摘要：目的 利用实时荧光PCR及高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。 方法 针对广州管圆线虫核糖体RNA基因的内转录间隔区（ITS）序列设计引物，应用实时荧光PCR和高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。并通过检测广州管圆线虫、华支睾吸虫和棘颚口线虫DNA，分析该方法的特异性；分别检测1~10条广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA，分析该方法的敏感性。 结果 该方法能够特异性检测广州管圆线虫幼虫，检测华支睾吸虫和棘颚口线虫时未出现扩增曲线和熔解曲线峰。检测灵敏度可达到1条幼虫。 结论 实时荧光PCR及高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫幼虫具有较好的特异性和敏感性。

摘要：探讨高分辨率熔解曲线(HRM)技术检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的可行性。用传统药物敏感性试验进行结核分枝杆菌链霉素耐药性检测;以Rpsl和rrs的耐药决定区为靶点设计引物进行HRM分析,判断菌株是否对链霉素耐药;以药敏结果为标准,应用SPSS17.0分析两种检测结果之间的符合率;Kappa检验分析两种结果的一致性。药敏结果显示,84株菌株中有20株对链霉素耐药,64株为敏感株;HRM检测结果显示,24株菌株对链霉素耐药,60株为敏感株;以药敏结果为参照,HRM检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的敏感性为75%,特异性为85.9%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有中度一致性。本研究结果表明HRM可快速检测结核分枝杆菌对链霉素的耐药性,具有较好的灵敏度,在耐药结核病的早期辅助诊断方面具有一定的应用价值。

摘要：皮肤癣菌是浅表真菌感染的重要致病菌,常见致病菌种包括红色毛癣菌、趾间毛癣菌、絮状表皮癣菌、犬小孢子菌和内弯小孢子菌。本研究基于实时荧光PCR的高分辨率熔解曲线分析技术,以几丁质合成酶1为目标基因设计扩增引物,对经测序鉴定的上述5种皮肤癣菌进行熔解曲线分析,并在方法建立后,对已鉴定的临床菌株进行验证。实验结果表明,使用该方法上述5种皮肤癣菌均能扩增,并表现出不同的熔解曲线和熔解温度值,可有效区分;对其余对照菌及人基因均无法扩增,特异性为100%;临床菌株的熔解曲线分析结果与DNA测序结果一致。本研究提供了一种快速、准确鉴别5种常见皮肤癣菌的方法,可为临床应用和分子流行病学研究提供参考。

摘要：目的探讨高分辨率熔解曲线（high-resolutionmelting，HRM）分析技术用于citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症（neonatalintrahepaticcholestasiscausedbycitrindeficiency，NICCD）筛查和诊断的可行性。方法根据中国人群SL（225A13基因的热点突变类型（851del4、1638ins23、IVS6＋5G〉A和IVS16ins3kb）设计特异性HRM扩增引物，挑选经测序证实的50名正常对照和20例NICCD患儿，建立和完善HRM检测条件。用优化后的HRM检测方法对171例临床疑似的NICCD患者进行HRM筛查。若受检样本的熔解曲线与阳性质控样品相吻合，则进行DNA测序分析。结果优化后的HRM方法能准确地对50名正常对照及20例NICCD患儿进行基因分型，其灵敏度和特异性均为100％（70／70）。重复实验表明，相同基因型的不同样品HRM熔解曲线完全吻合，重复性好。在171例疑似患儿中，有7例患儿熔解曲线与阳性质控样品基因型相符，其HRM基因分型为：1例851del4纯合突变，1例IVS6＋5G〉A杂合突变，3例851del4杂合突变，1例[IVS6＋5G〉A]＋[851del4]，1例[1638ins23＋IVS16ins3kb]＋[1638ins23]。DNA测序证实了HRM基因分型，准确率为100%。结论HRM技术具有高通量、操作简便、结果准确、重复性好等优点，可对临床疑似的NICCD患儿进行基因筛查和诊断。

摘要：目的基于高分辨率熔解（HRM）技术，建立敏感、经济、快速、适合临床应用的FrO基因rs9930506分型方法，并评价该基因变异与北京居民代谢综合征（MS）的关系。方法参考GenBank的序列，设计rs9930506特异性的C3-spacer封闭的非标记探针，预混LC-Greenplus染料，经PCR扩增和HRM反应，扫描荧光信号并分析基因型。设立酶切法和测序法为方法学对照，评价准确度和可操作性。在北京地区MS患者（500例）和对照组（500例）中应用该方法，探讨rs9930506变异与MS的关系。结果3种方法均能较好实现rs9930506基因分型，HRM法最为简便快速，应答率为100％，以测序法为金标准，抽样准确度为99．3％。MS组中，AA、AG、GG基因型分别有290例、185例和25例，对照组中分别为344例、138例和18例。对照组与HapMap数据库中北京汉族人各基因型分布无统计学差异（P=0．520）并满足Hardy-Weinberg平衡。AA基因型可能降低MS的发生风险（OR=0．626，95％CI=0．483-0．812）。结论Fro基因s9930506AA基因型的携带，可能是北京居民MS的保护因素；基于HRM技术建立的FTO基因rs9930506分型方法快速、准确、经济。

摘要：【目的】定位徐州142无絮(XZ142w)突变体的短绒控制基因n2。【方法】以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)徐州142(XZ142)×XZ142w的F2群体为研究对象,利用108个简单重复序列(Simple sequence repeat,SSR)标记对n2进行初步定位,再根据2个亲本材料中有单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphic,SNP)的差异基因设计50对SNP引物,用高分辨率熔解曲线(High resolution melting,HRM)技术从中筛选在亲本间有多态性的SNP引物,并用于后代的基因分型。【结果】利用108个SSR标记将n2初步定位在26号染色体的20.2c M的遗传区间内;用HRM技术筛选到9对亲本间有多态性的SNP引物,成功实现基因分型;并结合以SSR构建的连锁图谱,将n2的遗传区间缩小为19.5 c M,n2与最近的SNP标记Cricaas20158遗传距离为5.5 c M,且遗传图谱上的标记与四倍体陆地棉测序物理图谱基本一致。【结论】HRM技术可用于棉花中的SNP检测和n2基因的定位。

摘要：目的建立一种基于PCR和在线高分辨率熔解曲线(high-resolution melting curve,HRM)分析工具的检测方法,实现对DNA序列微小差异的快速检测。方法在CRISPR基因编辑检测和基因型鉴定中,采用两步PCR,分别对目的片段进行扩增和富集,并通过免费在线软件对HRM进行分析。结果 HRM分析结果显示,本实验所设计的CRISPR慢病毒系统未能对COS7细胞中的RPE65基因进行有效的基因编辑;而在瘦素突变大鼠的子代基因型中,HRM可以明显区分杂合子和纯合子。结论 HRM能够快速鉴定CRISPR编辑和区分基因型。

摘要：目的探索高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术在检测肺癌组织及血清表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变中的应用。方法收集85例非小细胞肺癌石蜡包埋组织(FFPE)标本及对应的39例血清标本,分别提取DNA,自行设计引物,优化扩增体系,利用HRM技术进行EGFR基因18～21外显子突变检测,对检测出突变阳性的标本扩增片段进行基因测序。统计39例FFPE标本与血清标本突变结果的符合率并分析EGFR基因突变与临床特征的关系。结果 85例FFPE标本中,HRM法检测出EGFR基因突变共48例,总突变率为56.47%,基因测序检测出EGFR基因突变共44例,其中181、9外显子突变类型各一种,基因型分别是G719S和2236-2250Del;20、21外显子突变类型各两种,20外显子突变基因型为插入突变insGGT和无义突变Q787Q,21外显子突变基因型为L861Q和L858R。39例血清与FFPE配对标本,EGFR基因突变阳性标本检出的符合率为92.31%(12/13),阴性标本为100%(26/26)。EGFR突变常发生于女性患者、非吸烟患者、肺腺癌患者(均为P<0.05),临床分期Ⅰ-Ⅱ与Ⅲ-Ⅳ的患者EG-FR基因突变无显著性差异(P=0.159)。结论本研究表明HRM技术能准确检测NSCLC患者组织或血清EGFR基因突变,快速、经济,可有效减少污染,适宜临床推广应用。

摘要：目的探讨高分辨率熔解曲线(HRM)用于RhCE血型基因分型的可行性。方法随机选取无输血史患者300例, 进行RhCE血型血清学表型分型, 从中选出表型为CCee, CcEe, ccEE的患者标本各10例, 共30例;表型CCee的为1组, 表型CcEe的为2组, 表型ccEE的为3组, 互为对照组, 提取基因组DNA, 设计引物3对, 利用HRM基因分型方法对RhCE血型进行基因分型实验。结果 30例标本的HRM基因分型结果与血清学表型一致, 引物对1的HRM可将各组标本中基因型为CC的检出;引物对2的HRM可将各组标本中CC, Cc, cc基因型全部检出;引物对3的HRM可将各组标本中基因型为Ee的检出;在检测过HRM的引物对3实验产物中加入1组单纯PCR扩增产物后再次行HRM检测, 可将各组标本中EE, Ee, ee基因型全部检出。结论高分辨率溶解曲线可用于RhCE血型基因分型。

摘要：为了建立鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株与变异株的高分辨率溶解曲线方法,基于PEDV经典株与变异株在S基因上序列的差异设计1对PCR引物用于RT-PCR扩增,扩增产物通过高分辨率熔解曲线(HRM)分析,建立鉴别PEDV经典株与变异株的PCR-HRM分析方法。通过此方法检测了10份临床样品,PCR-HRM结果表明,4份为PEDV经典毒株,6份为PEDV变异毒株。该方法特异性好,灵敏度高,PCR后无需开盖分析,避免了污染问题,是一种新型的鉴别检测方法。