摘要：通过分析降血压肽结构与功能的关系,设计并合成5条降血压肽序列.通过活性测定以及体外消化试验,确定P3(六肽)为理想降血压肽.为实现该小肽在大肠杆菌中的表达,经特定酶切位点将其串联为6拷贝的融合多肽,将相应的基因序列克隆至表达载体pGEX-4T-2并转化至宿主菌Escherichia coli BL21中.双酶切、PCR以及测序结果均表明成功构建了重组质粒pGEX-4T-2-ACEIP.

摘要：利用响应面法优化酶解花椒籽蛋白制备降血压肽的工艺条件。采用不同蛋白酶水解花椒籽蛋白,以酶解物对血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率为指标,筛选出制备花椒籽蛋白降血压肽的最佳蛋白酶。在单因素试验基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,考察酶解时间、加酶量、酶解温度和p H值对血管紧张素转换酶抑制率的影响。结果表明:回归模型能较好地反映各因素水平与响应值之间的关系,并获得酶解花椒籽蛋白制备降血压肽的最佳工艺条件为:底物质量浓度3 g/100 m L、酶解时间4.9 h、加酶量10 200 U/g、酶解温度37.4℃、p H 6.9,在此条件下,所得酶解产物的ACE抑制率为68.00%。

摘要：背景：分离纯化生物活性肽的方法主要是酶解法,分离产物为多肽混合物,易受微生物侵染,发生变质,分离过程复杂,产量较低;而采用化学合成方法成本又很高。目的：观察以基因工程法高效表达的降血压肽在不同外界条件下的稳定性和活性,及其在体内的降压效果。设计、时间及地点：对比观察实验,2007-11/2008-04在深圳职业技术学院生物技术实验室完成。材料：10周龄雄性原发性高血压模型Wistar大鼠40只,10周龄雄性正常Wistar大鼠10只。原发性高血压模型大鼠收缩压在180mmHg（1mmHg=0.

摘要：为有效利用鱼鳞制备降血压肽,以罗非鱼鱼鳞为原料,在121℃条件下进行热预处理15 min后,运用响应面分析法优化酶解制备鱼鳞蛋白ACE抑制肽的工艺条件。结果表明,以水解度和ACE抑制率为评价指标,筛选出碱性蛋白酶为最优酶。在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,最终确立最优的酶解工艺参数为:酶解时间2 h、酶解温度56.3℃、pH值8.0,酶底比1.1%,此条件下ACE抑制率理论值为87.95%,实际值为88.26%。最优条件下制得的酶解产物相对分子质量集中在300～3 000 Da之间,水解效果较好。本研究结果对酶解法制备鱼鳞蛋白降血压活性肽具有一定的实践参考价值。

摘要：采用碱性蛋白酶酶解酪蛋白制备降血压肽,分别以水解度和ACE抑制活性为指标设计正交试验,确定最佳的酶解条件。最佳条件下的酶解液用超滤的方法进行分离。结果表明,最佳的酶解条件为:底物浓度15%、温度50℃、pH9.5、加酶量0.15%。该条件下的水解度为23.15%,ACE抑制活性为51.82%。经过超滤后,分子量在3 kDa以下的超滤液ACE抑制活性明显提高,起到良好的分离效果。

摘要：选用蛋白酶B水解牛乳酪蛋白制备降血压肽.以水解度(DH)和血管紧张素转换酶(Angiotensin-Ⅰ converting Enzyme,ACE)抑制率为指标,选用二次正交旋转组合设计对酶底物浓度比(E/S)、水解温度(T)、底物浓度(S)、水解时间(t)四个因素进行了研究,确定了最佳水解条件组合:水解温度43℃、底物浓度:13%、酶底物浓度比:0.5%、水解时间:210min,并对水解度与ACE抑制活性之间的关系进行了探讨.

摘要：以蛋白质含量为88%的核桃蛋白为试验原料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解,采用酶解产物血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率为检测指标。考察酶解温度、p H值、加酶量以及底物浓度这4个因素对酶解产物ACE抑制率的影响,通过响应面优化试验,重复3次验证性试验,最后确定酶解的最佳工艺条件酶解温度、p H值、加酶量、底物浓度分别为:55℃、9.0、7 300 U/g、2.7%,酶解物的ACE抑制率平均可达60.23%。经超滤分离,得到小于3 k Da分子量的核桃降压肽,IC50值最低为0.389 3 mg/m L,其ACE抑制活性最高。

摘要：目的:以酪蛋白为原料,酶解法制备降血压肽,优化工艺。方法:采用5种不同蛋白酶水解酪蛋白,根据水解产物的血管紧张素转化酶(ACE)体外抑制活性选择蛋白酶。以酶用量、酶解时间、底物浓度3因素作为研究对象,以可溶性蛋白产量、ACE体外抑制活性两参数为评价指标,通过Box-Behnken响应面分析法优化水解工艺。结果:木瓜蛋白酶水解酪蛋白的产物活性最高,因此作为工艺优化用酶。响应面分析法得到的最优工艺条件为:酶用量0.032 g,酶解时间4.53 h,底物浓度0.70%,可溶性蛋白产量1283.71 mg、ACE抑制率为87.23%。结论:Box-Behnken设计可有效优化木瓜蛋白酶水解酪蛋白制备降血压肽工艺,所得工艺稳定可靠。

摘要：目的降血压肽(antihypertensive peptide,AP)是一类能降低人体血压的小分子肽,是血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin convering enzyme inhibitor,ACEI),可通过抑制体内血管紧张素Ⅱ的生成达到降低血压的目的。AP通常含有少数几个氨基酸残基,难以直接表达,因此文中设计含多种降压活性肽段的AP前体(antihypertensive peptide precursor,APP),构建原核表达载体,并在所构建的基因工程菌进行表达。方法筛选多种已报道的具有高体内降压活性的AP,经胃肠消化酶酶切位点串联成APP。基于大肠埃希菌偏爱密码子,人工合成相应的多肽基因(app),PCR扩增,克隆至表达载体pET-22b,转化***21感受态细胞。重组质粒经双酶切和DNA测序鉴定,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(sopropylβ-D-1-thiogalactopyr-anoside,IPTG)诱导表达重组APP。结果 APP基因正确克隆至表达载体pET-22b中。诱导表达产物经SDS-PAGE分析,显示在相对分子质量11000处出现条带,与预期的重组APP大小相符。结论人工设计的APP在大肠埃希菌中获得成功表达,为AP的工业化制备打下基础。

摘要：通过对降血压肽结构和功能的分析,设计合成了一条小肽VPVLPK。通过测定其对ACE酶的抑制活性,发现此肽具有很好的降血压活性IC50为4.2μmol/L。根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成此肽的6拷贝片段,将其克隆至表达载体pET-15b并转化到宿主菌*** BL21(DE3)中。筛选阳性克隆,通过双酶切、PCR及测序表明,本研究已成功构建出重组降血压肽质粒pET-15b-ACEIP的表达系统。IPTG诱导表达后的菌体通过Tricne-SDS-PAGE小分子多肽电泳检测在5.8～7.8kDa之间出现目的蛋白条带,这与理论蛋白分子量6.2kDa相符,且目的蛋白主要存在于超声破碎的上清液中。上清液用胰蛋白酶酶切后,通过HPLC鉴定证实为目的多肽,且多肽的含量达130mg/L。