摘要：目的:优化广西钩藤总黄酮的超声波辅助提取工艺,并检测其体外抗氧化活性。方法:采用UV法检测钩藤总黄酮含量;以总黄酮提取率为考察指标,采用正交设计法优化钩藤总黄酮的超声波辅助提取工艺条件;利用DPPH法检测乙醇提取物清除DPPH的活性。结果:采用超声波辅助提取法提取两次,超声功率360 W,最佳提取工艺为60倍量60%乙醇、超声提取30 min、提取温度70℃;在0.05~0.25 mg/mL范围内,随总黄酮提取物浓度的增加,提取物对DPPH的清除率增大;当提取物浓度为0.25 mg/mL时,柳州、梧州、钦州、玉林和桂林等5个产地的钩藤总黄酮对DPPH的清除率均在85%以上,分别为92.0%、91.6%、86.9%、90.8%、85.7%和97.3%。结论:该提取工艺稳定可行,可作为钩藤总黄酮的提取工艺;钩藤黄酮醇提取物对DPPH具有清除作用,可为钩藤黄酮的深入开发提供参考。

摘要：【目的】克隆钩藤(Uncaria rhynchophylla)中马钱苷酸甲基转移酶(loganic acid methyltransferase,LAMT)基因及其启动子,对UrLAMT基因的组织表达及其对生物和非生物胁迫的响应进行分析,并对UrLAMT及其启动子的生物信息学进行分析,为进一步研究UrLAMT转录调控奠定基础。【方法】基于钩藤的转录组数据设计引物,采用PCR从钩藤cDNA中克隆UrLAMT序列,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR,分析UrLAMT在钩藤不同组织(根、茎、叶、花、果实、钩)中的表达,以及对外源茉莉酸甲酯(MeJA)、遮光/复光胁迫的响应;利用FPNI-PCR技术克隆UrLAMT上游启动子序列,并验证其活性,结合酵母单杂交试验,分析相应转录因子与UrLAMT启动子的调控关系。【结果】克隆得到钩藤UrLAMT序列,其长度为1137 bp,共编码378个氨基酸。UrLAMT蛋白质相对分子质量为42.64 ku,理论等电点为5.76,为亲水性蛋白,无信号肽,不含跨膜结构,定位在细胞质中;UrLAMT基因在钩藤叶中表达量最高,其次为根;UrLAMT均能响应MeJA和光;其与短小蛇根草和长春花的进化关系较近。UrLAMT启动子序列长度为1141 bp,除核心响应元件外还含有多个光响应元件,UrLAMT启动子在酵母中与光调控转录因子HY5存在相互作用。【结论】获得了UrLAMT基因及其启动子序列,其在钩藤叶中表达量最高,可能受光诱导。

摘要：根据钩藤转录组中STR基因核心序列设计特异性引物,并进行RACE扩增,克隆到UrSTR基因(GeneBank:OL310251)的cDNA全长1541 bp,编码345个氨基酸;采用染色体步移克隆到UrSTR基因启动子(GeneBank:OL310252)序列1179 bp。系统进化发育树分析显示,钩藤UrSTR蛋白与同为茜草科的美丽帽柱木和短小蛇根草的STR蛋白聚为一类,其亲缘关系最近;亚细胞共定位实验表明UrSTR蛋白定位于液泡膜上;SDS-PAGE结果表明pET-28a-UrSTR重组蛋白成功表达且大小与预期相符;启动子顺式作用元件分析表明其含有光响应、胁迫响应和激素响应有关的多种调控元件;启动子活性分析UrSTR基因启动子具有转录活性。成功克隆了UrSTR基因及其启动子序列并对其进行生物信息学分析和启动子活性分析;后期需要优化UrSTR原核表达体系,为进一步纯化UrSTR蛋白研究其结构和功能奠定基础。

摘要：目的优选钩藤中生物碱的提取工艺条件,制定出最佳提取工艺方案。方法采用离子液体-微波法提取,以4种代表生物碱(钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱)含量作为指标,通过单因素实验考察离子液体浓度、液料比、提取时间和pH值4个因素对提取率的影响,并通过均匀设计法优选最佳提取工艺参数。实验中用高效液相色谱法测定钩藤4种代表生物碱的含量。结果钩藤中生物碱的最佳提取条件为:选用0.54 mol.L-1离子液体[C4MIM]BF4的水溶液为提取溶剂,pH值调至1.42,液料比100∶1 mL.g-1,提取时间8 min。钩藤中4种代表生物碱的质量分数达2.52 mg.g-1。结论该提取工艺操作简便合理,重复性良好,具有可行性。

摘要：目的：摸清贵州省剑河县钩藤基地的土壤主要重金属安全性及钩藤不同部位主要重金属的富集情况。方法：采集贵州省剑河县3个种植年限的钩藤土壤和植株样品,分析重金属含量,用Excel 2003、DPS v7.05统计软件处理数据,单因子指数法和***综合指数法进行安全评价。结果：不同生态环境下种植钩藤的土壤p H在4.82~5.27之间,呈强酸性;Cr、As、Hg、Cu、Pb元素在钩藤根区土壤中的含量均值均随种植年限的增长呈现先增后减的变化趋势;As、Cu、Hg元素在钩藤非根区土壤中的含量均值均随种植年限的增长呈现先增后减的变化趋势,Cr、Pb元素含量均值随着种植年限的增长呈现先减后增的趋势;而Cd元素在钩藤根区和非根区土壤中的含量均值随着种植年限的增长则呈现持续增加的趋势。结论：钩藤对土壤重金属Cd有明显的富集作用,Cu在钩藤各个部位吸收迁移能力最强;各年限下的钩藤土壤重金属含量均在安全范围之内,均未受到污染。

摘要：采用正交设计法对钩藤复方中钩藤碱的水煮时间和其它工艺条件进行了优选研究，确定了合理可行的工艺条件，即：用碎钩藤，无须浸泡，水煮２次，共５０ｍｉｎ，共加水２５倍，在此工艺条件下，钩藤碱的提取率为３９．７１％。含量测定方法为薄层扫描法。

摘要：[目的]探讨钩藤总生物碱提取工艺的影响因素,确定其最佳提取方案,为进一步分离提纯及生产开发奠定基础。[方法]对比超声辅助酸性醇及超声辅助酸性醇回流2种提取方法,同时以单因素和正交试验相结合的方法确定钩藤中总生物碱的最佳提取条件。[结果]通过对比单因素试验结果显示,pH值在1、2、3,乙醇浓度在50%、70%、90%,超声时间在45、60、75 min条件下吸光度较高,以其为试验因素水平进行正交试验设计。结果表明,提取钩藤中总生物碱的较佳工艺条件是pH值为1、乙醇浓度为70%、超声浸提时间为75 min。[结论]在研究得出的最佳提取工艺条件下提取钩藤总生物碱简便、稳定、可行。

摘要：目的优选凯氏定氮法测定钩藤饮片总氮含量的条件参数,探索将总氮量作为钩藤饮片质量评价参考指标的可行性。方法采用均匀设计法优化凯氏定氮仪(FOSS Kjeltec 8100)测定总氮的消解条件,并测定不同来源饮片总氮含量。结果凯氏定氮仪测定的消解最佳条件为硫酸加入量为14 ml,硫酸钾加入量为7.0 g,硫酸铜加入量为0.8 g。结论该方法快速、准确,重现性好,为钩藤饮片质量研究提供了新的参考。

摘要：以钩藤叶为材料,在干燥温度、提取时间和提取剂浓度3个单因素试验的基础上,采用Box-Behnken中心组合进行3因素3水平试验设计,建立回归方程,优化出钩藤叶中钩藤碱和异钩藤碱的最佳提取条件。模拟得到钩藤叶干燥温度为54.95℃时,钩藤碱和异钩藤碱的最优提取条件为超声时间60 min、甲醇浓度73.35%。在此条件下,钩藤碱的最高提取率为133.342μg·g^(-1),异钩藤碱的最高提取率为429.746μg·g^(-1)。为了方便实际操作,校正条件为干燥温度55℃、超声提取60 min、甲醇浓度73%。通过验证试验得到钩藤碱平均提取率为130.8μg·g^(-1),异钩藤碱平均提取率为425.6μg·g^(-1),与模型预测值较为接近。因此响应曲面法可以对钩藤叶中钩藤碱和异钩藤碱的提取条件进行优化。

摘要：目的:用响应面法优选钩藤乙醇温浸工艺的最佳条件。方法:以异钩藤碱的提取率为响应值,乙醇浓度、次数、温度、时间为自变量,在单因素实验的基础上采用4因素3水平响应面法进行试验设计,确定温浸的最佳条件。结果:温浸的最佳条件为:乙醇浓度84.82%,时间1.5 h,温度80℃,提取2.83次,异钩藤碱提取率的预测值为81.97%,实际值为79.93%。结论:响应面法对钩藤的温浸条件优化合理可行,为提高异钩藤碱的提取率提供了理论依据。