摘要：目的:设计制备阿糖胞苷-蒙脱石复合物。方法:利用聚乙二醇对钠基蒙脱土进行有机化改性并制备阿糖胞苷-蒙脱石复合物;通过X射线衍射分析(XRD)、傅里叶红外光谱分析(FT-IR)、热重分析(TG-DTG)对制备的复合物进行结构表征;通过HPLC法计算阿糖胞苷游离量,从而计算蒙脱石对阿糖胞苷的载药量。结果:通过(XRD、FT-IR、TG-DTG)结构表征分析可知阿糖胞苷-蒙脱石复合物制备成功,蒙脱石对阿糖胞苷的载药量为:1.42%±0.01%。结论:通过结构表征分析得知阿糖胞苷插入蒙脱石层间;研究结果为制备新型阿糖胞苷-蒙脱石缓释制剂提供参考依据,也为其在药理学的研究提供理论支撑。

摘要：设计并合成了阿糖胞苷卟啉衍生物(AHP),并通过金属插入反应获得了4种金属卟啉衍生物,采用核磁共振、红外光谱、紫外-可见光谱和质谱等手段对化合物的结构进行了表征.光动力抗肿瘤活性实验结果表明,含药浓度为25μmol/L的ZnAHP经光照30 min后对人乳腺癌MCF-7细胞的光动力杀伤率平均达(45.86±8.20)%.

摘要：背景：目前常用的嗅鞘细胞培养方法有差速贴壁法、化学抑制法、抗体亲和吸附法、补体法等,各自均存在优缺点,单一使用某种方法时细胞纯化率较低。目的：拟采用改良Nash差速贴壁＋阿糖胞苷法体外分离纯化大鼠嗅球及嗅黏膜来源的嗅鞘细胞。设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2007-11/2008-05在武汉大学人民医院骨科实验室和消化内科实验室完成。材料：10周龄Sprague-Dauley大鼠10只,由武汉大学人民医院实验动物中心提供,阿糖胞苷由武汉大学人民医院制备。方法：完整取大鼠双侧嗅球及剪取鼻中隔后1/3嗅黏膜,剪碎后胰酶消化,制成单细胞悬液,按1×10^9L^-1密度接种于未包被的25cm^2玻璃培养瓶中,18-20h后将细胞悬液转移至另一未包被的25cm^2玻璃培养瓶中（第1次差速贴壁）,24h后再将细胞悬液转移至经多聚右旋赖氨酸包被的25cm^2塑料培养瓶或经多聚右旋赖氨酸包被的6孔培养板中（第2次差速贴壁）,接种培养48h后半量换液以去除杂细胞。在差速贴壁培养后二三天,加入3.0-5.0pmol/L阿糖胞苷去除残余成纤维细胞。主要观察指标：嗅鞘细胞的形态观察、分裂增殖情况、免疫荧光染色鉴定结果及纯度测定。结果：体外培养24h嗅球源性嗅鞘细胞即可贴壁,而嗅黏膜源性嗅鞘细胞多在培养四五天后贴壁,两种来源的嗅鞘细胞形态相似,以双极或梭形细胞为主,少量为3极及多突起形多级细胞,同时夹杂扁平、煎鸡蛋形细胞。纯化培养10d的嗅鞘细胞,胶质纤维酸性蛋白、神经生长因子受体p75免疫荧光染色及神经生长因子受体p75＋hoechs免疫荧光双染后大部分双极或多极细胞膜、胞体、突起呈阳性,细胞纯度可达90%以上。结论：改良Nash差速贴壁＋阿糖胞苷法可在体外成功分离培养出高纯度的嗅球及嗅黏膜源性嗅鞘细胞,嗅球源性嗅鞘细胞贴壁时间及分裂增殖程度优于嗅黏膜源性嗅鞘细胞。

摘要：目的:制备阿糖胞苷聚氰基丙烯酸正丁酯(Ara-C-PBCA-NP)纳米粒。方法:在单因素考察的基础上,通过正交设计优选处方和制备工艺,并对优化条件下制备的Ara-C-PBCA-NP胶体溶液进行质量评价。结果:制备的Ara-C-PBCA-NP平均粒径为56nm,平均粒径跨度为1.226,载药量为11.77%,包封率为53.38%。结论:所制备的稳定的纳米粒给药系统,为阿糖胞苷的临床应用提供了更广阔的前景。

摘要：肠单羧酸转运蛋白1(MCT1)在全肠段大量表达,主要负责短链脂肪酸的转运,因而是口服前药设计的理想靶点。阿糖胞苷为恶性淋巴瘤和急性白血病的一线用药,但膜渗透性和胃肠道稳定性差,不能口服给药。因此,本研究以肠MCT1为靶点,以丁二酸为转运体识别基团,设计合成了肠MCT1靶向的阿糖胞苷口服酰胺前药,用于提高其口服生物利用度。由于酰胺键良好的稳定性,该前药在pH 1.2和6.8的磷酸盐缓冲液中的降解半衰期达到10 h以上,在pH 7.4磷酸盐缓冲液、血浆和组织匀浆中则被快速降解而释出原型药。Caco-2细胞摄取和细胞转运试验结果表明,该前药的膜渗透性约是阿糖胞苷的9倍,存在H+依赖、温度依赖、MCT1介导的摄取机制。大鼠药动学试验结果显示,该前药口服给药后达峰时间约1.1 h,提示其能快速由肠道吸收入血,口服生物利用度达到32.1%,是原型药的3倍。以上研究表明,肠MCT1可作为口服前药设计的理想靶点。

摘要：目的:基于决策曲线分析血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、表皮生长因子受体(EGFR)水平对急性髓系白血病(AML)患者大剂量阿糖胞苷(HD-AraC)治疗效果的影响。方法:选取2019年1月-2020年6月本院收治的98例AML患者作为研究对象,所有患者均采用HD-AraC治疗,每周1个疗程,共治疗1个疗程。于治疗1个疗程时评估效果分为有效与无效2组,设计基线资料统计表,详细统计2组基线资料,比较2组基线资料及血清TGF-β1、EGFR水平,Logistic回归分析血清TGF-β1、EGFR水平与AML患者HD-AraC治疗效果的关系,绘制ROC曲线及决策曲线分析血清TGF-β1、EGFR水平预测AML患者HD-AraC治疗效果的价值。结果:经1个疗程治疗后,98例患者中完全缓解26例,部分缓解38例,未缓解34例,总有效64例,占比65.31%;对比2组资料后经Logistics回归分析结果显示,治疗前血清EGFR过表达可能是AML患者HD-AraC治疗无效的风险因子(OR>1,P0.70,有一定的预测价值。绘制决策曲线结果显示,在阈值0.15-0.44范围内,联合血清EGFR、TGF-β1水平的预测模型预测AML患者HD-AraC治疗效果的净受益率优于单纯血清EGFR或单纯血清TGF-β1。结论:血清TGF-β1、EGFR水平影响AML患者HD-AraC治疗效果,可增加治疗无效风险,血清TGF-β1、EGFR可用于AML患者HD-AraC治疗无效风险预测,且联合预测净受益率更高。

摘要：背景:外周血干细胞移植成功的首要条件是干细胞的有效动员和采集,选择高效低毒的动员方案,掌握动员和采集时机与动员效果密切相关。目的:探讨米托蒽醌-大剂量阿糖胞苷方案化疗后,单用粒细胞集落刺激因子或粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子合用对恶性血液病和实体瘤患者自体外周血干细胞的动员效果。设计:观察对比实验。单位:徐州医学院附属医院血液科。对象:选择1998-09/2006-12在徐州医学院附属医院血液科收治的42例恶性血液病和实体瘤患者,诊断符合国际白血病分型及世界卫生组织新分类标准。男25例,女17例,年龄7～54岁,平均29岁,体质量(52±18)kg。其中急性髓细胞白血病12例,急性淋巴细胞白血病6例,慢性粒细胞白血病慢性期1例,非霍奇金淋巴瘤15例,霍奇金淋巴瘤4例,多发性骨髓瘤2例,晚期乳癌2例。患者均经常规化疗达到或接近完全缓解,骨髓细胞学检查无肿瘤细胞浸润。心、肺、肝、肾等主要脏器功能正常。动员前化疗疗程平均8次,所有患者均对治疗项目知情同意。方法:患者均采用米托蒽醌10mg/(m2·d)静脉滴注第2～3d后,阿糖胞苷2g/m2静脉滴注第1～2d,1次/12h。当白细胞计数下降至最低点开始回升时,20例患者使用粒细胞集落刺激因子5～7.5μg/(kg·d),连用3～5d,22例患者早6:00给予粒细胞集落刺激因子5～7.5μg/(kg·d),晚6:00给予粒-巨噬细胞集落刺激因子5～7μg/(kg·d)。白细胞计数>2.5×109 L-1,CD34+细胞≥1%时,用CS3000plus血细胞分离机连续2d采集自体外周血干细胞,检测CD34+细胞含量和T淋巴细胞亚群。①单个核细胞与FITC标记的CD34+、CD3和CD8单抗及与CD4PE标记的CD4单抗4℃混合30min,采用流式细胞仪检测CD34+细胞和T细胞亚群,分析5×105个细胞,得出CD3、CD34+细胞含量及CD4/CD8比值。用甲基纤维素法测定粒-巨噬细胞集落形成单位。②观察术后相关不良反应。③针对不同类型疾病给予相应预处理36～48h后回输自体外周血干细胞,并行单个核细胞计数及台盼蓝染色,解冻后检测粒-巨噬细胞集落形成单位和CD34+细胞。主要观察指标:①动员前后CD34+细胞和T细胞亚群变化。②术后相关不良反应。③自体外周血干细胞回输量(单个核细胞计数、粒-巨噬细胞集落形成单位和CD34+细胞数)。结果:纳入患者42例,均进入结果分析。①动员前后CD34+细胞和T细胞亚群变化:患者应用粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子动员后外周血CD34+细胞明显增加[(0.054±0.032)%,(1.82±0.76)%,P0.05)。②外周血干细胞动员相关不良反应:全部病例出现Ⅱ～Ⅲ度脱发,血小板均有不同程度的下降,为(54.43±26.14)×109 L-1,21例患者出现感染性发热(37.8～41.0℃),经抗生素治疗感染均在短期内得到控制。13例患者在白细胞快速上升时出现骨骼疼痛(腰骶部为主)。③自体外周血干细胞回输量:自体外周血干细胞非程控冷冻-80℃保存2.0～6.5个月,细胞回收率(88.7±7.4)%,台盼蓝拒染率(92.1±5.5)%,回输的单个核细胞(5.21±2.44)×108/kg,CD34+细胞(6.89±3.55)×106/kg,粒-巨噬细胞集落形成单位(2.58±2.33)×105/kg。④循环血量每次10～16L(终点分血量均在3个TBV上)。无严重毒副反应。26例接受自体外周血干细胞移植者造血功能均获得满意重建。结论:米托蒽醌-大剂量阿糖胞苷方案化疗后单用粒细胞集落刺激因子及粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子合用均能安全、有效动员自体外周血干细胞,但以合用更为有效。大容量采集是提高干细胞产率,减少采集次数的重要手段。

摘要：目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术沉默同源盒(HOX)A10基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞增殖、凋亡的影响,为白血病的基因治疗提供实验依据。方法设计合成针对HOXA10的特异性短发卡RNA寡核苷酸链,构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10真核表达载体并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞。RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,并转染K562细胞,结果显示该载体能有效降低HOXA10 mRNA表达水平,HOXA10/β-actin灰度比值(ODR)为(38.86±4.49)%;RNAi联合小剂量Ara-C作用于K562细胞后,细胞增殖能力明显下降,细胞增殖抑制率(IR)为(75.58±8.11)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);荧光显微镜可见红色荧光凋亡细胞明显增加,凋亡率显著升高,可达(29.71±1.24)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向HOXA10的RNAi技术联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,有望成为白血病基因治疗的新方案。

摘要：目的探讨利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默hoxa9基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对U937细胞增殖、凋亡的影响。方法设计合成针对hoxa9的特异性siRNA,应用脂质体介导转染U937细胞。利用RT-PCR法、Western blot法分别检测各组细胞hoxa9 mRNA、蛋白的表达;siRNA和(或)小剂量Ara-C分别作用U937细胞后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果靶向hoxa9的siRNA可有效沉默hoxa9的表达,hoxa9 mRNA及蛋白相对水平明显下降。RNAi联合小剂量Ara-C作用于U937细胞后对细胞增殖抑制作用最强,48 h细胞凋亡率显著升高,与其余组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论靶向hoxa9的siRNA联合小剂量Ara-C能显著抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,为研究hoxa9联合化疗治疗白血病的作用机制及应用于临床提供实验依据。

摘要：阿糖胞苷(Ara-c)是常用的抗白血病药物之一,对急性淋巴细胞白血病及急性非淋巴细胞白血病均有良好的疗效[1].近二十年来关于阿糖胞苷抗白血病的给药剂量及临床药理学研究颇为活跃[2],已有大量资料表明[3,4]阿糖胞苷的血药浓度、药物动力学即给药方案的设计对急性白血病的化疗效果有直接影响.为此在治疗期间,对血浆中药物浓度进行监测是必要的,测定Ara-c可采用放射免疫法[5],高效液相色谱法(HPLC)[5,6],离子交换法[7]等,我们建立了Ara-c浓度测定的高效液相色谱法,为监测病人Ara-c的血药浓度提供了一个切实可行的方法。