摘要：目的探索一种能够快速鉴定常见鼠形动物的新型分子生物学方法。方法以线粒体基因组(mt DNA)细胞色素b(Cytochrome b,Cytb)基因为靶基因,根据Gen Bank公布的序列,设计测序引物,扩增5种常见鼠形动物的目的基因并测序。依据测序结果和Gen Bank公布的序列,设计分析引物,进行高分辨率熔解曲线分析。以新鲜提取的基因组DNA为模板,按照1∶10的比例梯度稀释,检测7个浓度梯度,进行敏感性检测。结果测序引物扩增出5种鼠形动物Cytb序列,分析引物扩增出5种鼠形动物的熔解曲线,并可根据曲线鉴别5种鼠形动物的种类,检测灵敏度为10-2ng/μl。结论利用高分辨率熔解曲线分析技术,可以快速准确鉴定5种常见鼠形动物。

摘要：本文利用高分辨率熔解曲线分析结合COLD-PCR建立绵羊骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因低丰度A746G点突变的检测方法,为Fec B基因大面积高通量筛查提供方便快捷和低成本的检测技术。实验分别提取绵羊BMPR-IB基因A746G点突变阳性纯合子和阴性纯合子的基因组,分别PCR扩增223 bp的目的片段,测定浓度和纯度后,分别稀释至0.05 ng/μL,将阳性纯合子用阴性纯合子进行系列稀释作为模板标准品。根据模板标准品序列设计合成3对引物,以标准品为模板进行COLD-PCR,其产物进行高分辨率熔解曲线分析,生成的归一化温度转移差异图(Normlized and Temp-Shifted Differines Plot)即为标准曲线图,作为待测样品Fec B检测的依据,对其可靠重复性做了进一步验证。结果表明:2对引物COLD-PCR HRM标准曲线图曲线分离清晰可靠,检测下限均为0.5%,与传统q PCR HRM相比,灵敏度提高到4倍。本实验建立的绵羊低丰度Fec B基因检测方法可以用于绵羊Fec B基因大面积高通量快速筛查工作。

摘要：利用Vector NTI Advance 11软件分析了NCBI数据库中大菱鲆的12428条EST序列,筛出候选SNP位点;应用高分辨率熔解曲线(HRM)对大菱鲆不同性状群体进行基因分型。结果表明,522个重叠群中共筛出160多个候选SNP位点;设计56对引物用于实验,能扩增出目的片段的引物有37条,合45个位点,成功率为66.1%;设计探针,能与候选SNP位点杂交的探针有13条,杂交率为28.9%。本实验中能成功进行基因分型的位点共有8个,占杂交位点的61.5%,其中有6个为碱基替换型位点,即G-A和C-T各占3个,2个为碱基颠换型位点,即T-G和A-T各占1个。

摘要：氯吡格雷是一种广泛用于预防静脉血栓形成的抗血小板药物。研究表明,携带有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3的病人,其体内代谢氯吡格雷成为其活性形式的能力降低,导致氯吡格雷抑制血小板聚集功能减弱。文章旨在建立一种利用高分辨率熔解曲线分析(High-resolution melting curveanalysis,HRM)技术在闭合单管中同时对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行简便、准确分型的方法。本实验针对两个SNP位点分别设计特异性的HRM引物,并在两个位点引物的5′端分别加上富含AT和GC的序列,保证两个位点的扩增产物熔解峰无重叠。利用HRM技术,快速、灵敏地对64例随机DNA样本的CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行了基因分型,且HRM方法的分型结果与测序验证结果完全一致。因此,利用HRM技术可以实现在闭合单管中简便、准确地对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点同时进行基因分型。该方法有望应用于临床,指导氯吡格雷的个体化用药。

摘要：目的对抑郁症患者DRD2基因外显子进行突变筛查。方法对DRD2基因的9个外显子设计合成15对引物,将238例抑郁症患者分为3组,分别构建3个DNA混合样本(96例、96例与46例)。将1 095例正常对照者分为两组,分别构建2个DNA混合样本(95例和1 000例)。将上述5个DNA混合样本作为DNA模板,先对其进行聚合酶链扩增,用Light Scanner高分辨率熔解曲线系统(HRM)筛查突变并确定TC值;对PCR产物稀释40倍后作为模板进行COLD-PCR扩增后再进行HRM突变检测。结果对患者组与两个对照组熔解曲线逐一对比后未发现患者DRD2基因外显子存在突变。结论抑郁症的病因并非源于DRD2基因外显子的突变。

摘要：目的:建立高分辨熔解曲线分析法(high-resolution melting analysis,HRMA),检测骨髓增生异常综合征(my-elodysplastic syndrome,MDS)患者中SF3B1基因的突变。方法:针对SF3B1基因热点突变位点(密码子E622、H662、K666和K700)设计PCR扩增引物,建立带有温度内标校准品的PCR扩增反应体系,对30例初诊MDS患者的骨髓标本进行PCR扩增,应用HRMA对相应PCR产物进行突变检测,并对HRMA检测结果进行DNA测序验证。结果:HR-MA检测发现2例MDS患者存在异常的熔解曲线,经DNA测序验证1例为K666M杂合子突变,另1例为K700E杂合子突变。所建立的HRMA技术检测SF3B1基因突变的灵敏度为0.05(5%)。结论:成功建立检测SF3B1基因突变的HRMA技术,可快速筛查MDS标本中的SF3B1基因突变。