摘要：背景:以往的研究表明人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)能够有效促进细胞外基质合成,修复受损的椎间盘基质,恢复椎间盘高度。因此有希望用于控制和逆转椎间盘退变。然而重组蛋白半衰期短,生物学活性低,退变椎间盘中很难保持骨形态发生蛋白7浓度。基因治疗能够有效预防这些缺陷。目的:观察人骨形态发生蛋白7基因转染对原代培养的兔髓核细胞生物学活性的影响,为人骨形态发生蛋白7基因治疗椎间盘退变的体内实验研究奠定基础。设计、时间及地点:随机对照,细胞学体外实验。于2005-12/2006-09在解放军第二军医大学长海医院全军胸心外科研究所实验室完成。材料:4周龄新西兰大耳白兔6只,体质量约500g。Ad-hBMP7由长海医院胸心外科研究所构建。方法:麻醉后处死白兔,提取髓核,依次经过链霉蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和Ⅱ型DNA酶在37℃条件下消化4h,细胞接种于培养皿内,孵箱内培养,7d后每周更换培养液2次。将细胞随机分为3组,用整合有人骨形态发生蛋白7基因的腺病毒感染髓核细胞,整合有Lac-Z基因的腺病毒感染的髓核细胞以及未转染的髓核细胞作为对照组。主要观察指标:以反转录-聚合酶链反应和Western-blot的方法在不同水平检测其表达情况,以四甲基偶氮唑盐的方法观察其对细胞增殖能力的影响,以改进的二甲基亚甲蓝色比色法和ELISA法观测人骨形态发生蛋白7基因转染对细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原能力的影响。结果:鉴定确定人骨形态发生蛋白7基因为正向插入腺病毒载体,无突变。原代培养的兔髓核细胞形态与文献报道一致。腺病毒载体介导的人骨形态发生蛋白7基因能够高效转染髓核细胞,并表达人骨形态发生蛋白7,同时促进了髓核细胞增殖以及合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原,较对照组有显著性差异(P<0.05)。结论:腺病毒介导的人骨形态发生蛋白7基因具有逆转兔椎间盘退变的能力。

摘要：肾纤维化（renalfibrosis，RF）是所有原发性及继发性慢性肾脏疾病发展到慢性肾衰竭的最终阶段和病理基础，包括肾小球的硬化和肾间质的纤维化。在RF发生、发展过程中有许多细胞因子参与，包括促纤维化细胞因子和抗纤维化细胞因子。前者包括转化生长因子B1（transforminggrowthfactorB1，TGF-β）、血管紧张素、内皮素、血小板源生长因子、结缔组织生长因子等。后者包括骨形态发生蛋白7（bonemorphorgeneticprotein7，BMP-7）、肝细胞生长因子、基质金属蛋白酶等。TGF-β是迄今已知作用最强的一种促肾纤维化的细胞因子，具有调节细胞的增殖、分泌、迁移和凋亡等多种生物学活性。BMP-7是一个重要的抑制肾纤维化的细胞因子，具有拮抗TGF-β致纤维化作用。近年来，BMP-7在肾纤维化中的作用日益受到重视。以BMP-7为靶点的中医药改善肾纤维化研究取得了一定的成果。

摘要：目的:采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)的表达,观察BMP7基因沉默对人肝癌Hep G_2细胞增殖和迁移的影响.方法:设计并化学合成针对BMP7的3对小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),使用Trans Lipid&#174;HL Transfection Reagent瞬时转染人肝癌Hep G_2细胞,并设正常对照组、Negative-si RNA组及BMP7-si RNA-1、BMP7-siRNA-2、BMP7-siRN A-3转染组.运用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)和Western blot法分别从m RNA和蛋白水平检测Hep G_2细胞中BMP7的表达变化,选取沉默效果最明显的si RNA片段进行后续实验.采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3)表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.结果:RT-PCR和Western blot结果显示,BMP7-s i R N A-3转染组B M P 7抑制效果最明显(P<0.01),选取BMP7-si RNA-3转染组进行后续实验.MTT比色法显示,转染后48,72 h细胞生长增殖均受到抑制(P<0.01).Transwell迁移实验显示,转染24 h后,BMP7-si RNA-3转染组Hep G_2细胞穿膜数均明显低于正常组和Negative-si RNA组(P<0.01).Western blot检测发现BMP7-si RNA-3组比对照组的细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达增加(P<0.01),Bcl-2表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测发现转染后48 h,BMP7-si RNA-3组Hep G_2细胞被阻滞在G_2期(P<0.01).结论:si RNA介导BMP7基因沉默对人肝癌H e p G 2细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G_2期.