摘要：目的 对碱性成纤维细胞生长因子（basic　fibroblast growth factor,bFGF）增强重组人骨形态发生蛋白-2（recombinant human bone　morphogenetic protein-2,rhBMP-2）诱导成骨能力的剂量依赖性进行研究。方法280只BALB/c小鼠随机分为8组,每组35只,实验组rhBMP-2的剂量均为0.5mg,bFGF的剂量分别为0、2、10、40、80、300、500活性单位（IU）;设立单纯牛松质骨载体组为对照组。按实验设计,分别将rhBMP-2混悬液及bFGF-PVP溶液与牛松质骨载体充分混匀,负压下真空抽吸,冻干。将复合植骨材料植入小鼠右侧股部肌袋内,各组分别于术后第3、5、7、9、14、21d六个时间点取材,进行组织学、X线分析以及钙含量测定,观察各组的诱导成骨情况。结果（1）bFGF剂量为10～80IU时,间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成均早于其它各组,成骨量多于其它各组,组织钙含量明显高于其它各组（P0.05）,提示此剂量bhBMP-2的诱导成骨能力无明显影响。（3）bFGF剂量为500IU时,术后第21d,仅1例标本可见散在的极少量新骨形成。

摘要：目的探索能够在短期内有效提高骨质疏松椎体骨强度的局部治疗方法。方法采用卵巢切除法（OVX）对6只成年雌性绵羊去势，低钙饲养1年后，经双能X线吸收骨密度测量仪检测后确定建立骨质疏松模型。采用拉丁方设计方案，通过经椎弓根注射途径，分别在每只动物的L4～L6注射三种药物：实验组A注射20mgbBMP／FS，对照组B注射20mg bBMP，对照组C单纯注射FS。L3椎体设为空白对照组D。术后3个月，采用骨密度测量仪和MicroCT对绵羊腰椎骨密度及骨小梁微观结构进行分析比较。通过轴向加压实验对腰椎标本进行生物力学测定，对椎体力学性能进行评估。结果绵羊去势1年后，腰椎骨密度平均下降20．6％，动物模型成功建立。接受实验处理3个月后，实验组A骨密度（1．334g／cm^2）明显高于对照组B、C及D组骨密度（1．139g／cm^2，1．163g／cm^2和1．177g／cm^2）。MicroCT分析表明：实验组骨小梁的密度、连接率均显著高于对照组。生物力学研究表明实验组A最大压缩应力、最大压缩应变、能量吸收值及骨质弹性模量均明显高于对照组B、C及D组。结论bBMP复合纤维蛋白胶可以促进骨小梁的改建，改善骨小梁的三维结构，增加椎体的骨密度及骨强量，可以作为局部治疗脊柱骨质疏松的新型方法之一。

摘要：目的研究腺病毒载体介导的骨形态发生蛋白9(BMP-9)对小鼠永生化颅骨间充质祖细胞(i CAL)成骨分化的诱导作用。方法以i CAL为模型,设置绿色荧光蛋白(GFP)对照组和BMP-9诱导组,于诱导后的3、5、7 d对早期成骨分化指标碱性磷酸酶(ALP)活性进行定性和定量检测;于诱导后的14 d通过茜素红染色检测骨钙结节形成;荧光定量PCR法和Western印迹检测成骨细胞分化标志基因Runx2、OCN表达情况。结果 BMP-9诱导组细胞内ALP活性高于GFP对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);BMP-9诱导组形成较多的钙盐结节沉积;荧光定量PCR检测结果显示诱导组中Runx2、OCN的mRNA表达量明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05),Western印迹检测3 d Runx2蛋白表达上调,5 d OCN蛋白表达上调。结论 BMP-9促进小鼠永生化i CAL成骨分化。

摘要：目的对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱导成骨能力的量效关系进行研究。方法280只BALB/c小鼠采用掷硬币方法随机分为8组,每组35只,实验组rhBMP-2的剂量均为0.5mg,bFGF的剂量分别为0,2,10,40,80,300,500活性单位(IU);设立单纯牛松质骨载体为对照组。按实验设计,分别将rhBMP-2混悬液及bFGF-PVP溶液与牛松质骨载体充分混匀,负压下真空抽吸,冻干。将复合植骨材料植入小鼠右侧股部肌袋内,各组分别于术后3,5,7,9,14,21d共6个时间点取材,进行组织学、X线分析以及钙含量测定,观察各组的诱导成骨情况。结果①bFGF剂量为10～80IU时,间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成均早于其他各组,成骨量多于其他各组,组织钙含量明显高于其他各组(t=4.44,P<0.05),提示此剂量bFGF使rhBMP-2的诱导成骨能力明显增强。②bFGF剂量为0,2,300IU时,各组在间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成以及组织钙含量方面差异均无显著性意义(t=0.73,P<0.05),提示此剂量bFGF对rhBMP-2的诱导成骨能力无明显影响。③bFGF剂量为500IU时,术后21d,仅1例标本可见散在的极少量新骨形成,其组织钙含量明显低于其他各组(t=6.15,P<0.05),提示此剂量bFGF明显抑制了rhBMP-2的诱导成骨能力。④术后21d,单纯松质?

摘要：目的构建携带四环素真核诱导表达系统(Tet-on)调控的人骨形态发生蛋白2(h BMP-2)慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),为骨缺损修复提供可控的成骨活性细胞。方法设计目的基因h BMP-2引物,将扩增纯化的目的基因h BMP-2定向克隆至携带Tet-on的慢病毒GV347载体上并测序鉴定产物。h BMP-2-GV347质粒、空载的GV347质粒分别与辅助质粒共感染293T细胞以收获慢病毒浓缩液。用h BMP-2-GV347慢病毒转染大鼠BMSCs,得到h BMP-2阳性表达细胞,探索转染最佳感染复数(MOI)。用CCK8法比较BMSCs转染前后的增殖活性;强力霉素(DOX)诱导打开Tet-on,real-time PCR、Western Blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染后各组BMSCs中BMP-2蛋白及RNA的表达情况。结果 PCR后得到目的基因h BMP-2,定向克隆至携带Tet-on系统调控的GV347质粒上,经酶切后电泳、测序结果证实成功构建携带可调控系统的h BMP-2-GV347质粒。h BMP-2-GV347质粒与空载GV347质粒分别感染293T细胞后获得h BMP-2-GV347慢病毒浓缩液。在DOX诱导下,h BMP-2-GV347慢病毒载体在293T细胞内表达BMP-2蛋白。h BMP-2-GV347慢病毒载体转染最佳MOI值为9,且转染后的BMSC细胞增殖能力较普通BMSC强,并在DOX浓度为10μg/ml诱导下稳定表达BMP-2蛋白和RNA。结论本研究成功构建携带Tet-on系统调控h BMP-2慢病毒表达载体,转染BMSCs后在DOX调控下可持续高效表达BMP-2蛋白。