摘要：目的 :构建携带间隙连接蛋白connexin 4 3(Cx 4 3)cDNA的真核表达载体 ,转染骨髓基质干细胞 ,观察间隙连接蛋白Cx 4 3在骨髓基质干细胞中的过量表达 .方法 :目的基因Cx 4 3cDNA在大肠杆菌中扩增后连入真核表达载体pcD NA3.0 ,转染大鼠骨髓基质干细胞 ,用G4 1 8筛选得到Cx 4 3基因高表达的细胞 ;对照组为pcDNA3.0直接转染骨髓基质干细胞 .结果 :酶切电泳结果显示按设计构建的载体pcDNA3.0 Cx4 3,经G4 1 8筛选得到不同抗性的骨髓基质干细胞 ,免疫细胞化学显示有Cx 4 3蛋白的表达 .结论 :Cx 4 3可以在骨髓基质干细胞中表达 .

摘要：背景:组织工程技术的快速发展为骨缺损完全再生修复带来了新的希望,种子细胞的快速扩增是其中的关键问题之一。目的:观察人间充质干细胞传代培养时,细胞种植密度对间充质干细胞增殖及成骨诱导分化影响。设计:重复测量设计。单位:解放军第三军医大学细胞培养室和检测分析室。对象:实验于2003-01/2004-03在解放军第三军医大学的创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室完成。从5例男性健康志愿者髂骨骨髓中分离扩增的干细胞。方法:将第2代间充质干细胞以8×103/cm2,3×103/cm2,8×102/cm2密度接种,分析其生长曲线,并扩增培养18d,记录细胞扩增数量,再分析扩增后细胞的生长曲线和成骨诱导能力。主要观察指标:①不同种植密度下细胞生长曲线。②碱性磷酸酶染色和骨钙素的免疫组化染色结果。结果:人骨髓间充质干细胞阴性表达碱性磷酸酶、CD34;在8×103/cm2种植密度下,细胞倍增时间40h,18d后细胞数量扩增(51±13)倍;在3×103/cm2种植密度下,细胞扩增(28±6)倍;在8×102/cm2种植密度下,细胞总数仅增加(5±3)倍。在低密度下获得的细胞增殖能力强于高密度组,两组细胞均具有成骨诱导能力。结论:种植密度对间充质干细胞增殖有明显影响,快速扩增间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞,宜选择8×103/cm2种植密度。

摘要：背景:在脂肪组织工程的研究中,若将种子细胞与支架材料复合后移植,则此组织工程脂肪将可替代颗粒脂肪。肝细胞生长因子可以促进血管生成、减少纤维组织增生。目的:观察肝细胞生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞对大鼠组织工程脂肪移植存活的影响。设计、时间及地点:随机区组设计的动物实验,于2006-08/2007-07在解放军兰州军区兰州总医院医学科学实验中心完成。材料:纳入Wistar大鼠用于分离、培养骨髓间充质干细胞及植入细胞-支架复合物。方法:①分离培养雄性大鼠骨髓间充质干细胞,诱导成脂,携带绿色荧光蛋白基因及肝细胞生长因子基因的重组腺病毒毒株分别转染脂肪细胞,流式细胞仪测定转染效率,应用酶联免疫吸附试验法测定培养上清中肝细胞生长因子的表达,将脂肪细胞接种于聚乳酸聚乙醇酸共聚物支架。②将75只Wistar雌性大鼠按随机数字表法分为3组:脂肪细胞组、Ad-肝细胞生长因子转染组及Ad-绿色荧光蛋白转染组分别将脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物、转染肝细胞生长因子基因脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物、转染绿色荧光蛋白基因脂肪细胞-聚乳酸聚乙醇酸共聚物移植于大鼠腿部肌肉之间。主要观察指标:移植后3,7,14,28,60d,每组各取5只大鼠麻醉后处死,取出移植物。电镜观察;并行苏木精-伊红、油红O、Masson’s染色,观察病理改变;同时用免疫组织化学法检测组织中肝细胞生长因子表达,观察并计数血管生成。结果:①骨髓间充质干细胞来源的脂肪细胞胞浆内富含丰富的脂滴,重组腺病毒感染复数=100时,携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒株转染脂肪细胞效率可达64.39%。②移植3,7,14d时,Ad-肝细胞生长因子转染组移植物中肝细胞生长因子的表达高于其他组(P<0.05),且3d达到高峰。③移植3,7,14,28,60d时,Ad-肝细胞生长因子转染组移植物中血管生成高于其他组(P<0.05),且7d时血管增加的幅度最大。④移植28,60d时,Ad-肝细胞生长因子转染组坏死程度均小于其他组,电镜下脂肪细胞也多于其他组。结论:携带肝细胞生长因子基因的脂肪细胞在移植物中能够表达肝细胞生长因子,促进移植组织工程脂肪血管生成,进而促进移植组织的成活。

摘要：背景:通过诱导受体产生免疫耐受能够解决移植领域存在的许多问题,如长期应用免疫抑制剂带来的毒副作用,慢性排斥反应等。目的:观察联合应用亚致死量放射线照射、氟达拉滨及骨髓腔内骨髓移植对诱导大鼠同种异体肢体移植产生特异性免疫耐受的影响。设计、时间及地点:随机同期对照动物实验,于2004-01/2008-12在哈尔滨医科大学完成。材料:40只雄性Wistar大鼠随机分成4组:单纯移植组、氟达拉滨组、骨髓移植组、氟达拉滨+骨髓移植组,每组各10只。40只SD大鼠为骨髓移植供体。供体DA大鼠用于皮肤移植实验。方法:制作同种异体右后肢移植模型,单纯移植组仅进行肢体移植;氟达拉滨组在肢体移植前1d,受体给予亚致死量60Co照射及腹腔内注射氟达拉滨50mg/kg;骨髓移植组肢体移植当天受体接受供体骨髓腔内骨髓移植1×1012L-1,10μL;氟达拉滨+骨髓移植组受体联合应用亚致死量照射、注射氟达拉滨及骨髓腔内骨髓移植。主要观察指标:观察移植物排斥反应征象及存活情况,并对氟达拉滨+骨髓移植组产生免疫耐受大鼠进行SD大鼠及DA大鼠皮肤移植及脾细胞中细胞因子mRNA检测。结果:与其他实验组比较,氟达拉滨+骨髓移植组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长(P<0.01)。氟达拉滨+骨髓移植组大鼠仅对第3方DA大鼠的皮肤呈现强烈的免疫反应,移植皮肤初为水疱、渗出,逐渐溃疡、糜烂、焦痂、变黑坏死。与单纯移植组比较,氟达拉滨+骨髓移植组大鼠Th1型细胞因子的表达明显降低,而Th2型细胞因子的表达明显增高。结论:氟达拉滨与骨髓移植联合方案可以诱导大鼠同种异体肢体移植产生特异性免疫耐受。

摘要：背景:软骨组织工程的两个关键问题是种子细胞和支架材料,保证支架材料上有足够数量的功能细胞是体内形成骨和软骨组织的基础。目的:对经体外培养的骨髓基质干细胞与藻酸钙载体及生长因子复合形成的组织工程性骨及软骨进行形态学观察。设计:细胞形态对比,观察12周实验结果。单位:郑州大学骨科研究所,上海第二医科大学骨科实验室。对象:实验于2001-09/2002-06在上海第二医科大学骨科实验室完成。3月龄雄性新西兰大白兔9只,平均体质量3.2kg。方法:复合材料分别为:①藻酸钙。②藻酸钙+骨髓基质细胞。③藻酸钙+骨髓基质细胞+类胰岛素生长因子I。④藻酸钙+骨髓基质细胞+转化生长因子β。⑤藻酸钙+骨髓基质细胞+转化生长因子β+类胰岛素生长因子I。将5种组合注射于同一个体新西兰大白兔背部不同部位皮下组织中,每组各注射2处,共10处,每处0.2mL,分别做好标记。按组分别于术后4,8,12周取材,各时间点处死动物3只,取兔背部皮下增殖物进行骨和软骨组织生成物观察,应用苏木精-伊红、甲苯胺蓝、Masson、番红-O染色技术。主要观察指标:兔背部皮下增殖物的组织学观察。结果:兔背部皮下增殖物的组织学观察结果:4周时可见藻酸钙+骨髓基质细胞+类胰岛素生长因子I、藻酸钙+骨髓基质细胞+转化生长因子β、藻酸钙+骨髓基质细胞+转化生长因子β+类胰岛素生长因子I组有岛状软骨样组织形成,软骨细胞包绕于碱性基质中,8周时复合物中形成大量的类软骨结构,并部分向骨组织转化,细胞周围有大量的基质分泌,部分软骨细胞呈簇状分布。12周时藻酸钙+骨髓基质细胞+转化生长因子β+类胰岛素生长因子I组软骨组织基本转变为骨组织,并开始吸收。结论:骨髓基质细胞-藻酸钙-生长因子复合材料能形成软骨及骨组织。藻酸钙适合骨髓基质细胞生长,是一种良好的骨及软骨组织工程载体。

摘要：背景: 复合材料作为种子细胞的载体修复骨缺损较传统的自体骨移植具有创伤小、不存在供区限制的优点。目的: 观察由磷酸三钙人工骨 /透明质酸 /I 型胶原复合物作为诱导后的骨髓基质细胞载体修复兔桡骨骨缺损的能力及作为自体骨移植替代物的可能性。设计: 随机对照实验。单位: 武汉大学人民医院骨科。材料: 实验于 2003- 09/2004- 06 在武汉大学人民医院骨科进行。选择 6个月新西兰大白兔 31 只, 平均体质量 1.5～2.0 kg。随机分为对照组和实验组。对照组 4 只, 实验组 27 只。方法: ①31 只大白兔均做骨髓基质细胞体外诱导培养, 观察诱导后的骨髓基质细胞碱性磷酸酶染色的阳性细胞率。扫描电镜观察磷酸三钙人工骨 / 透明质酸 /Ⅰ型胶原复合物结构。②手术制造桡骨 2 cm 长骨缺损, 8周后实验组一侧以磷酸三钙人工骨 / 透明质酸 /Ⅰ型胶原复合物 / 骨髓基质细胞植入兔桡骨骨缺损模型处, 另一侧植入自体骨; 对照组空白植入。③实验组所有动物随机在术后 4, 8, 12 周 3 个时间点处死, 4、8 周各6 只, 12 周 15 只; 对照组动物在 12 周处死。分别进行大体观察、X 射线摄片、HE 染色、无机质含量测定、12 周时标本进行成骨面积及生物力学测试, 比较各组修复骨缺损的效果。主要观察指标: 诱导后的骨髓基质细胞碱性磷酸酶染色的阳性细胞率;磷酸三钙人工骨 / 透明质酸 /Ⅰ型胶原复合物结构; 大体观察; X 线摄片; HE 染色及无机质含量测定; 成骨面积及生物力学测试。结果: 31 只大白兔均进入结果分析。①诱导培养后碱性磷酸酶阳性细胞率达 75%。②扫描电镜观察显示 3 种材料均匀分布, 有大量的微孔结构。③复合物组与自体骨组 12 周时成骨面积分别为 (72.5±3.6)%;(76.7±6.2)%, (P > 0.05) 。④复合物组与自体骨组最大弯矩分别为(521.0±61.1) , (554.3±53.3) N·mm; 施力点最大位移分别为(0.816±0.071), (0.870±0.103) mm, 差异无显著性意义(P>0.05)。⑤复合物于4、8 和12周无机质含量测定分别为75% ,57% ,42%, 表明材料中的无机成分随时间的延长逐步降解。⑥大体观察X线片、组织病理学检查、生物力学测试结果显示, 随着时间的延长自体骨组和磷酸三钙人工骨 / 透明质酸/Ⅰ型胶原复合物/骨髓基质细胞填充组能修复骨缺损, 对照组不能修复。结论: 磷酸三钙人工骨/ 透明质酸/Ⅰ型胶原 /骨髓基质细胞复合物与自体骨具有相同的骨损修复能力, 可作为自体骨移植的替代物。

摘要：为了研究阿特拉津对雏鸡的急性毒性作用和致突变作用,本试验运用Weil′s方法设计试验,测得阿特拉津对雏鸡的半数致死量(LD50),在此基础上,将雏鸡分为试验组(高、中、低浓度3组)、阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(环磷酰胺),连续染毒9d后采样,取胸骨骨髓,检测骨髓细胞微核率。结果表明,LD50为451mg/kg体重,试验组骨髓细胞微核率与阴性对照组比较有极显著性差异(P<0.01),且呈剂量-效应关系,表明阿特拉津对雏鸡骨髓细胞突变有诱变作用。

摘要：背景:特异性的供者骨髓造血干细胞输注促进了嵌合体的形成,可以诱导器官移植免疫耐受。然而为达到细胞嵌合进行骨髓移植的预处理毒性大,发生移植物抗宿主反应的风险较高,人们开始寻找一些毒性更小的方案,其中包括免疫抑制剂联合骨髓输注等,尽管动物实验中已有诱导成功的耐受模型,但临床实用的诱导耐受方法则难以突破。目的:以嵌合体理论为基础,分析肾-骨髓联合移植诱导嵌合体形成与免疫耐受的相关性及安全性。设计、时间及地点:对比观察,于1998-01/2005-12在郑州市第三人民医院泌尿外科完成。对象:根据ABO/Rh血型相同及HLA配型原则,将同期等待肾移植的96例女性慢性肾功能衰竭患者分为2组,每组48例。联合移植组患者接受尸体肾、骨髓联合移植;同期接受上述同一供者另一肾脏的尿毒症患者作为对照组。供者为48例健康男性。方法:供者在取肾的同时,采集骨髓加入细胞冷冻保养液,经细胞程序降温至-198℃液氮罐保存。移植后应用大剂量抗人T淋巴细胞免疫球蛋白诱导治疗2周,于肾脏移植后2周实施骨髓细胞回输,输注的单个核细胞数为(0.9～2.5)×108/kg。采用聚合酶链反应方法检测人性别决定基因SRY。抽血检测CD3,CD4,CD8,CD25,以酶联免疫吸附法测定血白细胞介素10、肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子β等血细胞因子质量浓度。主要观察指标:移植后于不同时间点对受体进行嵌合体、淋巴细胞亚群及细胞因子检测。随访观察两组受者的临床移植效果及并发症发生情况。结果:联合移植组嵌合体阳性率显著高于对照组(P<0.05)。随访3年,嵌合体阳性受者和嵌合体阴性受者排斥发生率差异具有显著性意义(13%,35%,P<0.05)。联合移植组呈现免疫抑制状态,未见移植物抗宿主病发生。结论:肾-骨髓联合移植能促进移植后嵌合体的形成,显著降低排斥反应发生率,是一种安全有效的诱导免疫耐受的方法。

摘要：目的 :研究苯与苯 (a)芘对大鼠骨髓细胞的联合毒作用。方法 :采用正交设计试验设计方法安排处理因素苯、苯并 (a)芘及时间 ,每个处理因素取 3个水平各为 0 ,5 ,10 m M;0 ,5 ,10 μM;2 ,4,6h,共 18个试验样本。以流式细胞仪检测各样本的细胞凋亡率。结果 :仅时间因素与苯因素的主效应有统计学意义 ,且苯诱导大鼠骨髓细胞的凋亡效应呈浓度效应和时间效应关系 ,以苯终浓度为10 m M处理 6h的细胞 ,检测凋亡率达 11.5 %。正交分析苯并 (a)芘与苯之间无交互作用。结论 :在本实验研究水平下体外原代培养的细胞 ,苯诱导大鼠骨髓细胞凋亡呈剂量效应关系 ,但未能发现苯并 (a)芘对苯诱导骨髓细胞凋亡效应产生影响。

摘要：【目的】探讨肾气丸各成分不同剂量配比与药效学的关系。【方法】应用均匀设计方法,以原方药味按不同的剂量配比组成6组不同的肾气丸方,观察其对肾阳虚小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、肝脏SOD、肝脏丙二醛(MDA)及骨髓细胞周期的影响。【结果】根据回归方程计算出的肾气丸的最优组合中,桂枝与附子的剂量都较原方有所增大。【结论】适当加大肾气丸方中桂枝与附子的剂量可增强本方抗衰老作用及促进骨髓的造血功能。