摘要：蜱是动物常见的外寄生虫 ,并且传播多种人和动物的疾病 ,严重危害畜牧业发展和人类健康。为了寻找基因工程疫苗候选抗原基因 ,根据半胱氨酸蛋白酶的保守性氨基酸序列及镰形扇头蜱氨基酸密码子偏好设计引物 ,PCR扩增、测序并分析得到 2个镰形扇头蜱的半胱氨酸蛋白酶基因片段cysA和cysB ,再通过RACE的方法得到全长基因序列。cysA全长 1168bp ,编码 3 3 2个氨基酸 ;cysB全长 1153bp ,编码 3 3 5个氨基酸。经过分析 ,CysA和CysB均与其他蜱种或物种的组织蛋白酶L 样半胱氨酸蛋白酶有高度同源性 ,两者均含有半胱氨酸蛋白酶活性位点处的保守性氨基酸序列 ,因此cysA ,cysB均为镰形扇头蜱两个新的组织蛋白酶L 样半胱氨酸蛋白酶基因。RT PCR分析表明 。

摘要：为了对镰形扇头蜱中的生物活性分子进行相关研究，从中得到有价值的抗蜱候选分子，本试验从已构建的镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库中，随机克隆得到100个EST（expressed sequence tag）序列。其中8号和2号序列带有完整的polyA尾，根据此2序列设计引物，经5′RACE（rapid amplification of cDNA ends）得到2序列的全长基因，分别命名为RhHp1和RhHp2，RhHp1基因全长1823bp，ORF（开放阅读框）为1521bp，编码区从110～1631bp，编码506个氨基酸。RhHp2基因全长1002bp，ORF为848bp，编码区从31～879bp，编码282个氨基酸。经蛋白序列分析，RhHp1基因预期编码的蛋白与GenBank中所登陆的序列同源性均小于20％，RhHp2与其他序列同源性最高可达50．81％。经RT（reverse transcription）-PCR分析，与其他各发育阶段相比，RhHp1基因在镰形扇头蜱卵中表达量较低；RhHp2基因在镰形扇头蜱若蜱中低度表达，在其他各发育阶段表达量较高。结果表明，RhHp1和RhHp2基因为镰形扇头蜱唾液腺中分离出来的2个新基因，其表达量随着蜱的发育阶段而发生改变。此2个新基因所编码蛋白的结构和具体的分子生物学功能有待深入研究。

摘要：为了进行抗蜱及蜱传病疫苗的研究,本试验根据GenBank中的镰形扇头蜱组胺结合蛋白(Rhipicephalus haemaphysaloideshistamine bindingprotein,RhHBP)基因cDNA序列,设计一对特异性引物(内含EcoRI/XhoI酶切位点),经RT-PCR扩增了镰形扇头蜱组胺结合蛋白RhHBP的cD-NA,大小为603 bp,将其克隆到pGEM-Teasy中并测序。在去除编码RhHBP信号肽的核苷酸序列后,将其亚克隆到pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-4T-1-RhHBP,将该重组质粒转化大肠杆菌BL21,经终浓度为1 mmol/L IPTG诱导其表达,表达的融合蛋白大小为49 ku,以包涵体的形式存在。Western Blot分析表明,该蛋白具有良好的免疫原性。

摘要：根据丝氨酸蛋白酶保守性氨基酸序列设计引物,以镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA为模板,经PCR扩增得到SP30基因的保守区,通过5'RACE(rapid amplification of cDNA Ends)和3'RACE技术得到全长基因。将该基因连入原核表达载体pGEX-4T-1,经IPTG诱导纯化得到重组蛋白。以镰形扇头蜱卵、幼蜱、若蜱、成蜱各发育阶段的cDNA为模板进行Real-timePCR实验。结果显示,SP30基因全长1194 bp,开放阅读框长900 bp,编码299个氨基酸,预计蛋白分子质量30 kDa。Real-time PCR分析结果表明,该基因在四个不同的发育阶段均有不同程度的表达。