物能成功用于蚯蚓MT mRNA的检测.两基因构建的荧光定量标准曲线线性关系分别为0.994,0.999,且PCR扩增效率也皆接近于100%.染毒实验发现,Cd可诱导蚯蚓体内MT mRNA的表达,其表达水平与Cd污染暴露呈现出剂量-效应和时间-效应关系,表明蚯蚓MT基因可作为潜在分子标志物,诊断环境中Cd污染及其暴露水平.

摘要：根据NCBI中紫花苜蓿1型金属硫蛋白基因(MET1,登录号:AF189766.1)cDNA序列设计一对特异性引物,以紫花苜蓿品种"农菁1号"的cDNA为模板,利用PCR技术克隆出的一个基因,命名为MsMT1,测序发现该基因全长228bp,编码75个氨基酸。通过碱基序列比对发现MsMT1与MET1的相似度为99%。通过氨基酸序列分析和进化树分析,发现与其他植物的1型金属硫蛋白基因具有较高的同源性。利用qRT-PCR对MsMT1在苜蓿不同器官中的表达进行分析,发现该基因在根和子叶中表达量较高。将苜蓿幼苗进行不同浓度NaCl、Na_2CO_3、NaHCO_3及不同pH值胁迫处理后,观察MsMT1基因的表达,发现MsMT1的表达量随盐碱处理液浓度和pH值变化发生改变,说明MsMT1与植物的抗逆性相关。采用农杆菌介导法将MsMT1导入苜蓿植株体内,卡那抗性的筛选和Northern blot结果显示MsMT1基因能够在转基因苜蓿中高效表达。用不同浓度NaCl、NaHCO_3处理野生型和转化MsMT1基因的苜蓿幼苗,观察幼苗受胁迫后的表型,发现转基因的苜蓿幼苗比未转基因的苜蓿幼苗抵抗力高。本研究表明MsMT1基因能够增加苜蓿对胁迫的抗性。

摘要：金属硫蛋白(metallothionein,MT)在去除重金属、抗氧化和免疫调节等方面发挥重要作用。当前获取天然MT蛋白的首选方法是从组织中提取,工艺复杂且收率很低。近年来涌现多种标签融合后异源表达的设计,如GST或His等。然而后期标签的去除大大降低了收率,因此难以实现工业化生产。类弹性蛋白(elastin-likepolypeptides,ELPs)融合技术能够实现目标蛋白的可溶性表达且纯化工艺简便快捷。本研究将ELP与MT蛋白融合,通过ELP融合显著增加了MT的可溶性表达,采用多次可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)处理等纯化工艺高效简便地获得了纯度97%以上的ELP-MT蛋白。获得的ELP-MT蛋白2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐[2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)ammonium salt,ABTS]自由基清除率IC_(50)为0.77μmol/L,为维生素E衍生物Trolox的53.7倍,同时表现出较强的1,1-二苯基-2-三硝基肼(1,1-diphenyl-2-trinitrohydrazine,DPPH)自由基清除能力。并且ELP-MT对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3细胞无增殖毒性,可显著促进NIH/3T3细胞黏附和迁移,具有良好的生物相容性。本研究构建的ELP-MT融合蛋白同时具有金属硫蛋白和弹性蛋白的特性,为重组MT蛋白的规模化生产和其在食品保健及化妆品领域的应用开发奠定了技术基础。

摘要：本实验采用双因素配对设计,目的在于探讨在Cd经口染毒的情况下,低Ca饲料对大鼠组织中Cd的摄取及镉-金属硫蛋白（Cd-Mt）含量的影响。本实验用24只成年雄性Wistar大鼠（体重160～180g）,随机分成4组,每组6只。对照组喂饲正常饲料,低Ca组喂饲低Ca饲料;Cd染毒组喂饲正常饲料,同时饮水中加CdCl2（0.89mmol/L,100mg/L）;低Ca+Cd染毒组喂饲低Ca饲料,同时饮水中加CdCl2（0.89mmol/L,100mg/L）。在整个8周实验期间,4组大鼠的热量和营养供给相同,实验结束后用原子吸收法测定大鼠肝、肾、脾和红细胞中Cd的含量,采用放射免疫法测定血浆、肝、肾中Cd-Mt含量。结果表明,低Ca组。

摘要：采用三因素三水平Box-Behnken试验设计对超声波辅助提取酵母菌金属硫蛋白工艺参数进行优化,得到回归模型。通过统计学分析得出模型与实际值拟合良好,所得最佳工艺参数为料液比1∶16(m∶V),提取时间32min,提取强度287W,热处理时间8min,由该条件进行提取,得到粗提液的巯基活性的实际值为0.162μmol/L。

摘要：在油茶cDNA文库和EST文库构建的基础上，根据油茶金属硫蛋白的EST序列设计特异引物，以油茶近成熟种子为材料，利用3＇RACE技术，克隆到1个金属硫蛋白基因的cDNA全序列。该基因全长为675bp，其中5＇非编码区59bp，3＇非编码区379bp，开放阅读框长234bp，编码78个氨基酸；该蛋白含有14个半胱氨酸，分布在蛋白质的N端和C端，呈CC，CX，CXXC形式排列。预测该蛋白相对分子量为7864．9Da；等电点为4．86；37～48位氨基酸间有较强的疏水区。多序列比对发现油茶MT核苷酸序列与茶的相似性达到99％，推导的氨基酸序列与茶完全相同，因此将该基因命名co_mtl。

摘要：金属硫蛋白(MT)是一类金属含量高、富含半胱氨酸、缺乏芳香族氨基酸、组氨酸含量极少的低分子量金属结合蛋白.目前MT在心肌纤维化、肾纤维化中的作用研究较多,尤其是糖尿病性心肌病中报道较多,而在肝纤维化过程中的具体作用机制尚不十分清楚.由于MT是一种可在多种条件下诱导表达的物质,部分中药制剂也可诱导其产生从而发挥治疗作用[1],因此我们设计本实验,研究在四氯化碳(CCl4)中毒性肝纤维化大鼠模型中,抗肝纤维化中药制剂丹芍化纤胶囊能否诱导肝组织中MT的表达,并进一步探讨MT与肝纤维化之间的可能联系.

摘要：[目的]对从水稻幼苗中分离的2个3型金属硫蛋白基因OsMT-I-3a和OsMT-I-3b的结构进行了分析,并对其表达模式进行了检测。[方法]利用Blast搜索水稻数据库,设计引物并利用RT-PCR的方法克隆OsMT-I-3基因cDNA全长。通过多重比对等方法对其基因和蛋白结构进行了分析。利用Northern杂交对这两个基因的组织表达模式和环境应答模式进行了检测。[结果]OsMT-I-3a和OsMT-I-3b分别编码62和65个氨基酸的多肽,具有典型的3型金属硫蛋白的半胱氨酸分布模式。OsMT-I-3a基因在叶片中没有检测到表达,OsMT-I-3b在叶片中高表达,且各种非生物胁迫因素会影响两种基因的表达模式。[结论]Ⅰ类3型2个水稻MT基因可能参与水稻多种环境胁迫的信号通路,在水稻抗非生物胁迫过程中起作用。