摘要：【目的】阿维链霉菌可作为异源表达抗生素生物合成基因簇的良好宿主,但是需要优化含有大片段DNA质粒的接合转移效率。【方法】我们选取MgCl2、NaCl、Ca(NO3)2和CaCl2等4种无机盐,在0-200mmol/L浓度范围内分别研究其对大质粒向阿维链霉菌接合转移的影响,再设计完全随机试验筛选最佳条件。【结果】CaCl2对阿维链霉菌接合转移有极明显的促进作用,MgCl2也有一定提高作用。通过完全随机试验筛选出最佳的CaCl2和MgCl2浓度组合,使大质粒的接合转移效率提高11倍。同时,本研究还发现阿维链霉菌异源表达放线紫红素的最适培养基,成功表达放线紫红素。【结论】特定无机盐对阿维链霉菌接合转移效率有明显提高作用,并且能促进放线紫红素在阿维链霉菌中的表达。

摘要：运用统计试验设计和分析方法优化阿维链霉菌XJ-8-115产多拉菌素的最佳发酵培养基。利用Plackett-Burman设计法(PBD)评价了8种原料组分对多拉菌素生产的影响,再采用最陡爬坡法确定培养基组成的最佳区域,最后以3因素5水平的中心组合设计(CCD)为基础,利用响应面法(RSM)获得多拉菌素最大发酵产量的培养基最佳配比。结果表明:8种原料组分中,干酵母粉、MgSO4和NH4Cl对结果有极显著影响。响应面试验得到到最佳培养基为:75g玉米淀粉,18g干酵母粉,1.35gKCl,0.16gMgSO4,1.8gK2HPO4·3H2O,0.012gFeSO4·7H2O,0.045gNa2Mo4·2H2O,0.09gNH4Cl,0.005gCoCl2·6H2O和2gCaCO3。通过该培养基发酵获得的最大多拉菌素产量为103.54g/mL,与原培养基相比,产量提高了1.80倍,为36.93g/mL,与RSM预测值差异仅为2.22%。

摘要：通过优化发酵过程中培养基的组成使得阿维链霉菌的发酵单位及有效组分Bla含量提高。采用单因子试验法及均匀设计试验法分析各种营养成分及其配比对阿维链霉菌Co39-15发酵单位和有效组分Bla含量的影响。获得最佳的种子培养基和发酵培养基配方,发酵单位及有效组分Bla含量比原来的发酵水平分别提高了20%～30%、8%～10%。利用单因子试验法及均匀设计试验法对抗生素的发酵培养基进行优化,是一种快速、效果显著的方法。

摘要：以棉籽饼粉替代酵母粉,采用响应面法优化阿维链霉菌Streptomyces avermitilis生产菌株的工业复合发酵培养基。首先采用Plackett-Burman设计筛选出玉米淀粉、棉籽饼粉和豆粕粉3个重要影响因子,并利用响应面中心组合设计进一步优化,得阿维菌素B1a复合发酵培养基的最佳配方:玉米淀粉14.22%,棉籽饼粉1.19%,豆粕粉2.67%,钼酸钠0.002 2%,氯化钴0.02%,硫酸锰0.000 2%,硫酸铵0.05%。在上述条件下,阿维菌素B1a摇瓶发酵效价为5 235 IU/ml,比优化前(4 580 IU/ml)提高了14.3%。

摘要：目的:转座突变技术是发现新功能基因和获得高产天然产物菌株的一种有效策略。通过理性设计和构建Tn5型转座突变系统,并将其应用于阿维链霉菌,筛选高产阿维菌素的工程菌株。方法:在转座突变载体pUCTN转座插入片段的上游和下游分别引入链霉菌常用的强启动子kasOp*和P21,强化插入位置上游和下游基因的转录表达;在插入片段两端分别添加双向转录终止子T1和T2,有效终止插入序列两端靶基因的转录,引入强启动子和终止子的目的在于增强对转座突变株生理代谢活动的扰动。结果:通过优化供体菌和受体菌的比例,转座效率显著提高。随机选择500株转座突变株进行发酵和阿维菌素产量测试,筛选到3株突变株的阿维菌素产量明显高于出发菌株产量的50%以上。结论:Tn5转座突变系统为研究阿维链霉菌的基因功能和生理代谢提供了有效的分子遗传工具。

摘要：目的设计优化一种化学合成发酵培养基,为阿维菌素产生菌生理生化研究提供基础。方法在单因素实验的基础上运用响应面分析的方法,对9种因素进行Plackett-Burman设计筛选得到3个显著因子,并对其进行最陡爬坡试验和Box-Behnken试验,利用Design-Expert V8.06分析软件进行回归分析得到最优组合。结果优化后化学合成培养基的组成为:葡萄糖12g/L,麦芽糖18g/L,苏氨酸1.98g/L,50%乳酸钠0.5mL/L,K_2HPO_4·3H_2O 0.3g/L,MgSO_4·7H_2O 0.5g/L,NaCl 0.5g/L,FeSO_4·7H_2O0.01g/L,MnSO_4·H_2O 0.015g/L,MOPS 5g/L。结论经验证,该培养基的产素能力比目前的清亮培养基提高了397.4%,并具有透明清亮且产素稳定等特点,为以后阿维链霉菌的理论和生产研究奠定了基础。