摘要：目的克隆和表达日本血吸虫金属蛋白酶(metalloprotease)编码基因并纯化表达产物,观察其在成虫体内定位及在小鼠的免疫试验。方法根据表达序列标签(EST)测序的结果设计引物,从含有金属蛋白酶基因的日本血吸虫cDNA克隆(SJM2CFB04,简称SjB04)中扩增得到该编码基因片段,亚克隆至原核表达载体pET28a中表达,应用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。应用间接免疫荧光法,观察金属蛋白酶在血吸虫成虫体内的分布。将18只C57BC/6小鼠随机分成两组,实验组用SjB04重组蛋白(25μg/只)免疫小鼠,共3次,每次间隔2周;对照组用佐剂免疫(50μl/只)。末次免疫后2周,每鼠腹部感染40±2条日本血吸虫尾蚴,攻击后第37天起连续收集6 d小鼠粪便,计算每克粪虫卵数和减卵率;第42天剖杀小鼠,门静脉灌注收集成虫并计算减虫率。结果获得了SjB04基因(ORF 528 bp)的编码序列,构建了原核表达载体,并在大肠埃希菌中表达,经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjB04。免疫荧光法检测结果显示,SjB04主要定位于日本血吸虫成虫的肠管表皮。Western blotting分析结果显示,该纯化重组蛋白SjB04能被感染兔血清和免疫兔血清识别,在相对分子质量(Mr)29 800处出现一清晰条带。用该纯化蛋白免疫C57BC/6小鼠后,减虫率为27.1%,粪减卵率为57.8%。结论克隆获得的日本血吸虫SjB04重组蛋白主要定位于日本血吸虫成虫的肠管表皮,该蛋白可明显减少感染日本血吸虫的C57BC/6小鼠的粪卵排出量。

摘要：背景:抗骨增生胶囊在治疗骨关节疾病方面有很好的疗效,基础研究多集中于颈椎病等骨关节疾病上。目的:拟观察抗骨增生胶囊含药血清对白细胞介素1β引起的软骨细胞增殖凋亡及基质金属蛋白酶分泌的影响。设计、时间及地点:分组对照体外细胞学实验,于2007-03/09在河北医科大学解剖教研室细胞培养中心完成。材料:新生1周SD大鼠,用于培养软骨细胞;体质量200g左右SD大鼠10只,以中药水溶液灌胃后定时取血制备含药血清。方法:采用胶原酶NB4消化法从大鼠关节软骨中分离出软骨细胞并进行原代和传代培养,实验分为3组:空白血清组:90%L-DMEM+10%空白血清,每日给予同等量的生理盐水;白细胞介素1β组(90%DMEM+10%空白血清+白细胞介素1β);中药血清+白细胞介素1β组(90%DMEM+10%中药血清+白细胞介素1β)。白细胞介素1β加入量为5μg/L,培养72h。将实验用细胞消化传代后制成单细胞悬液,以1×108L-1的密度接种于96孔培养板,100μL/孔,每组6孔。主要观察指标:倒置显微镜下观察中药含药血清对软骨细胞增殖的影响;四甲基偶氮唑盐比色法检测其各孔吸光度变化;流式细胞仪分析凋亡细胞百分率;基质金属蛋白酶13Elisa试剂盒检测不同组基质金属蛋白酶13分泌情况。结果:在正常培养基条件下,细胞形态均匀,死亡脱落细胞较少。空白血清组软骨细胞的增殖速度缓慢,细胞较稀疏。白细胞介素1β组细胞明显稀疏,部分细胞胞浆中空泡增多,细胞核形态不规则。在中药血清培养基作用下,软骨细胞增殖的速度较白细胞介素1β组快,胞体显著增大,细胞核形态规则。白细胞介素1β组细胞增殖数量减少,凋亡细胞百分率增加,其培养的细胞上清液中基质金属蛋白酶13含量升高,抗骨增生胶囊含药血清可对抗白细胞介素1β对软骨细胞的影响。结论:体外条件下,抗骨增生胶囊含药血清能够抑制白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡;降低基质金属蛋白酶13水平。

摘要：为验证金属蛋白酶在修护肺损伤方面的作用,文章特设计如下实验:实验共设置四组,每组9只60日龄雄性小鼠,分别标记为:空白对照组、LPS阳性对照组、MMP给药组(按0.2 mg/20 g体重给药)、地塞米松磷酸钠给药组(按0.8 mg/kg体重给药)。每组再分成两个亚组进行不同指标检测,一组用于检测细胞因子和细胞计数,另一组做病理切片。实验证明MMP对LPS所致的肺部炎症浸润有一定的保护作用;减轻了肺组织的病理反应和炎症损伤。因此,可以认为MMP能够明显减轻由LPS所致的急性肺损伤。

摘要：目的:对创伤弧菌金属蛋白酶融合蛋白表达条件进行优化,从而获得高效稳定的金属蛋白酶原核表达系统。方法:质粒pET-32a-vvp转化***21/DE3后,针对诱导过程中对工程菌表达蛋白产生影响的4个因素诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度以及诱导时摇菌的转数,运用统计学软件进行正交实验设计,对结果进行直观分析及方差分析,并对实验得出的最佳搭配诱导条件进行验证。结果:直观分析表明摇菌转数的R值最大,其次为诱导时间和诱导温度,诱导剂IPTG浓度的R值最小;方差分析表明摇菌转数的P值小于0.05,而时间因素、温度及IPTG浓度的P值均大于0.05。结论:摇菌转数为主要因素(其为250r/m时,表达水平最高),其次为诱导时间,而诱导温度和诱导剂IPTG浓度对实验结果影响不明显。本实验的最佳搭配诱导条件为摇菌转数250r/m、诱导时间4h、诱导温度37℃、诱导剂IPTG浓度1mmol/L。在此诱导条件下,金属蛋白酶的表达量高达40.67%。

摘要：【本刊讯】据中国农业科学院网站2014年8月15日报道，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所王玉娥研究员、郭龙军博士发现了金属蛋白酶家族成员参与调节猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染的新作用机制，研究表明，金属蛋白酶活性的变化影响了PRRSV对宿主的侵袭能力及疾病的发展进程，为该病的治疗和新型药物设计提供了理论依据。该研究对于猪繁殖与呼吸综合征病的防控具有重要意义。

摘要：本发明通过设计DNA引物，运用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503的总DNA中扩增得到了1005碱基，将其克隆于pMD18-T载体上，对所获得的基因进行序列分析测定，含有高温中性蛋白酶基因EMP，片段大小为942个碱基，表达314个氨基酸，并利用枯草芽孢杆菌系统上进行验证，确认了所获得的基因。

摘要：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所王玉娥研究员、郭龙军博士发现了金属蛋白酶家族成员参与调节猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染的新作用机制,研究结果在线发表于近期美国微生物协会主办的《病毒学杂志》上。研究表明,金属蛋白酶活性的变化影响了PRRSV对宿主的侵袭能力及疾病的发展进程,

摘要：通过分子动力学模拟研究了MMP-2和hydroxamate抑制剂之间的作用模式.在分子动力学模拟中,对于催化区的锌离子和其共价结合的配体(包括抑制剂和组氨酸)采用了键合的模型.从模拟的结果可以看到,R1取代基和MMP-2的S1疏水口袋中的部分残基能形成很好的几何匹配,从而可以产生很强的范德华和疏水相互作用.模拟结果也表明,两个抑制剂和MMP-2之间分别能形成5个和8个氢键,抑制剂B比A活性更高的原因就是能够形成更加有利的氢键作用模式.在整个模拟过程中,催化锌都能保持好的五配位形式,配位键的长度也处于稳定的状态.预测得到的MMP-2和其抑制剂的相互作用模式对于全新抑制剂的设计提供了非常重要的结构信息.

摘要：目的:探索稳定下调钙网蛋白(calreticulin,CALR)对NK/T细胞淋巴瘤细胞SNK6细胞侵袭性的影响及其可能机制。方法:设计靶向人钙网蛋白的特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列,构建重组慢病毒载体;三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染SNK6细胞,嘌呤霉素抗性筛选稳定下调钙网蛋白表白的SNK6细胞。应用CCK8法测定细胞增殖活力,Transwell小室测定细胞侵袭。Western blot检测SNK6细胞CALR表达水平,荧光定量PCR检测SNK6细胞CALR、MMP2、MMP9和VEGF的转录水平。结果:成功构建重组慢病毒载体pLKO.1-puro-shCALR,并包装慢病毒,筛选出稳定下调钙网蛋白的SNK6细胞株。稳定下调SNK6细胞钙网蛋白表达后,SNK6侵袭性减弱,MMP2、MMP9和VEGF的转录水平降低。结论:稳定下调SNK6细胞钙网蛋白的表达可使SNK6细胞侵袭性减弱,其机制可能与降低MMP2、MMP9和VEGF的转录水平有关。

摘要：蛇毒含锌金属蛋白酶与基底膜金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)有着相似的活性区域和生物学功能,它们同属MMP超家族(MMP superfamily)。MMP超家族蛋白能水解基底膜上的胶原蛋白,对结缔组织细胞分化、基底膜形成和降解起着重要的平衡作用。在人体中,这种子衡的失调常导致关节炎和肿瘤疾病。因此,MMP蛋白成为抗癌症和关节炎药物设计研究中的重要靶蛋白。1994年,两种蛇毒含锌金属蛋白酶:来自东部响尾蛇(eastern diamondback rattlesnake)的Adamalysin Ⅱ和来自西部响尾蛇(western diamondback rattlesnake)的Atrolysin C的晶体结构得到解析。但详细的作用机理,特别是出血作用机理目前尚不清楚。