摘要：目的 建立抗乳腺癌候选药物的分子描述符与该药物拮抗雌激素受体α(ERα)活性的定量构效关系(QSAR)预测模型,预测具有更好拮抗ERα活性的新药物分子或指导已有候选药物的结构优化。方法 使用某药物企业提供的乳腺癌ERα拮抗剂数据,首先通过改进的随机森林对化合物的分子结构描述符进行变量选择,选取前20个对生物活性具有显著影响的分子描述符;然后利用支持向量回归构建20个分子描述符对药物拮抗ERα活性的QSAR模型,再采用差分进化算法来优化模型的超参数。结果 数据经随机森林进行变量选择后从729个变量变为20个变量;对于药物拮抗ERα活性的基于支持向量回归的QSAR模型的拟合优度(R^(2))为0.7407,均方误差(MSE)为0.7034;而经过差分进化算法优化的QSAR模型对于药物拮抗ERα活性的R^(2)为0.935,MSE为0.1762。通过R^(2)和MSE的检验,优化后的模型具有较好的稳健性与较高的预测精度。结论 通过建立化合物分子描述符与其拮抗ERα活性的QSAR模型,找到对乳腺癌治疗药物的药物活性有重要影响的描述符,可用来指导乳腺癌新型治疗药物的设计。

摘要：目的构建雌激素受体α亚基（ERα）下调的人成骨样细胞模型。方法采用计算机辅助设计并合成ERα特异性小干扰RNA（siRNA）前体基因后，定向克隆人pSilencer4．1-CMV质粒中，构建重组的ERα siRNA表达载体并测序鉴定。由脂质体介导重组质粒稳定转染人成骨样细胞株MG63，潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测ERα基因在人成骨样细胞株MG63内的表达，抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法（ABC）分析ERα蛋白在人成骨样细胞株MG63内的表达与定位。MTT法测ERα基因被特异性下调后对MG63细胞生长的影响。流式细胞术分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63细胞生长周期的影响。采用改良Gomori氏钙钴法分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63表达碱性磷酸酶的影响。结果构建表达ERα siRNA的重组真核表达载体，并成功地下调了人成骨样细胞株MG63的ERα亚基基因，其中MG63细胞的G1期为68．6％，G2期为17．6％，S期为13．8％；ERα siRNA MG63细胞的G1期为68.6％，G2期为16．8％，s期为14．6％。而ERα siRNA下调人成骨样细胞株MG63的ERα亚基对细胞的生长特性无明显影响。结论成功地构建了ERα下调的人成骨样细胞模型，该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料。

摘要：目的:构建特异抑制雌激素受体α(ERα)基因的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响。方法:以人的ERα核酸序列为靶标,根据sh RNA设计原则设计并化学合成特异的sh RNA序列,经退火处理后与p SIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DH5α后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和q RT-PCR检测ERα在m RNA及蛋白水平上的变化,流式细胞术检测敲低ERα能否影响MCF7乳腺癌干细胞的含量。结果:经测序分析表明目标sh RNA序列成功插入载体,q RT-PCR检测稳定克隆,发现该sh RNA能有效抑制目的基因的m RNA转录水平,同时Western印迹检测发现内源性ERα量明显下降;流式细胞术检测发现ERα敲低的MCF7稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制。结论:设计并构建的抑制ERα的sh RNA能够有效抑制ERα的表达,并下调MCF7细胞中乳腺癌干细胞的含量,为研究ERα在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础。

摘要：目的构建雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,探讨其对根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)体外成牙/成骨向分化的影响。方法根据shRNA设计原则,合成用于体内干扰ERα的两条shRNA序列,重组入慢病毒载体PLKO.1。将PLKO.1对照组与ERα-shRNA(sh ERα-1和sh ERα-2)实验组分别感染SCAPs,western blot检测ERα的表达及其对SCAPs成牙/成骨向分化的影响。结果测序结果证实重组质粒构建成功;体外实验表明,SCAPs转染ERα-shRNA后ERα蛋白表达水平降低,其中sh ERα-2组对ERα的下调作用更明显,两组ERα-shRNA中核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2,RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达均有不同程度下调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论慢病毒介导的ERα-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并显著影响了根尖牙乳头干细胞的成牙/成骨向分化。

摘要：目的：：评价雌激素受体α( estrogen receptor α, ERα)基因XbaⅠ酶切片段多态性( XbaⅠ多态性)、膳食大豆摄入与乳腺癌患病风险的关系。方法：采用病例对照研究设计,序贯收集病例对照各291例。采用问卷调查收集乳腺癌常见危险因素信息；采用频次调查及单次摄入量调查,收集膳食大豆类食物摄入情况,并转换为大豆异黄酮日摄入量。采用限制性片段长度多态性技术,检测XbaⅠ(rs9340799)A→G(x→X)基因突变。采用多因素Logistic回归分析XbaⅠ多态性、膳食大豆摄入的主效应和交互效应,并计算相乘交互系数。采用delta原理计算相加交互系数及其可信区间。结果：在总人群及绝经前后亚组中,携带X突变等位基因与乳腺癌患病风险无关( Xx vs. xx：OR=0.61~0.82；XX vs. xx：OR=0.60~3.62； Xx+XX vs. xx： OR=0.61~0.92,95%CI均包括1)。膳食大豆高摄入对乳腺癌具有保护作用(总人群：OR=0.64,95%CI：0.42~0.97；绝经后：OR=0.40,95%CI：0．19~0.81)。总人群中,携带X等位基因且膳食大豆高摄入进一步降低乳腺癌风险( OR=0.47,95%CI：0.25~0．89)。两者相乘交互系数IOR=1.15,95%CI：0.49~2.76；相加交互系数RERI=0.19,95%CI：-0.35~0.73；API=0.41,95%CI：-0.75~1.57；S=0.73,95%CI：0.34~1.59。结论：膳食大豆摄入可能会降低乳腺癌风险,但ERα基因XbaⅠ酶切片段多态性位点X等位基因与膳食大豆高摄入之间是否存在交互作用尚需进一步探讨。

摘要：目的建立适合富含GC区SNP分型的序列特异性PCR方法,分析子宫内膜癌特定ERα Exon3位点C729T多态性基因分型。方法选择22例子宫内膜癌患者与42例良性病患者为研究对象。建立富含GC区序列特异性PCR(SS-PCR)。将两对引物分别进行PCR扩增,所设计的两条特异性引物即内引物分别与DNA 双链的两条单链相同,其3′端正好与SNP位点重合,由引物的3′端控制着引物的延伸反应,根据延伸产物的条带确定SNP类型;并通过在引物的3′端区域倒数第3位引入一个人为不匹配碱基来提高延伸反应的特异性。应用该方法鉴别Exon3 SNP位点C729T基因型,并通过直接测序法验证。结果建立的序列特异性PCR方法适合富含GC区SNP分型,能够准确分析子宫内膜癌的特定ERα Exon3位点C729T多态性基因分型。结论富含GC区SNP分型的序列特异性PCR方法,可以用于子宫内膜癌的特定ERα Exon3位点C729T多态性基因分型。

摘要：目的观察ERα和ERβ调控前体成骨细胞增殖和分化中的相互作用及当ERα表达降低时,ERβ的激活能否通过抑制SOST信号传递补偿ERα部分功能调控成细胞增殖。方法利用RNA干扰技术,以小鼠前体成骨细胞株MC3T3-E1为对象,采用随机分层设计的对照研究,将细胞随机分层设计分组为4个组,根据研究需要再将相关组再进一步分为7个亚组,进行相关干预处理。检测各组细胞周期、MTT法绘制细胞生长曲线、检测SOST、OPG和Run X2等细胞因子的表达。应用SPSS16.0进行统计分析各组间差异,显著性差异定为P0.05。同时沉默ERα和ERβ(E组),细胞增殖明显减少,SOST基因表达反而增强,但是OPG和Run X2的表达相对于空白对照组显著减弱,与空白对照组和B组比较,有显著性差异,P<0.05。沉默ERα表达而保持ERβ正常表达(B组),成骨细胞增殖能力明显减弱,SOST基因表达减弱,OPG和Run X2的表达相对于空白对照组明显减弱,和空白对照组比较差异有显著性P<0.05。相反,沉默ERα表达,但应用ERβ激动剂使ERβ过表达(A组),与B组和E组比较,细胞增殖能力反而明显增强,但是SOST基因表达显著降低,OPG和Run X2的表达反而升高,有显著性差异,P<0.05。在E组细胞的培养液中加入SOST抗体(G组),和E组比较,OPG和Run X2蛋白表达明显增强,两组间差异有显著性,P<0.05;这一结果与A组中应用ERβ激动剂有相似作用。结论 ERβ对ERα调控成骨细胞增殖过程中起着平衡作用,当ERα正常表达或活性增高时,ERβ抵抗ERα在骨形成中的刺激作用;当ERα活性减弱或丧失后,ERβ的激活补偿ERα刺激成骨细胞的增殖和分化,并且这一过程是通过ERβ抑制SOST表达而增强成骨细胞增殖相关细胞因子OPG和Run X2等而独立发挥作用。

摘要：目的:探讨顺铂治疗的卵巢癌中铂抵抗与雌激素受体(ERα)及17β-雌二醇(E2)之间的关系。方法:以卵巢癌细胞系Caov-3和Ovcar-3作为研究模型,分别给予不同药物处理,并设计ERα-siRNA对ERα进行下调,研究在不同处理方式下卵巢癌细胞的增殖及凋亡水平,同时分析顺铂对ERα磷酸化、蛋白激酶B(Akt)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的调节。结果:在卵巢癌细胞中,E2通过ERα促进细胞增殖,并降低卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;ER拮抗剂ICI 182780(ICI)可以增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性;顺铂通过激活ERK诱导ERα的磷酸化,其磷酸化位点为丝氨酸118;下调ERα后,E2对顺铂细胞毒性的拮抗作用降低,且经E2处理后,卵巢癌细胞的抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,细胞的凋亡降低。结论:卵巢癌中,ERα在顺铂抵抗中扮演重要角色,E2通过诱导ERα激活并降低凋亡,进而降低顺铂的细胞毒性。因此在铂抗性卵巢癌的治疗中,ERα可能是一个潜在的治疗靶标。

摘要：目的:建立CRISPR/Cas9系统用于敲除人源雌激素受体α(ERα)基因(ESR1),并利用此细胞模型初步检测ESR1基因对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:设计一个靶向人源ESR1基因第2外显子的单向导RNA(sg RNA),分别克隆表达载体后,通过慢病毒转入人乳腺癌细胞株MCF-7,Western印迹检测MCF-7中ESR1基因的敲除效果,通过Transwell、反向侵袭试验观察ESR1基因敲除后对细胞侵袭能力的影响。结果:测序结果显示靶向ESR1基因CRISPR/Cas9重组质粒构建成功;Western印迹显示Cas9-ERα组的MCF-7细胞内ERα表达水平较对照组显著降低;Tanswell、反向侵袭试验证实ESR1基因敲除能够促进乳腺癌细胞的侵袭能力。结论:通过CRISPR/Cas9系统获得了靶向ESR1基因的重组质粒,构建的重组质粒能有效敲除ESR1基因;ERα能够抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。

摘要：目的构建蛋白质精氨酸甲基转移酶2(PRMT2)基因的miRNA真核表达栽体,鉴定其转染乳腺癌MCF7细胞株后的生物活性。方法根据PRMT2基因序列设计合成4对pre-miRNA片段,定向克隆到pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上,采用菌落的PCR和测序分析鉴定插入序列的完整性;并将重组载体转染至MCF7细胞株中,采用Westen b1ot方法鉴定重组载体转染MCF7细胞后对PRMT2蛋白表达的干扰效果以确定其生物活性。结果构建的重组体插入片段的碱基序列完全正确,并且重组体瞬时定转染MCF7细胞后成功干扰PRMT2的表达。结论成功构建了靶向PRMT2基因的pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体,且在瞬时转染MCF7细胞后能下调PRMT2的表达。