摘要：设计特异引物,以SMARTcDNA为模板,应用PCR方法扩增牙鲆钙调素基因(Paralichthys olivaceus calmodulin,PoCaM)。计算机辅助分析表明,PoCaM基因编码149个氨基酸的推定蛋白,其分子量为17kD,等电点为3.93,含有4个螺旋-环-螺旋样结构,与其它鱼类CaM氨基酸一致性为97.3%-100%。构建原核表达重组质粒pET32a/PoCaM,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE蛋白电泳,结果显示PoCaM在大肠杆菌中进行了特异性融合表达,融合蛋白分子量约为34kD,与预期分子量大小一致。同时,以绿色荧光蛋白(GFP)为表达标签,构建真核表达重组质粒pEGFP-N3/PoCaM,经Lipofectamine 2000介导转染鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC),荧光显微镜观察显示,PoCaM在EPC细胞中进行瞬时表达,主要分布于细胞核及胞浆中。

摘要：以京海黄鸡为材料,根据鸡钙调素基因启动子和第6外显子序列设计6对引物,用PCR-SSCP方法进行单核苷酸多态性检测,并对京海黄鸡群体进行群体遗传学分析。结果发现,引物C2扩增片段上存在3个单碱基突变,第326、327、366处分别发生了G→A、A→G、T→C的单碱基突变,表现出6种基因型:AA、AB、AC、BB、BC、CC。引物C5扩增片段上共有2个单碱基突变,第479、480处发生了T→C和G→A单碱基突变,表现出DD、DE和EE 3种基因型。在京海黄鸡群体中这2个座位均处于Hardy-W e inberg平衡状态。群体遗传分析表明,京海黄鸡在C2和C5这2个座位的纯合度较为一致;2位点计算得到的多态信息含量表明这2个位点为中度多态位点。表明京海黄鸡钙调素基因具有较为丰富的单核苷酸多态性,可进一步作为候选基因分析其与钙沉积的相关性。