摘要：目的建立并优化青天葵样品总DNA提取方法及随机扩增多态性DNA(RAPD)反应。方法采用改进的高盐低pH法提取青天葵鲜叶和药材样品,通过正交设计和均匀设计,改变反应体系和扩增程序优化随机扩增多态性DNA。结果使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA,药材叶片含杂质较多,但都能用于RAPD。反应体系为:缓冲液2.0μ1,0.5μl dNTP(各2.5 mmol.L-1),0.8μlMg2+(25 mmol.L-1),0.5μl引物(20 pmol.μl-1),0.2μlTaq酶(5U.μ1-1),1μl DNA(50 ng),1μl BSA(20 ***-1),加双倍蒸馏水至20μl。扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,40℃退火30 s,72℃延伸60 s,40个循环;72℃延伸5 min。结论建立并优化了的青天葵样品总DNA提取方法及RAPD反应体系。

摘要：目的用超低温方法保存青天葵组培物。方法采用单因子比较法、均匀设计法考察生长周龄、冷冻保护剂、预培养时间、降温方式、化冻方式等因素对青天葵组培物超低温保存后细胞生活力的影响。结果青天葵组培物较佳的超低温保存程序为:5周龄的组培物,在4℃进行低温锻炼12 d,以12.5%DMSO+0.25%LH为冷冻保护剂,在4℃静置处理30 m in,然后在-18℃,停留1 h后投入液氮中保存,材料取出后,在20℃化冻,无菌洗涤后,再接种,组培物能够存活并继续生长。结论超低温保存方式可以成功保存青天葵组培物种质资源。

摘要：目的:建立适合青天葵遗传差异分析的简单重复序列区间(ISSR)-聚合酶链式(PCR)反应体系。方法:采用正交试验设计对影响青天葵ISSR-PCR反应体系的5种因素(dNTP、模板DNA、引物、Mg2+和Taq DNA聚合酶)4个水平进行优化,并结合新复极差法,对试验中各单因素进行分析。结果:确立了青天葵最佳反应体系,即在20μL的总反应体积中含有10×PCR buffer 2μL,dNTP 225μmol·L-1,Mg2+2.5 mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.0 U,模板DNA60 ng;从100条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。结论:建立的青天葵ISSR-PCR反应体系,经过24份青天葵样品检验,得出该体系稳定可靠,可用于青天葵遗传差异分析。

摘要：目的:优选出青天葵提取液最佳脱色工艺。方法:以青天葵中提取液的氨基酸损失率和脱色率为考察指标,在对pH、活性炭用量、脱色温度及脱色时间进行单因素考察的基础上,采用正交试验设计对工艺参数进行优选,并进行验证试验。结果:最佳脱色工艺为pH 3.0,活性炭加入量为0.01 ***-1,脱色温度为40℃,脱色时间为20 min。结论:优选得到的提取工艺稳定、可行。

摘要：目的:采用星点设计-效应面法优选青天葵中总黄酮的提取工艺。方法:采用星点设计进行实验,以乙醇体积分数、乙醇倍量、提取时间为自变量,总黄酮含量为因变量,对各水平进行多元线性回归及二项式拟合,通过效应面法优化工艺参数,并对预测值和实测值进行比较分析。结果:建立的数学模型复相关系数较高,指标与因素的关系适合采用二项式方程拟合(R2=0.987 0),验证试验结果与模型预测值偏差较小,确定最优提取工艺为30倍量65%乙醇提取2次,每次75 min。结论:该优选工艺简便,可预测性较优,适用于青天葵中总黄酮的开发利用。

摘要：以青天葵全转录组测序获得的142 220条unigene为试材,采用MicroSAtellite(MISA)软件分析青天葵简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)的分布频率和重复基元的类型等特征,利用Primer 5.0对符合鉴定要求的SSR基元进行引物设计,并通过SSRFinder校验SSR引物,以期为青天葵遗传多样性分析、分子标记辅助育种、遗传图谱绘制等种质资源研究提供参考依据。结果表明:在青天葵转录组共检测到分布在5 223条unigene上的5 684个SSR位点,SSR发生频率为3.67%,分布密度为1/13kb。二核苷酸重复为青天葵SSR主要基元类型,其中AG/CT和AT/AT基序出现频率最高,占SSR总数的52.9%。设计筛选得到2 486条SSR引物。青天葵转录组SSR位点出现频率高、类型丰富、多态性潜能较高。

摘要：【目的】以青天葵根状茎诱导的再生球茎作为种胚,考察不同包埋基质对青天葵人工种子萌发率的影响。【方法】采用6因素2水平的正交实验设计考察不同包埋基质:50.0 g/L海藻酸钠、1.0 mg/L 6-糠氨基嘌呤(KT)、0.5 mg/L青霉素、0.3 mg/L赤霉素(GA3)、0.5 mg/Lα-萘乙酸(NAA)、2.0 mg/L 6-苄基嘌呤(6-BA)对人工种子萌发率及生长的影响。【结果】50.0 g/L海藻酸钠+0.3 mg/L GA3+1.0 mg/L KT+0.5 mg/L青霉素的包埋基质组合对青天葵人工种子的萌发率达到85%以上,并且萌发比较整齐,萌发后长势良好。【结论】建立了青天葵人工种子的制作方法,获得了较高的萌发率。

摘要：目的优选青天葵中总游离氨基酸的最佳提取工艺。方法以青天葵中总游离氨基酸提取率为考察指标,在对提取溶剂、提取温度、提取时间、提取次数及料液比进行单因素考察的基础上,采用正交试验设计对工艺参数进行优选,并进行验证试验。结果最佳提取工艺为:料液比为1:20,水浴40℃下浸提1.0h。结论优选得到的提取工艺稳定、可行。

摘要：目的:研究青天葵中总黄酮的最佳提取工艺。方法:以芦丁为对照品,三氯化铝为显色剂,测定波长为406 nm,利用三氯化铝比色法测定青天葵提取液中总黄酮含量,采用单因素考察及正交试验设计法优选青天葵中总黄酮的提取工艺参数。结果:提取方式以回流提取最好,乙醇浓度对青天葵总黄酮的浸出量影响最大,最佳提取工艺为95%乙醇回流提取两次,每次1.0 h,分别加10倍和8倍溶剂。结论:本提取工艺简单、合理、稳定,重复性好,可为青天葵中总黄酮提取工艺的确定提供参考依据。

摘要：以青天葵Nervilia fordii(Hance)Schltr.的新鲜叶片为试材,对青天葵原生质体的制备分离技术进行研究。用不同浓度的甘露醇溶液处理青天葵叶片下表皮细胞,进行细胞质壁分离试验,确定青天葵叶片细胞的等渗浓度;采用正交设计研究酶解法制备青天葵叶片原生质体的最适合纤维素酶浓度、离析酶浓度及酶解时间。结果表明,青天葵叶片细胞的等渗浓度为11%甘露醇;采用1.0%纤维素酶R-10+0.6%离析酶R-10的混合酶液酶解青天葵叶片12 h能达到很好的分离效果,获得高质量的原生质体。