摘要：为提高铁皮石斛的综合利用率,建立一种绿色高效的铁皮石斛多糖提取方法。本研究以铁皮石斛多糖提取率为指标,通过单因素考察了低共熔溶剂浓度、提取温度及液料比对铁皮石斛多糖提取率的影响,采用响应面设计优化铁皮石斛多糖的提取工艺,并对纯化后的多糖进行结构分析。结果表明:响应面优化后得到最佳工艺为低共熔溶剂(deep eutectic solvent,DES)浓度40%、提取温度80℃、液料比110:1(mL/g),在此条件下实际提取率为33.2%±0.28%,与预测值33.5%接近,多糖的纯度为56.95%±1.2%。多糖经阴离子交换柱及葡聚糖凝胶柱纯化后,纯度可达90.8%,其单糖主要由葡萄糖和甘露糖构成,质量比约为43:37,此外还含有少量的木糖、鼠李糖、核糖等,结构中同时含有α糖苷键和β糖苷键。本研究提供了一种低共熔溶剂提取铁皮石斛多糖的高效绿色提取方案,具有多糖提取率高及绿色的特点,为后续铁皮石斛多糖的开发提供了借鉴。

摘要：为研究铁皮石斛多糖(Dendrobium officinale polysaccharide,DOP)具有免疫活性片段的结构特征及与Toll样受体4(Toll⁃like receptor 4,TLR4)的相互作用机制,基于对TLR4结合腔的亲疏水性分析,将DOP寡糖的分为疏水片段筛选和亲水片段筛选,通过分子对接和分子动力学模拟,分析作用最强的DOP片段的结构特征及与TLR4的相互作用机制。结果表明,找到作用最强的DOP七糖片段,具有与经典底物脂多糖相似的结合模式,其中疏水性四糖片段结合在疏水结合腔,亲水性三糖片段结合在电正性区域。具有潜在免疫活性的铁皮石斛多糖可以由乙酰基修饰的疏水四糖片段和没有乙酰基修饰的亲水三糖片段组成,主要通过氢键和疏水作用与TLR4进行相互作用,发挥免疫活性。

摘要：目的 优化铁皮石斛多糖的提取工艺,初步研究其对小鼠急性肺损伤(ALI)的改善作用。方法 以铁皮石斛为原料,采用超声辅助热水浸渍法提取铁皮石斛多糖;以铁皮石斛多糖提取率为响应值,通过单因素实验和Box-Behnken响应面法优化料液比、提取时间、提取温度。通过脂多糖诱导建立ALI小鼠模型,以醋酸泼尼松(5 mg/kg)为阳性对照,考察低、中、高剂量铁皮石斛多糖(50、100、200 mg/kg)对模型小鼠肺湿/干重比和肺组织病理形态(苏木精-伊红染色、Masson染色)的影响。结果 铁皮石斛多糖的最优提取工艺为料液比1∶25(g/mL),提取时间1 h,提取温度58℃;该工艺所得铁皮石斛多糖的平均提取率为37.75%(RSD=1.12%,n=3),与预测值(38.63%)的相对误差为2.28%。与模型组比较,阳性对照组和铁皮石斛多糖各剂量组小鼠的肺湿/干重比均显著降低(P<0.05或P<0.01),肺组织病理变化(肺泡结构严重破坏,肺泡间隔明显增宽,大量炎症细胞浸润及成纤维细胞增生)均有不同程度缓解。结论 优化的铁皮石斛多糖提取工艺可行,且所得的铁皮石斛多糖对小鼠ALI有一定的改善作用。

摘要：目的:研究铁皮石斛多糖不同分级组分对小鼠免疫调节及肠道健康的影响。方法:利用梯度醇沉法对铁皮石斛精多糖进行相对分子质量的分级处理。以环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠模型,通过灌胃铁皮石斛多糖不同分级组分,比较灌胃前、后小鼠胸腺指数、血清和脾脏细胞因子分泌量的变化,探究铁皮石斛多糖不同分级组分对小鼠的免疫调节作用。同时测定模型组与多糖分级组的粪便含水量、pH值和短链脂肪酸含量水平,研究铁皮石斛多糖分级组分对肠道健康的影响。结果:与模型组相比,DOP组和F50S组均能显著提高小鼠胸腺指数,促进IFN-γ、TNF-α、IL-6的分泌,抑制IgE的分泌,在一定程度上引导免疫类型向Th1型偏移,提高小鼠的免疫功能;并能降低粪便pH,提高粪便含水量和SCFAs含量水平,从而促进肠道健康。结论:铁皮石斛多糖不同分级组分均能有效增强免疫低下小鼠的免疫调节作用,并改善其肠道健康,DOP比各分级组分的作用效果好;各分级组分中,相对分子质量最小的F50S作用效果较其它组分更为明显。

摘要：目的:研究铁皮石斛多糖(Dendrobium officinale polysaccharide,DOP)对2型糖尿病小鼠降糖降脂作用,为铁皮石斛的充分利用提供药理学依据。方法:用四氧嘧啶对小鼠进行腹腔注射(100 mg/kg mb),构建小鼠2型糖尿病模型。将供试小鼠分为6组:DOP高剂量组(450 mg/kg mb)、DOP中剂量组(300 mg/kg m_b)、DOP低剂量组(150 mg/kg mb)、正常对照组、阳性对照组(盐酸二甲双胍250 mg/kg mb)、模型组,连续灌胃4周。对供试小鼠进行血液生化水平(甘油三酯和总胆固醇)、肾功能指标(血清肌酐和尿素氮)以及抗氧化能力检测。结果:1)与模型组小鼠相比,铁皮石斛多糖对2型糖尿病小鼠具有明显的降糖效果,其DOP高剂量组降糖效果极显著(P<0.01)。与模型组小鼠相比,铁皮石斛多糖能够显著提高2型糖尿病小鼠糖耐量(P<0.05),高剂量DOP的作用效果与盐酸二甲双胍基本一致。2)与模型组小鼠相比,DOP能够显著降低2型糖尿病小鼠的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯浓度(P<0.05),显著增加高密度脂蛋白胆固醇浓度(P<0.05),表明DOP能够改善2型糖尿病小鼠的血脂代谢紊乱。3)与模型组小鼠相比,DOP能够显著降低2型糖尿病小鼠血清尿素氮和肌酐浓度(P<0.05),表明DOP能够改善2型糖尿病小鼠的肾脏损伤。4)与模型组小鼠相比,DOP能够显著提高2型糖尿病小鼠胰岛素水平、降低其胰岛素抵抗性。5)与模型组小鼠相比,DOP能够显著提高2型糖尿病小鼠的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活力、过氧化氢酶活力(P<0.05)。结论:铁皮石斛多糖能够显著提高糖尿病小鼠肝脏和胰腺的抗氧化能力,修复肝脏和胰腺氧化损伤,从而提高胰岛素含量和缓解胰岛素抵抗,因此具有降血糖的作用。铁皮石斛多糖也有改善糖尿病小鼠血脂代谢紊乱、改善肾脏损伤的作用。

摘要：建立了一种采用紫外-可见分光光度法测定铁皮石斛多糖含量的方法。采用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛多糖含量,考察了醇沉条件和煮沸时间对铁皮石斛多糖质量浓度的影响。结果表明,最佳醇沉和测定条件:醇沉浓度为体积分数80%乙醇,醇沉时间为16 h,煮沸时间为10 min。葡萄糖的质量在10.85~108.5μg范围内,线性关系良好,相关系数(r)为0.9999。精密度、稳定性、重复性的RSD均小于2.0%,低、高浓度的平均加标回收率分别为98.3%和97.1%,RSD分别为0.86%和0.85%。该方法快速、简单、准确、可靠,可用于测定铁皮石斛多糖的含量,可以作为评价铁皮石斛药材的产品质量标准和为化妆品美妆功能研究提供科学依据。

摘要：目的:优选简便高效的铁皮石斛多糖的提取工艺,考察不同条件下的总多糖得率。方法:采用均匀设计与正交设计联用的方法对铁皮石斛多糖的提取工艺进行优选。结果:优选出来的铁皮石斛最佳提取工艺条件为温度85℃,提取时间3h,液料比20倍时,提取的总多糖得率最高为24.9%。结论:正交设计与均匀设计联用是优选工艺的好方法,本实验所得工艺合理,提取率高,适用于工业生产。

摘要：本文探讨了铁皮石斛多糖提取工艺条件对提取率的影响,采用单因素实验和正交试验设计研究了提取时间、提取温度、料液比等多种因素对铁皮石斛多糖提取率的影响。最终得到提取铁皮石斛多糖的最佳工艺条件为提取时间5h、提取温度70℃、料液比1∶30,该工艺条件下铁皮石斛多糖的提取率为3.55%。

摘要：采用响应面设计优化铁皮石斛多糖的提取纯化工艺,并结合苯酚-硫酸法对多糖含量进行测定。通过单因素试验,分析提取温度、提取时间、液料比和提取次数4个因素对铁皮石斛多糖得率及含量的影响。在此基础上,采用响应面设计优化铁皮石斛多糖的提取工艺,得最优工艺为:提取温度90℃,提取时间2.5 h,液料比60∶1,提取次数3次;在此条件下,铁皮石斛多糖含量的理论预测值为98.63%;对经优化法所得的铁皮石斛多糖成分进行理化分析,得其水分含量为7.39%,灰分含量为3.56%,无机盐含量为1.39%,氨基酸总量为0.67%。该方式所获得的铁皮石斛多糖含量高达85.33%,提取工艺简单便捷,得到的多糖成分稳定,富含多种人体必需氨基酸,为后续铁皮石斛多糖的功能活性研究奠定基础。

摘要：目的:研究尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)在铁皮石斛不同组织中的表达情况,探讨其与石斛多糖累积的关系。方法:根据铁皮石斛原球茎转录组数据中的DoUGPase1序列设计引物,并利用RACE技术克隆该基因;用生信分析软件预测其蛋白结构,并进行系统发育分析;利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术研究该基因在铁皮石斛不同年份,不同组织中的表达。结果:通过RACE技术得到1个3054 bp基因,命名为DoUGPase1,其ORF长1530 bp,编码510个氨基酸残基,与油棕(Elaeis guineensis)和波斯枣(Phoenix dactylifera)有一定的同源性,且DoUGPase1在3年生的植株中相对表达量整体较高(P<0.05)。结论:我们预测在铁皮石斛的生长发育过程中DoUGPase1基因与多糖累积的活跃程度成正比例。