摘要：目的 建立一种快速、特异、灵敏地鉴定青鱼物种的方法。方法 以青鱼线粒体16SrRNA基因的保守序列设计特异性crRNA,并根据crRNA设计重组酶介导等温扩增(recombinase-mediatedisothermal amplification,RAA)引物;建立青鱼的RAA-CRISPR/Cas12a快速鉴定方法,并对该方法的检测时间进行优化;同时,评估该方法的特异性和灵敏度,并对青鱼及其近缘物种的市售样品进行检测。结果 该方法仅需25 min完成检测;对青鱼物种的鉴定表现出显著的特异性,并对其近缘物种如草鱼、赤眼鳟、鳡鱼、倒刺鲃的检测结果均呈阴性;方法灵敏度为1.0×10-3ng/μL(以基因组DNA计);与DNA条形码技术相比,该方法在市售样品的检测结果上表现一致。结论 建立了青鱼物种的RAA-CRISPR/Cas12a现场快速检测方法,该方法具备快速、特异、灵敏的特点,为水产市场或野外环境中快速检测青鱼物种提供了技术手段。

摘要：【目的】开展青鱼γ-干扰素（IFN-γ）基因的克隆、结构特征与表达谱分析研究。【方法】采用cDNA末端快速扩增技术获得了青鱼（Mylopharyngodon piceus）IFN-γ基因cDNA的5′和3′末端序列,然后根据其末端序列设计特异性引物,扩增得到青鱼IFN-γ基因cDNA全长序列,对其序列和编码氨基酸序列进行生物信息学、同源性比较及系统进化树分析,同时对其在青鱼各组织中的表达进行分析。通过构建真核表达载体,将其转染青鱼鳍条组织细胞进行表达分析。【结果】青鱼IFN-γcDNA全长为895bp,其开放阅读框大小为549bp,编码182个氨基酸。氨基酸序列比对分析结果显示,青鱼IFN-γ与人、鸡、鼠IFN-γ的序列相似性仅为1.5%~7.7%,与其他鱼类IFN-γ序列相似性较高,为16.3%~92.9%。青鱼IFN-γ分子N末端包含1个信号肽序列、C末端有IFN-γ特征序列（[I/V]-QX-[K/Q]-A-X2-E-[L/F]-X2-[I/V]）以及核定位基序（RRRR）。青鱼IFN-γ蛋白二级结构与高等脊椎动物IFN-γ类似,包含7个α螺旋结构。经Poly I：C诱导后发现,IFN-γ在青鱼头肾、肾、脾、皮肤和鳃组织中表达显著上调,最高的为头肾,其次为脾、皮肤、鳃和肾,而在心脏和脑组织中无显著变化。青鱼γ-干扰素真核表达质粒在青鱼鳍条组织细胞中成功表达IFN-γ。【结论】成功克隆了青鱼IFN-γ基因cDNA,经Poly I：C诱导后,该基因在头肾中上调倍数最为显著,青鱼γ-干扰素在体外获得表达。

摘要：2011年8月江苏常州市武进区前黄镇某养殖场养殖的青鱼出现大量死亡,症状主要表现为病鱼口腔、头部、眼眶、鳃盖边缘、鳍条基部及鱼体尾柄处充血,肛门红肿。解剖后,可见肠道内无食物,并充血发红,腹腔内有的有淡黄色积液,肝胰脏呈紫红色、胆囊肿大。从患病青鱼肝脏、血液中分离到大量优势生长的细菌。人工感染试验证实分离菌(WJ110801-1)对健康青鱼具有很强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等表型生物学特征检验、毒力因子检测、胞外酶分析及药敏试验,同时应用分子生物学方法测定了代表菌株的16S rRNA基因序列。结果显示,病原菌进化树与嗜水气单胞菌同源性最高,在99%以上;结合分离菌的表型及分子生物学分析,判定该菌为气单胞菌属(Aeromonas)的嗜水气单胞菌(***)。气溶素Aer和不耐热性细胞肠毒素alt是嗜水气单胞菌主要的毒力相关因子,利用设计的两对特异性引物对进行Aer和alt基因的PCR扩增,分离菌可以扩增出大小分别为280 bp的和250 bp的基因片段,表明本次分离的病原嗜水气单胞菌具有气溶素和细胞肠毒素毒力因子;胞外酶分析显示,分离菌具有淀粉酶、DNA酶、脲酶、明胶酶活性。分离菌进行药敏试验结果表明,供试37种抗生素中,氨曲南、氟苯尼考、庆大霉素等12种抗生素抑菌效果显著。文章报道了病原嗜水气单胞菌引起常州青鱼大量死亡,并针对病原做了详细的研究,对青鱼的疾病防控和健康养殖具有重要的参考意义。

摘要：本试验旨在研究不同养殖密度下牛磺酸对青鱼幼鱼生长、免疫及抗胁迫能力的影响。以初重为(2.50±0.02) g的青鱼幼鱼为研究对象,采用双因素试验设计(牛磺酸添加量×养殖密度),设置2个牛磺酸添加量[0(不添加)、0.10%(添加)]和3个养殖密度[50(低密度)、100(中密度)、200尾/网箱(高密度)],共形成6个处理,每个处理3个重复,在水库网箱(1.5 m×1.5 m×1.5 m)中养殖,养殖试验持续16周,分别在第8、16周采样。结果显示:同一牛磺酸添加量下,青鱼幼鱼的增重率(WGR)随着养殖密度的升高呈下降趋势,饲料系数(FCR)的变化趋势则与其相反,在第16周时,牛磺酸添加量为0时高密度组的FCR显著低于低、中密度组(P0.05)。在第8周时,随着养殖密度的升高,血清中免疫球蛋白M(IgM)含量有下降的趋势,丙二醛(MDA)含量有上升的趋势;在同一养殖密度下,饲料中添加牛磺酸可提高第16周时血清中IgM含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;在第8周时,牛磺酸和养殖密度对血清中溶菌酶(LSZ)活性有显著的交互作用(P<0.05)。在第8周时,饲料中添加牛磺酸可显著降低高密度组血清中皮质醇(COR)的含量(P<0.05);在第16周时,牛磺酸添加量为0时中密度组血清中甘油三酯(TG)含量显著低于低密度组(P<0.05),牛磺酸添加量为0.10%时中、低密度组血清中TG含量显著低于高密度组(P<0.05)。饲料中添加牛磺酸可不同程度提高各密度组血清中COR含量,且低密度组血清中COR含量显著提高(P <0. 05)。牛磺酸和养殖密度对血清中TG含量有显著的交互作用(P <0.05)。综上所述,在本试验条件下,养殖密度在100尾/网箱时最适合青鱼幼鱼生长,养殖密度升高到200尾/网箱时会使青鱼幼鱼生长减慢,免疫力下降,抗氧化能力降低;饲料中添加0.10%牛磺酸能够提高青鱼幼鱼的生长性能和免疫力,且在养殖密度为200尾/网箱时效果最好,并有利于缓解前期高密度养殖引起的慢性胁迫反应。

摘要：采用RT-PCR方法，以青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼肌肉提取总 RNA 为模板，运用 GenBank中BLAST 同源性搜索，寻找亲缘关系相近的鱼类基因序列，采用Primer5设计简并引物，进行 H2A N-端序列扩增，通过胶回收和连接，然后转化到载体中进行克隆测序，分别获得青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼组蛋白 H2A N-端基因序列，长为364 bp ，分析发现均属于不稳定蛋白质，等电点为10．48～11．02，平均亲水性为0．179～0．264。序列同源性比对结果显示，青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼同狭孔金线鲃和斑马鱼基因H2A编码蛋白质同源性极高，达到85％以上，与其他物种同源性较低，其中狭孔金线鲃与青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼的亲缘关系比斑马鱼更近，分子系统学分析也支持这一结果。青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼H2A衍生抗菌肽与庸鲽 Hipposin抗菌肽同源性极高，不仅存在碱性氨基酸，还存在酸性氨基酸。组蛋白 H2A N-端可衍生 Hipposin类抗菌肽，均为阳离子α螺旋结构抗菌肽。

摘要：青鱼(Mylopharyngodon piceus)是中国最为重要的淡水养殖鱼类。开发青鱼的微卫星标记能为青鱼的遗传多样性分析提供更多工具。本研究使用磁珠富集法,利用生物素探针(CA)10和(GACA)6,富集得到青鱼基因组微卫星片段,进一步通过设计微卫星引物检验其在青鱼原种群体中的有效性和多态性水平。结果显示,所构建文库中849个克隆含有微卫星序列,通过利用PCR技术在吴江原种青鱼36个个体中进行多态性筛选,获得了25个多态性微卫星位点。其平均等位基因数(Na)和有效等位基因数(Ne)分别为7.08和3.526,平均观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)分别为0.602和0.619,平均多态信息含量(PIC)为0.568。其中,Mp23、Mp27和Mp35这3个位点极显著偏离哈迪-温伯格平衡(P <0.01)。本研究开发的微卫星标记能为青鱼种质资源的评价和保护等研究提供工具。

摘要：设计5个饲料蛋白水平(30%、33%、36%、39%和42%)和2个脂肪水平(6%和9%)的5×2的因子试验,配制10种试验饲料,分别饲喂10组三重复平均体重为95.5 g的二龄青鱼70d,以探讨不同蛋白和脂肪水平对青鱼生长和体组成等的影响。结果表明:鱼体增重随饲料蛋白水平从30%提高到39%不断增加(P0.05);饲料系数随饲料蛋白水平从30%提高到39%而不断降低(P0.05)。饲料脂肪水平、饲料蛋白与脂肪的交互作用对鱼体增重、饲料系数、摄食率和蛋白质效率也均无显著影响(P>0.05)。摄食蛋白水平为30%和33%饲料的青鱼与摄食蛋白水平36%—42%饲料的青鱼相比,有较低的水分和较高全鱼脂肪(P<0.05)。青鱼脏体比和肌肉粗脂肪含量均随着饲料中蛋白水平的提高呈降低的趋势。摄食脂肪水平为9%的饲料的青鱼较摄食脂肪水平为6%的饲料的青鱼,有较高脏体比、全鱼脂肪含量和肌肉粗脂肪含量(P<0.05)。上述结果说明,青鱼摄食低蛋白和高脂肪的饲料造成过多的体脂积累。在试验条件下,青鱼大规格鱼种饲养阶段适宜的饲料蛋白和脂肪水平分别为占干饲料的40%和6%。

摘要：用添加或不添加1000（IU／kg饲料）酸性植酸酶、4种磷酸二氢钙用量（0、5、10和15g/kg饲料）设计配方，制成8种试验饲料，开展为期8周的青鱼饲养试验。结果表明，青鱼摄食无植酸酶、加15g／kg磷酸二氢钙的饲料（饲料4）和有植酸酶且磷酸二氢钙用量为10～15g／kg的两种饲料（饲料7、8）后，鱼体增重和鳞片磷含量显著高于其它组，而饲料系数则较低，鱼体水分升高，脂肪降低。饲料中磷酸二氢钙用量为0～10g／kg时，添加植酸酶能使饲料磷在鱼体内的积累率显著高于其它试验组（P〈0．05）。试验鱼摄食无植酸酶和磷酸二氢钙的试验饲料（饲料1）后，其肌肉和鳞片的灰分含量、鳞片磷含量显著低于其它各组（P〈0．05）。青鱼摄食无植酸酶但磷酸二氢钙用量为0或5g／kg的试验饲料（饲料1和饲料2）和摄食有植酸酶但不加磷酸二氢钙种试验饲料（饲料5）后，全鱼磷含量显著低于摄食有植酸酶且饲料中磷酸二氢钙用量为5～15g／kg的3个试验组（P〈0．05）。

摘要：以柠檬酸为脱钙剂,在单因素实验的基础上,引入星点设计-响应面优化法,考查料液比、柠檬酸浓度及脱钙时间3个因素对青鱼鱼鳞脱钙率的影响,建立了各因素与鱼鳞脱钙率关系的数学回归模型.结果显示,青鱼鱼鳞最佳脱钙工艺为:柠檬酸浓度为4.77%,提取时间为77.32min,料液比为15.80,最佳脱钙率为76.46%.

摘要：以抗坏血酸－２－硫酸酯作为青鱼鱼种饲料中的维生素Ｃ源，设计一个六水平的单因子试验。经三个月的饲养，各组试验鱼于二周后表现出运动迟缓，脊柱弯曲，肌肉、皮肤、口、鳍等出血症状；定期测定各组鱼的大脑、皮肤、肌肉、肝脏、肾脏中维生素Ｃ的含量，并对各次测定时的数据进行统计分析，发现这些组织中维生素Ｃ的含量在各组间均无显著差异，表明抗坏血酸－２－硫酸酯在青鱼体内没有发挥维生素Ｃ的作用。青鱼在生长过程中必须依赖食物提供维生素Ｃ，但不能利用抗坏血酸－２－硫酸酯。