摘要：目的探讨雪旺细胞与细菌纤维素体外共培养时的生物相容性,为细菌纤维素制备成组织工程化神经提供实验依据。方法将背根神经节与细菌纤维素膜体外共培养,分别在培养的第1、2、5天通过扫描电镜和光镜观察雪旺细胞的形态及增殖、迁移情况,免疫细胞化学染色检测S-100蛋白表达情况;将坐骨神经来源的纯化雪旺细胞在细菌纤维素浸出液中培养,分别在24、48、72h采用倒置显微镜和免疫细胞化学染色观察雪旺细胞形态及S-100蛋白的表达情况,并通过MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期来综合评价雪旺细胞与细菌纤维素的生物相容性。结果雪旺细胞能在细菌纤维素膜表面正常生长、迁移;与普通培养基相比,细菌纤维素浸出液对雪旺细胞的生长、增殖及S-100蛋白的表达无明显影响。结论雪旺细胞能够在细菌纤维素膜表面及细菌纤维素浸出液中良好生长,体外与细菌纤维素具有较好的生物相容性。

摘要：目的 探讨microRNA-155(miR-155)/Nrf2对雪旺细胞增殖和迁移的影响及作用机制,为坐骨神经慢性卡压损伤等临床诊断和治疗策略提供科学依据。方法 将大鼠雪旺细胞(RSC96)作为研究对象,转染miR-155 mimics、miR-155 inhibitor、si-Nrf2及其阴性对照质粒(miR-NC、inhibitor NC、si-NC)。为验证miR-155过表达/抑制质粒转染效果,探究miR-155对雪旺细胞增殖、迁移的影响,将细胞分为inhibitor NC组(细胞转染inhibitor NC质粒)、miR-155 inhibitor组(细胞转染miR-155 inhibitor质粒)、miR-NC组(细胞转染miR-NC质粒)、miR-155 mimics组(细胞转染miR-155 mimics质粒)。为了验证Nrf2沉默效果,将细胞分为si-NC组(细胞转染si-NC质粒)、si-Nrf2(1)组[细胞转染si-Nrf2(1)质粒]、si-Nrf2(2)组[细胞转染si-Nrf2(2)质粒]。为证实靶向Nrf2可实现miR-155对细胞增殖、迁移的影响和Nrf2、Ngf、Laminin mRNA相对表达量的调控作用,拟抑制miR-155表达的同时选取Nrf2沉默效果较好的质粒(si-Nrf2)转染细胞行挽救实验,探讨miR-155的作用是否会部分逆转,将细胞分为miR-155 inhibitor+si-NC组(细胞转染miR-155 inhibitor和si-NC质粒)、miR-155 inhibitor+si-Nrf2组(细胞转染miR-155 inhibitor和si-Nrf2质粒)。通过CCK-8法检测miR-155对细胞增殖的影响,Transwell实验检测细胞迁移情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-155、神经生长因子(Ngf)、层粘连蛋白(Laminin)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的基因水平,Western blotting检测Nrf2蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-155与Nrf2的结合关系。结果 miR-155 inhibitor组miR-155相对表达量较inhibitor NC组降低(P<0.05),miR-155 mimics组较miR-NC组升高(P<0.05)。inhibitor NC组、miR-155 inhibitor组、miR-NC组、miR-155 mimics组0 h、24 h、48 h、72 h的吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果显示:(1)不同时间点的细胞增殖有差异(P <0.05);(2)各组细胞增殖有差异(P <0.05);(3)细胞增殖的变化趋势有差异(P <0.05)。miR-155 inhibitor组细胞迁移数较inhibitor NC组减少(P <0.05),miR-155 mimics组较miR-NC组增加(P <0.05)。miR-155 inhibitor组Ngf、Laminin mRNA相对表达量较inhibitor NC组高(P <0.05),miR-155 mimics组较miR-NC组低(P <0.05)。miR-155 inhibitor组Nrf2 mRNA和蛋白相对表达量较inhibitor NC组升高(P <0.05),miR-155 mimics组较miR-NC组降低(P <0.05)。miR-155 inhibitor野生型Nrf2细胞荧光素酶活性较inhibitor NC组升高(P <0.05),miR-155 mimics组较miR-NC组降低(P <0.05)。si-Nrf2(1)组和si-Nrf2(2)组沉默效果验证实验中Nrf2 mRNA相对表达量较si-NC组降低(P <0.05),且si-Nrf2(2)组效果更好。miR-155 inhibitor组挽救实验中Nrf2 mRNA相对表达量较inhibitor NC组高(P<0.05),miR-155 inhibitor+si-Nrf2组较miR-155 inhibitor+si-NC组低(P<0.05)。miR-155 inhibitor组挽救实验中细胞吸光度值较inhibitor NC组高(P <0.05),miR-155 inhibitor+si-Nrf2组较miR-155 inhibitor+si-NC组低(P <0.05)。miR-155 inhibitor组挽救实验中细胞迁移数量较inhibitor NC组增加(P <0.05),miR-155 inhibitor+si-Nrf2组较miR-155 inhibitor+si-NC组减少(P <0.05)。miR-155 inhibitor组挽救实验中Ngf、Lamini

摘要：目的构建针对大鼠neuritin基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)表达载体,并研究该载体对neuritin基因表达的沉默效应及雪旺细胞生存的影响。方法设计并合成neuritin靶向siRNA序列,连接pGCSIL-GFP慢病毒表达载体后,将neuritin基因干扰质粒和重组表达质粒共转染入293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞,分为空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)和干扰组(C组)。RT-qPCR、Western blot及Annexin V/PI方法分别检测细胞neuritinmRNA、蛋白表达及细胞凋亡情况。结果与A、B组相比,C组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达水平降低,而细胞凋亡明显增加(P<0.01或P<0.05)。结论成功构建neuritin基因shRNA慢病毒表达载体。其转染的雪旺细胞neuritin基因表达受抑制,并导致细胞凋亡增加。

摘要：目的探讨miR-124在大鼠坐骨神经损伤后的表达及对雪旺细胞增殖与迁移的影响。方法建立大鼠坐骨神经损伤模型,实时PCR方法检测坐骨神经损伤后0 d、1 d、3 d、7 d神经近侧断端miR-124的表达水平。设计合成miR-124模拟物,转染雪旺细胞;MTT实验检测过表达miR-124对雪旺细胞增殖的影响;Transwell实验检测过表达miR-124对雪旺细胞迁移能力的影响。结果坐骨神经损伤后,与0d相比,miR-124在1 d、3 d、7 d的表达水平均明显增加(P<0.01)。转染miR-124模拟物能够显著上调雪旺细胞miR-124的表达水平,促进雪旺细胞增殖与迁移(P<0.01)。结论miR-124在坐骨神经损伤后表达水平逐渐升高,可能参与坐骨神经损伤后神经再生过程。

摘要：目的:建立体外的背根神经节(DRG)—雪旺细胞(SCs)—电刺激模型,为研究电刺激促周围神经成髓鞘机制提供基础。方法:以函数发生器和电刺激小室构建电刺激细胞培养系统,DRG/SCs共培养24 h后分为对照(Ctrl)组和电刺激(ES)组。ES组给予矩形波电刺激,6 Vp-p,10 Hz,1 h/d,7 d。Ctrl组无电刺激。利用CCK8观测电刺激对细胞毒性的影响,利用髓磷脂碱性蛋白(MBP)免疫荧光检测电刺激对DRG/SCs髓鞘化的影响。结果:CCK8细胞增殖毒性实验显示,ES组光密度值略高于Ctrl组,但两组之间无统计学意义。免疫荧光检测结果显示ES组MBP的荧光强度明显高于Ctrl组(P<0.01)。结论:本文设计的电刺激细胞培养系统对神经细胞安全无毒,连续7 d的电刺激可提高神经髓鞘化率。

摘要：目的介绍人工神经预构的物理材料、化学基质及生物种子细胞等方面的进展。方法广泛查阅近年相关研究文献,并重点讨论人工神经预构在物理材料、化学基质及生物种子细胞等方面的成果和目前存在的问题。结果聚乳酸、聚羟基乙酸的聚合物及其复合物、透明质酸和戊二醛的聚合物、聚氯乙酸、聚丙烯的聚合物,均是生物相容性良好且可降解的人工神经材料;人工神经管的多腔化和神经管道上孔隙率的设计有益于神经再生;激活的雪旺细胞是人工神经良好的种子细胞;合适的化学基质如层粘蛋白和藻胶可促进神经的再生。结论只有在神经再生的机制和人工神经的物理材料、化学基质和生物种子细胞等方面的研究均取得突破性进展时,理想的人工神经才有可能最终构制成功。