摘要：目的：建立一个含扩增内对照（IAC）的三重TaqMan real-time PCR体系，以检测霍乱毒素基因ctxA和肠产毒性大肠埃希菌的不耐热肠毒素基因elt。方法针对ctxA、elt和IAC设计引物和探针，进行灵敏性和特异性分析，评价三重反应之间的互相影响。结果该检测体系灵敏度为ctxA每个反应94拷贝，elt每个反应79拷贝，扩增效率分别为94.7%与98.1%。ctxA与elt拷贝数比例为1∶1～1∶10时，二者均能良好扩增；elt或ctxA的量是IAC的100倍以上时，IAC扩增受到抑制。结论该检测体系具有良好的灵敏性和特异性，可以用于腹泻粪便中感染病原菌的检测，其中内对照检测可以提示粪便样本中是否存在PCR抑制因子。

摘要：霍乱肠毒素（CT）是霍乱弧菌重要的毒力因子，内含A和B两个亚单位。A亚单位（CTA）为毒性亚基，B亚单位（CTB）不具毒性。CTB因其独特的生理功能已成为重要的佐剂之一，近年来备受各国学者重视。深入探究CTB的免疫调节机制有助于更好地设计疫苗并优化其效果，此文将对CTB作为免疫佐剂在疫苗研究中的进展进行综述。

摘要：目的应用多重聚合酶链反应(PCR)检测方法和测序研究近5年广州地区分离的霍乱弧菌的4种致病相关基因的携带情况及霍乱肠毒素基因ctxA的变异情况。方法针对霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)、毒素共调菌毛亚单位A基因(tcpA)设计引物,将多重PCR方法应用于广州地区分离的276株霍乱弧菌的致病相关基因的检测。对ctxA基因的PCR扩增产物进行核苷酸序列测定,探讨ctxA扩增产物的同源性。结果近5年广州地区分离的276株霍乱弧菌中,人源株中93．9％为致病相关基因A型(ctxA+tcpA+ace+zot+型)菌,其余6．1％为致病相关基因C型(ctxA-tcpA-ace-zot-型)菌,临床分离的致病相关基因A型菌分离自轻、中、重型病例和带菌者,其中有68．5％分离自轻型病例,21．9％分离自带菌者,临床分离的致病相关基因C型菌中有63．6％分离自轻型病例,36．4％分离自带菌者,C型菌引起带菌者的比例高于A型菌;78株环境分离株中9．0％为致病相关基因A型菌,35．9％为致病相关基因B型(ctxA-tcpA- ace+zot+型)菌,55．1％为致病相关基因C型菌。霍乱肠毒素基因ctxA变异较小。结论多重PCR方法揭示了广州地区霍乱弧菌致病相关基因模式的多态性,为深入研究人源和环境来源霍乱菌株致病相关基因的演化提供了有效手段,并对本地区霍乱的预防、控制和预警具有重要的指导意义。

摘要：目的研究建立可同时检测产毒型O1群及O139群霍乱弧菌的实时荧光三重TaqManPCR快速检测方法。方法根据O1群和O139群霍乱弧菌主基因组O抗原编码基因的特异性序列rfb-O1和rfb-O139，以及霍乱弧菌肠毒素A亚基的编码基因ctxA序列设计引物及探针，利用TaqMan标记探针和便携式SmartcyclerII实时荧光PCR检测平台探讨该三重检测方法的检测敏感性，并用19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌评价了该检测方法的特异性。结果实时荧光三重TaqManPCR快速检测方法对01群及0139群霍乱弧菌的检测灵敏度均为每反应体系1．0×10^2拷贝，线性检测范围为每反应体系1．0×10^2～1．0×10^2拷贝；对01群霍乱弧菌基因组DNA的检测灵敏度为每反应体系1．0×10～pg，对0139群霍乱弧菌基因组DNA的检测灵敏度为每反应1pg，该检测体系在检测19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时不存在非特异性扩增；整个反应在2h内完成。结论本研究建立的实时荧光三重TaqManPCR检测方法可作为鉴别产毒型O1群及O139群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段，也可同时检测相应霍乱弧菌产生霍乱毒素的能力。

摘要：背景:近年的研究显示中枢神经受损后在适宜的条件下如提高神经元内cAMP水平受损神经元的突起可以再生,但其确切的机制仍不清楚。目的:探讨蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂wortman-nin对霍乱毒素促进成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜神经节细胞再生的影响。设计:随机对照动物实验。单位:广州医学院组胚教研室和中山医科大学组胚教研室。材料:实验于2000-01/2001-12在广州医学院和中山医科大学完成。实验动物选择健康成年雄性金黄地鼠25只。随机分为5组,手术模型组;实验对照组;霍乱毒素组;霍乱毒素+蛋白激酶A抑制剂组;霍乱毒素+PI3-羟基激酶抑制剂组,每组5只。方法:取自体坐骨神经2cm,剥去近端的神经外膜,接于视神经断端(近侧端),明胶海绵封闭窗口,坐骨神经另一端置颅骨外缝合固定于颅顶肌肉上。手术模型组视神经近侧残端对接一段自体坐骨神经。实验对照组在对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素溶剂Na2EDTA/NaCl;霍乱毒素组:对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素(1000pg/眼);霍乱毒素+蛋白激酶A抑制剂组:手术前30min玻璃体内注射3μL蛋白激酶A抑制剂H-89(60μmol/L),其余同霍乱毒素组;霍乱毒素+PI3-羟基激酶抑制剂组手术前30min玻璃体内注射3μLPI3-羟基激酶抑制剂wortmannin(1μmol/L),其余同霍乱毒素组。各组动物术后存活4周。术后每隔5天重复给药,蛋白激酶A抑制剂H89及PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin与霍乱毒素CTx之间相隔30min注射,共4次。于取材前3d,将沾有30g/L粒蓝的明胶海绵放置在视神经断端,逆行标记再生的视网膜神经节细胞。荧光显微镜下观察,记录视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。主要观察指标:各组视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。结果:手术模型组及实验对照组有极少数视网膜神经节细胞再生(2.6±0.87,2.4±0.95),霍乱毒素组明显高出对照组和实验对照组[(43.2±1.36),q=73.294及73.655,P0.05];显著低于霍乱毒素组,差异有显著性(q=72.211,P<0.001)。霍乱毒素+PI3-羟基激酶抑制剂组视网膜神经节细胞平均再生数(9.6±1.85)均高于手术模型组及实验对照组(q=12.637及12.998,P<0.05);明显低于霍乱毒素组(q=60.657,P<0.001)。结论:蛋白激酶A抑制剂H-89和PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin可抑制霍乱毒素对视神经远端切断后视网膜神经节细胞轴突再生的促进作用。

摘要：目的建立针对O1群霍乱弧菌的高敏感、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系。方法根据O1群霍乱弧菌主基因组O抗原编码基因rfb-O1和霍乱肠毒素的A亚基编码基因ctxA的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用便携式SmartcyclerⅡ实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的敏感性,用19种其他肠道致病菌及院内感染常见致病菌评价该检测体系的特异性。结果实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应快速检测体系对O1群霍乱弧菌的检测敏感度为1.0×102拷贝每反应体系;对O1群霍乱弧菌基因组DNA的检测敏感度为1.0×10–1pg每反应体系;该检测体系在检测19种其他肠道致病菌或院内感染中的常见致病菌时不存在非特异性扩增;整个反应在2h内完成。结论本研究建立的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应检测体系可作为产毒型O1群霍乱弧菌特异、敏感、快速的检测手段,也可同时检测O1群霍乱弧菌产生霍乱肠毒素的能力。